欧洲葡萄NF-YB3基因克隆与表达分析

为探究VvNF-YB3基因在葡萄生长发育和响应非生物胁迫过程中的功能,以无核白为试材,克隆得到了VvNF-YB3基因编码区序列,全长为624 bp,编码207个氨基酸,蛋白质等电点6.31,不稳定指数27.66,总平均疏水指数-0.738,为一酸性、稳定的亲水蛋白。通过生物信息学分析发现,VvNF-YB3基因位于10号染色体,含有1个内含子,编码蛋白质存在1个CBFD_NFYB_HMF结构域,与河岸葡萄NF-YB3相似性最高。VvNF-YB3的二级结构中α-螺旋和无规则卷曲占比较高,三级结构为单体的螺旋-卷曲-螺旋,启动子中包含响应激素和胁迫的多个顺式作用元件。VvNF-YB3基因在葡萄的叶片、卷须、花、幼果和茎中均表达,且在成熟的叶片中表达量最高。PEG模拟的干旱、低温和高温胁迫均可影响VvNF-YB3基因的表达,VvNF-YB3为一胁迫响应基因。VvNF-YB3的互作蛋白大多是核因子Y家族的亚基,ERF、bHLH、ARF等27个转录因子可能调控VvNF-YB3基因的表达。由此推测,VvNF-YB3基因可能通过受到上游转录因子的调控并与其他NF-Y蛋白互作响应各种环境胁迫。

七氟烷对急性肺损伤大鼠肺功能和NF-κB/NLRP3炎性体通路的影响

目的研究七氟烷对急性肺损伤大鼠肺功能及核因子-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NF-κB/NLRP3)通路的影响。方法将75只大鼠随机分为对照组、模型组及1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组,每组15只。除对照组外,其余4组腹腔注射5 mg/kg脂多糖制备急性肺损伤模型,造模后1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组分别自由吸入1.5%、2.0%、2.5%七氟烷60 min,对照组和模型组自由呼吸空气。比较5组大鼠一般情况、肺功能状况(气道阻力、动态肺顺应性、用力肺活量)、肺湿/干比值(W/D)、氧合指数[动脉血氧分压(PaO_(2))/吸入氧浓度(FiO_(2))]、肺组织病理变化、肺泡灌洗液中炎性因子水平[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)],采用蛋白免疫印迹法检测并比较5组大鼠肺组织NF-κB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)表达水平。结果脂多糖作用96 h后,对照组、模型组及1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组大鼠生存率分别为100%(15/15)、60.00%(9/15)、66.67%(10/15)、80.00%(12/15)、73.33%(11/15),2.0%七氟烷能明显提高大鼠生存率。HE染色显示,模型组肺组织病理改变明显,包括大量炎性细胞浸润、肺泡壁增厚且肺泡血管阻塞等,相较于模型组,1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组肺组织病理改变有程度不同的减轻,其中以2.0%七氟烷改善效果最佳。与对照组比较,模型组气道阻力、肺W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1显著升高(P<0.05),动态肺顺应性、用力肺活量、PaO_(2)/FiO_(2)显著降低(P<0.05);与模型组比较,1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组气道阻力、肺W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1显著降低(P<0.05),动态肺顺应性、用力肺活量、PaO_(2)/FiO_(2)显著升高(P<0.05)。结论七氟烷对急性肺损伤大鼠肺功能具有保护作用,以2.0%七氟烷肺保护效果最佳,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路有关。

达原饮对Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响

目的:观察达原饮对幽门螺杆菌(Hp)感染模型大鼠胃组织和口周皮肤Toll样受体4/核因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子的影响,探讨达原饮治疗Hp感染的机制。方法:选取44只雄性SD大鼠,随机分为空白组8只及造模组36只,造模组予以Hp菌液灌胃造模,造模成功后,将造模组随机分为模型组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组、西药组,每组各8只,分别予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等量生理盐水灌胃,灌胃2周。观察大鼠造模前后一般情况改变,苏木精-伊红(HE)染色观察口周皮肤和胃组织病理学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠口周皮肤和胃组织TLR4、NF-κB、NLRP3表达以及血清中TNF-α、IL-1β表达水平。结果:给药干预后,与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠皮毛柔顺光泽,饮食水量增加,大便逐渐成型,胃黏膜上皮细胞层次基本分明,排列较整齐,炎症细胞浸润减少,口周皮肤角化过度、棘层增厚、毛囊周围轻度炎症细胞浸润等情况均有不同程度改善。与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠胃组织和口周皮肤TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平均有不同程度的下调(P<0.05或P<0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显下降(P<0.01)。结论:达原饮可能通过干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制TLR4、NF-κB、NLRP3及下游炎症因子的表达,减轻Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤炎症损伤。

