^(3)H─TdR体内滞留诱发生殖毒性研究

研究了摄入氚标记胸腺嘧啶核苷（^(３)Ｈ－ＴｄＲ）在机体滞留过程诱发的生殖毒性效应。拟合了^(３)Ｈ－ＴｄＲ在睾丸、肝、脾、肾、股骨和血活中的滞留方程通式为：Ｒ（ｔ）＝Ａｅ－λａｔ＋Ｂｅ－λβｔ。比较了在不同组织的快组份和慢组份的有效半减期，估算了在不同脏器部位的累积吸收剂量。^(３)Ｈ－ＴｄＲ可诱发雄性生殖细胞的生殖毒性，表现为显性致死突变和显性骨骼畸形。关于显性致死突变与摄入了^(３)Ｈ－ＴｄＲ放射性活度之间呈正相关。Ｙ＝８０ . ２０Ｉ＋７４．１３；而显性骨骼畸形享与摄入^(３)Ｈ－ＴｄＲ放射性活度间的关系式为：Ｂ＝０．０７９１＋０．１６。

汉防己甲素对人单核细胞样细胞系U937的影响

本文报导中药汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，Ｔｅｔ）对人单核细胞样细胞系Ｕ９３７的形态、细胞化学特性以及增殖分化的影响。经浓度为５×１０－３ｍｇ／ｍｌ的Ｔｅｔ作用５天后，Ｕ９３７细胞的形态、细胞化学特性接近于单核／巨噬细胞。３Ｈ－ＴｄＲ掺入证明Ｔｅｔ对Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ合成有抑制作用。银染核仁组织者区（Ａｇ－ＮＯＲ）显示细胞核内Ａｇ－ＮＯＲ计数亦明显下降。

MTT比色法检测MGC803^T细胞毒效应的研究

用插入突变的膜结合型ＴＮＦ—α基因的重组逆转录病毒载体转染人胃癌细胞ＭＧＣ，获得膜结合型ＴＮＦ—α基因转染阳性的人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３Ｔ）。用ＭＴＴ比色法、３Ｈ—ＴｄＲ释放法检测ＭＧＣ８０３Ｔ及未转染的人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３Ｎ）细胞表面ＴＮＦ—α的细胞毒效应。结果表明，ＭＧＣ８０３Ｔ对鼠纤维肉瘤细胞Ｌ９２９有杀伤作用，而对照细胞ＭＧＣ８０３Ｎ无杀伤作用，说明逆转录病毒介导的膜结合型ＴＮＦ—α基因在人胃癌细胞获得有效表达。二种方法检测ＭＧＣ８０３Ｔ细胞的细胞毒效应获得良好相关性。与３Ｈ—ＴｄＲ释放法相比，ＭＴＴ比色法具有操作简便。

用细胞培养检测抗肿瘤药物敏感性研究中改良MTT光吸收技术与[~3H]-TdR掺入法的比较

应用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收检测法,在体外肿瘤细胞培养中测定肿瘤化疗药物敏感性,并与[~3H]-TdR 掺入法进行平行比较实验。结果表明,改良 MTT 光吸收检测技术具有简便、快速、敏感性强的优点。本法无需接触同位素,安全,经济,便于实验室开展应用。

局部加温对裸小鼠部分器官^(3H)TdR掺入量影响的观察

采用^(3H)TdR掺入法观察用微波局部加温治疗裸小鼠人脑恶性胶质瘤模型后,裸小鼠脾、肠、肝、脑、皮肤、血等主要器官组织细胞DNA合成功能的影响,发现:经44℃、不同的加温时间(10min,20min,30min,40min)1次加温移植于裸小鼠的人脑恶性胶质瘤后,裸小鼠脾、肠、肝、脑、皮肤、血等主要器官组织^(3H)TdR掺入量与未加温的对照组相比无显著性变化,而加温20min,30min和40min三组移植瘤的^(3H)TdR掺入量与加温10min组及对照组相比,有显著性降低。说明局部微波加温治疗肿瘤时,裸小鼠部分主要器官组织细胞DNA合成功能无明显影响,而对肿癌细胞的DNA合成有明显的抑制作用,提示局部微波加温治疗恶性胶质瘤为一种安全而有效的方法。