长链非编码RNA MEG3吸附miR-29a通过NF-κB/NLRP3通路参与糖尿病肾病大鼠足细胞焦亡

目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG 3)吸附miR-29 a对核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NF-κB/NLRP3)通路及糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞焦亡的影响。方法96只大鼠随机分为空白对照(Blank)组、DN组、敲低对照(sh-NC)组、敲低lncRNA MEG 3表达(sh-MEG 3)组,过表达对照(miR-NC)组、过表达miR-29 a(miR-29 a)组、敲低lncRNA MEG 3表达+敲低对照(sh-MEG3+anti-miR-NC)组、敲低lncRNA MEG 3表达+敲低miR-29 a表达(sh-MEG 3+anti-miR-29 a)组,每组各12只。采用高糖、高脂饮食联合注射链脲佐菌素(STZ)制备DN大鼠模型。sh-NC组、sh-MEG 3组、miR-NC组、miR-29 a组、sh-MEG 3+anti-miR-NC组、sh-MEG 3+anti-miR-29 a组大鼠通过尾静脉注射100μL相应的慢病毒(均为1012 TU/mL)。注射4周后,生化分析仪检测空腹血糖(FBG)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿微量白蛋白(UMA)水平;PAS染色观察肾小球损伤;透射电镜观察足细胞损伤;免疫荧光染色、RT-qPCR、Western-blot检测肾组织突触足蛋白(Synaptopodin)、肾病蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)、lncRNA MEG 3、miR-29 a、NF-κB p 65、NLRP 3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β、Gasdermin家族蛋白D(GSDMD)mRNA和蛋白水平。结果与Blank组比较,DN组大鼠肾组织lncRNA MEG 3水平升高,miR-29 a水平降低,FBG、血清TC、TG、Scr、BUN和UMA水平升高,肾小球肥大,可见足细胞足突丢失和融合,基底膜明显增厚,肾组织中Synaptopodin、Nephrin、Podocin水平降低,NF-κB p 65、NLRP 3、Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05);敲低lncRNA MEG 3表达或过表达miR-29 a后,大鼠肾组织lncRNA MEG 3水平降低,miR-29 a水平升高,FBG、血清TC、TG、Scr、BUN和UMA水平降低,肾小球结构基本正常,足细胞仅有少量足突丢失和融合,基底膜轻微增厚,肾组织中Synaptopodin、Nephrin、Podocin水平升高,NF-κB p 65、NLRP 3、Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA和蛋白水平降低(均P<0.05);而敲低miR-29 a表达能够逆转敲低lncRNA MEG 3表达对大鼠上述指标的影响(均P<0.05)。结论lncRNA MEG 3吸附miR-29 a通过NF-κB/NLRP3通路参与DN大鼠足细胞焦亡。

DDX3X/NF-κB通路介导蛛网膜下腔出血小鼠早期神经元凋亡

目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用。方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分。使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,或者通过NF-κB抑制剂NF-κB-IN-1(简称IN-1)抑制NF-κB信号通路,利用Western Blot检测小鼠皮质DDX3X和NF-κB(p65)的表达,通过TUNEL/NeuN染色检测各组小鼠大脑皮质神经元的凋亡。结果:SAH术后24 d小鼠神经功能显著障碍(P<0.05),皮质中DDX3X表达显著增加而NF-κB(p65)的表达显著降低(P<0.05)。预先敲低DDX3X后,小鼠神经功能显著恢复,NF-κB(p65)蛋白表达显著高于SAH组(P<0.05);当在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则小鼠神经功能恢复不明显。TUNEL/NeuN染色显示敲低DDX3X表达后小鼠脑组织中TUNEL阳性的死亡神经元数量少于SAH组(P<0.05),而如果在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则TUNEL阳性的神经元数量减少不明显。结论:DDX3X/NF-κB通路介导了SAH后早期脑损伤小鼠的细胞死亡。

芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭患者血清Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨芪苈强心胶囊辅助治疗老年CHF对患者Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:采用随机数表法将2021年3月至2023年3月平顶山市第一人民医院112例老年CHF患者分为采用沙库巴曲缬沙坦钠(诺欣妥)治疗的常规组(n=56例)和采用芪苈强心胶囊辅助治疗的联合组(n=56例)。观察两组疗效、心功能、血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)、Copeptin水平、Toll样受体(TLR4)、核因子-κ(NF-κB)水平及不良反应。结果:治疗3个月后,联合组的临床治疗总有效率、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)高于常规组(P<0.05);联合组TLR4、NF-κB、Gal-3、Copeptin水平低于常规组(P<0.05);两组患者用药期间不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠可调节TLR4、NF-κB水平,促进老年CHF患者心功能恢复,并抑制心肌重构,进而有效提高临床治疗疗效,且不增加患者不良反应发生风险。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