肝细胞生长因子的部分纯化与活性研究

报告新生牛肝细胞生长因子的提取,Sephadex G-50过柱分离、SDS—凝胶电泳及高效液相色谱分析,结果表明,新生牛肝脏中提取的肝细胞生长因子含有四种组分,分子量(u)分别为21000(Ⅰ),14400(Ⅱ),10000(Ⅲ)及10000以下(Ⅳ)含量各占8.01%,76.09%,15.72%,o.14%。生物活性测定表明,四组分中以分子量14400u(Ⅱ)者刺激肝细胞DNA合成活性最强,其次为Ⅲ,而Ⅰ,Ⅳ组分无或仅有微弱活性。

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究马齿苋总黄酮(Portulaca totalflavone,PTF)对血小板源性生长因子-BB型(PDGF-BB)致血管平滑肌细胞(Vascularsmoothmuscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨其机制。方法:采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF(8、24、72mg/L)对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内[Ca2+]i。结果:PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少(P<0.01);能抑制高K+诱导的VSMC内[Ca2+]i升高(P<0.01)。结论:PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca2+]i有关。

西洋参养阴益气、强身补虚药效机理的探讨

西洋参能显著促进小鼠脾淋巴细胞自发性和ＣｏｎＡ刺激的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入；促进 小鼠淋巴细胞产生白细胞介素－２；显著提升小鼠血清促红细胞生成素水平；

川芎嗪注射液对血管内皮细胞DNA合成的影响

目的 :探讨川芎嗪注射液对血管内皮细胞DNA合成的影响。方法 :采用3H -TdR掺入法 ,测定经川芎嗪注射液作用后体外培养的人脐静脉血管内皮细胞的放射性强度 (CPM )值。结果 :川芎嗪注射液可显著降低血管内皮细胞的CPM值 ,且均呈剂量依赖性。结论 :川芎嗪注射液抑制肿瘤血管生成的作用可能与其抑制血管内皮细胞DNA合成有关。

胡桃楸提取物抗白念珠菌作用的机制研究

目的:探讨胡桃楸提取物的抗白念珠菌作用机制。方法:应用同位素参入技术测定不同浓度的胡桃楸提取物对[3H]-TdR、[3H]-UdR、[3H]-Leu3种同位素前体参入白念珠菌的抑制率。结果:10、20和40μg/ml胡桃楸提取物对[3H]-TdR、[3H]-UdR、[3H]-Leu参入白念珠菌均具有显著的抑制作用,且呈剂量依赖性。各剂量的胡桃楸提取物作用后[3H]-UdR的参入抑制率均显著高于[3H]-TdR的参入抑制率、[3H]-Leu的参入抑制率;而[3H]-TdR的参入抑制率与[3H]-Leu的参入抑制率无显著性差异。结论:胡桃楸提取物抗白念珠菌的作用机制可能是通过抑制白念珠菌的DNA、RNA、蛋白质的生物合成导致菌细胞死亡而起到杀菌作用。

神经生长因子对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :观察神经生长因子对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响 ,探讨其在牙胚生长发育过程中的可能作用。方法 :采用3H -TdR掺入和流式细胞仪分析法。结果 :NGF(1～ 10 0U/ml)可明显促进培养的人牙乳头间充质细胞的3H -TdR掺入率。NGF(10 0U/ml)刺激细胞增殖作用最强。NGF(10 0 0U/ml)抑制细胞的增殖。在NGF(10 0U/ml)作用下 ,细胞S %明显升高 ,细胞增殖指数 (S +G2 M) %也明显增高。结论 :神经生长因子可促进人牙乳头间充质细胞DNA合成 。

血管组织工程生物支架材料细胞生物相容性实验研究

目的采用新方法研究天然生物支架材料胶原/透明质酸膜,明胶海绵的细胞相容性。方法应用WST-1法测定平滑肌细胞与材料的粘附率,增殖力,3H-TDR掺入法测定DNA合成率,BrdU细胞标记免疫组化鉴定,分析组织工程生物支架材料的细胞相容性。结果WST-1法测定,3H-TDR掺入法测定DNA合成率,BrdU细胞标记结果表明:胶原/透明质酸膜与平滑肌细胞的粘附率最高,细胞的增殖和代谢状况较好,明胶海绵较低。结论应用WST-1法测定,3H-TDR掺入法测定DNA合成率,BrdU细胞标记方法研究细胞相容性方法简便可行;天然复合生物材料胶原/透明质酸膜具有较理想的细胞相容性。

白细胞介素对大鼠离体垂体前叶细胞增殖的影响

本工作采用大鼠垂体前叶（ＡＰ）细胞原代培养方法，以３ＨＴｄＲ掺入率反映细胞增殖水平，研究了ＩＬ１和ＩＬ６对ＡＰ细胞增殖的影响。结果表明：（１）ＩＬ１（１－１００ｎｇ／ｍｌ）促进雄性大鼠和雌性大鼠ＡＰ细胞的增殖。（２）低浓度的ＩＬ６（０．１ｎｇ／ｍｌ）抑制雄性大鼠的ＡＰ细胞的增殖，而较高浓度的ＩＬ６（１－１０ｎｇ／ｍｌ）则表现为刺激作用。（３）ＩＬ６（０．１－１０ｎｇ／ｍｌ）促进雌性大鼠ＡＰ细胞的增殖。上述结果说明ＩＬ１和ＩＬ６除直接调控ＡＰ细胞的分泌外，也参与调节ＡＰ细胞增殖活动。

不同时间深低温保存对胸骨组织活性的影响

目的观察不同时间深低温保存对胸骨组织活力的影响。方法切取SD大鼠胸骨后立即放入含有低钾右旋糖酐（LPD）冻存液的冻存管,在程序降温仪降至-80℃后投入液氮,分别保存1、15、30、60、120 d后对胸骨组织进行体外培养,加入3H-胸腺嘧啶核苷（TdR）以做标记,使用β液体闪烁计数器检测组织细胞吸收情况和培养上清中的碱性磷酸酶（ALP）活性。结果与冷冻前比较,低温保存1 d后胸骨组织培养上清中ALP活性开始降低,15 d降至最低,以后基本保持稳定。低温保存1 d后,3H-TdR掺入率降至90.02%。冷冻15 d以后3H-TdR掺入率降至73.9%,以后无明显变化。结论深低温保存后胸骨组织保留70%~80%的活力,损伤主要发生在冷冻早期,ALP活性检测和3H-TdR体外组织培养是测定胸骨组织活力的有效方法。

胰岛素样生长因子Ⅱ对大鼠离体培养黄体细胞孕酮生成的影响

本实验观察了胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）对大鼠离体培养黄体细胞孕酮生成的影响，并对其作用机制进行了探讨。结果显示，ＩＧＦ－Ⅱ能显著地促进大鼠离体培养黄体细胞孕酮生成并呈剂量－效应关系，同时还能促进３Ｈ－亮氨酸（３Ｈ－ｌｅｎ）掺入黄体细胞蛋白质的合成，促进３Ｈ－胸腺嘧啶（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入ＤＮＡ的合成，而上述效应分别被放线菌酮（ＣＹＸ）和放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）所抑制。此外，ＩＧＦ－Ⅱ对大鼠高体黄体细胞内源性ｃＡＭＰ和ｈＣＧ诱导的ｃＡＭＰ含量均无影响，这提示ＩＧＦ－Ⅱ对大鼠黄体细胞孕酮生成的促进作用与其增强黄体细胞蛋白质与ＤＮＡ的合成有关，而其跨膜信息传递似不通过ｃＡＭＰ系统。

川芎嗪对ET-1诱导的脐动脉平滑肌细胞增殖的作用

目的研究川芎嗪(TMPz)对内皮素(ET-1)诱导的人脐动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用。方法培养人脐动脉平滑肌细胞,应用ET-1建立平滑肌增殖模型,后加入TMPz,设立梯度浓度的TMPz分组,最后细胞计数以及氚-胸腺嘧啶核苷(3H—TdR)掺入方法检测药物效应。结果TMPz抑制VSMC的作用与药物的浓度梯度呈正相关结论TMPz可抑制VSMC的增殖。

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

在建立大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）体外培养方法的基础上，通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验，ＲＮＡ印迹分析和斑点杂交观察ｂＦＧＦ对ＭＣＤＮＡ合成及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响．结果表明，ｂＦＧＦ作用于ＭＣ１８ｈ，ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入率明显增加（Ｐ＜０．０５），２４ｈ达到高峰（Ｐ＜０．０１）；ｂＦＧＦ显著诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达，其表达活性分别于３０ｍｉｎ和１ｈ达到高峰．提示ｂＦＧＦ是ＭＣ的强效丝裂原，其对ＭＣＤＮＡ合成的促进作用与诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达有关．

中药木回春对肿瘤细胞株的杀伤作用

目的 观察中药木回春体外抗肝癌、肺癌的作用。方法 采用 3H- Td R掺入法检测木回春对人肝癌细胞 QGY- 770 3和人肺癌细胞 SPC- A- 1细胞的抑瘤效应。结果 对人肝癌细胞半数生长抑制值为 462 .1μg/ ml,对 QGY- 770 3细胞 DNA合成量较对照组皆有明显减少 ,差异显著 (P<0 .0 0 1 ) ,其合成量随药物浓度增加呈减少趋势。 ED5 0 值为 2 70 .9μg/ ml;对 SPC- A- 1细胞半数生长抑制值为51 2 .7μg/ ml。结论 木回春很可能成为治疗多种肿瘤的理想药物。

5′-碘靛玉红的抗肿瘤作用

5′-碘靛玉红是靛玉红苯环5′位碘取代的衍生物。对大、小鼠急性毒性试验表明,未见与靛玉红有明显差异。对大鼠W256的实验治疗表明,二药等克分子剂量(2mM/kg)或等剂量(800mg/kg)灌胃,本品的抑瘤率为57～72％(P<0.01),靛玉红为30～34％(P<0.05),二者有显著差异。本品的ID_(50)为490±32.9mg/kg,CI大于10;而靛玉红的抑瘤率低于50％。本品还能明显延长L7212小鼠的存活时间41～73％(P<0.01);而靛玉红无活性。P388瘤细胞体外试验表明,二药均能抑制~3H-TdR参入瘤细胞的DNA,但本品的IC_(50)明显低于靛玉红,分别为6.4和17.0μg/ml。以上结果证明了,5′-碘靛玉红的抗癌活性比靛玉红高。

内皮素和 bFGF 对 MC 的促增殖作用及胰岛素的协同效应

采用３Ｈ－ＴｄＲ参入法，测定碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、胰岛素和内皮素－１（ＥＴ－１）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖的影响，以及胰岛素与ｂＦＧＦ或ＥＴ－１促ＭＣ增殖的协同作用。结果表明，不同浓度的ｂＦＧＦ（５－２００ｎｇ／ｍｌ）和胰岛素（０．１－２．４Ｕ／ｍｌ）均显著升高ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入值（ｃｐｍ值）（Ｐ＜０．０１）。ＥＴ－１对ＭＣ的ｃｐｍ值的影响依剂量不同呈现两种不同的效应，在１０－９－１０－７ｍｏｌ／Ｌ时，随着浓度的升高，ＭＣ的ｃｐｍ值明显升高（Ｐ＜０．０１），并以１０－８ｍｏｌ／Ｌ作用最强；当升高到１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，ＭＣ的ｃｐｍ值出现降低趋势。胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度ＥＴ－１（≤１０－８ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时，ＭＣ的ｃｐｍ值明显高于二者单独作用之和（Ｐ＜０．０１），与高浓度ＥＴ－１（＞１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同作用于ＭＣ时，ＭＣ的ｃｐｍ值小于二者单独作用之和（Ｐ＞０．０５）。上述结果说明，胰岛素、ｂＦＧＦ和ＥＴ－１均能显著促进ＭＣ增殖；胰岛素与ｂＦＧＦ或低浓度的ＥＴ－１促ＭＣ增殖具有正协同作用，与高浓度ＥＴ－１呈现负协同作用。