探讨MIAT通过NF-KB/IL-6/STAT3通路影响心梗后交感神经重构

目的探讨MIAT通过NF-KB/IL-6/STAT3通路对MI后交感神经重构的影响,为临床MI后心源性猝死防治提供新的理论依据和治疗靶点。方法选取SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,根据实验需求随机分为Sham组、AMI组、AMI+shMIAT组和AMI+shControl组,每组各6只。AMI组和AMI+shMIAT组、AMI+shControl组大鼠行冠状动脉左前降支结扎术。Sham组的大鼠则接受相同的手术程序,但不结扎冠状动脉。分组干预处理后,对比各组大鼠MIAT、NGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-kB、p-P65、p-IkBa、p-JAK2、p-STAT3、JAK2和STAT3的表达水平。结果单因素方差分析结果显示,各组大鼠MIAT、NGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-kB、p-P65、p-IkBa、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。两两比较结果显示,AMI组、AMI+shControl组大鼠MIAT、NGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-kB、p-P65、p-IkBa、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3水平显著高于Sham组及MI+shMIAT组(P<0.05);AMI+shMIAT组高于Sham组,且MIAT、IL-6、STAT3差异显著(P<0.05)。AMI组与AMI+shControl组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论心梗后表达的MIAT可能通过NF-KB/IL-6/STAT3通路促进心交感神经重构,进而恶性室性心律失常的发生,而降低MIAT的表达可抑制NF-KB/IL-6/STAT3通路,抑制心交感神经重构,降低心梗后恶性室性心律失常的发生,有效降低心源性猝死的发生。

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

补体C3及其相关信号通路在病理性疼痛中的作用

补体系统在识别和消除病原体、清除生理碎片、协调免疫反应以及稳态等方面发挥重要作用,作为炎症反应的一种早期预警信号,异常的补体活动是病理性疼痛发病的重要诱因。补体成分3(complement 3,C3)是病理性疼痛诱发过程中补体系统激活的重要指标。实验及临床流行病学研究发现,多种病理性疼痛中周围与中枢神经C3异常升高,通过结合特异性C3受体直接或间接通过补体信号调控神经元对神经病变的反应。C3可以通过在神经元质膜上表达的特异性补体受体直接调节神经元的生命和死亡的各个方面,也可以通过募集胶质细胞和免疫细胞经各种机制将补体信号传递给神经元间接调节,补体信号指导神经元对组织损伤、神经创伤和神经病变的反应。本文主要对C3在病理性疼痛涉及的细胞因子和信号通路的机制进行综述,探讨C3成为镇痛靶点的可能性。

脓毒症大鼠Fas-L、Caspase-3和NF-κB的表达与肝细胞凋亡的关系

目的 探讨脓毒症时Fas L、Caspase 3、NF κB在肝细胞凋亡信号转导中的作用。方法 Wistar大鼠 3 0只随机分为观察组和对照组 ,观察组 2 4只采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)致脓毒症模型 ,以术后 2h、3h、4h、5h时限分为 4组 ,对照组 6只 ,不行CLP术。各组均测定肝脏组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达及肝细胞凋亡的情况 ,同时测定肝脏功能的变化。结果 CLP术后肝组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达升高与对照组相比有显著差异 ;3h组的Fas L、Caspase 3的含量达高峰 ,4h组的NF κB的含量达高峰 ;血浆中丙氨酸转氨酶 (ALT)、乳酸脱氢酶 (LDH)呈异常改变 ,CLP术后血浆中ALT、LDH增加 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,ALT呈进行性增加 ,LDH以 4h组最显著。肝组织细胞凋亡指数呈进行性增加。结论 由CLP所致的脓毒症过程中 ,肝组织Fas L、Caspase 3蛋白表达升高 ,激活促细胞凋亡的程序 ;NF κB蛋白表达亦升高 ,NF κB活性增强 。

牛磺酸对糖尿病大鼠背根节细胞Caspase-3和NF-κB表达的影响

目的:观察牛磺酸对糖尿病大鼠背根节细胞中Caspase-3和NF-κB mRNA表达的影响,并探讨其神经保护作用的机制。方法:40只Wistar大鼠,8只作为正常对照组,其他以链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱发糖尿病模型。糖尿病模型建立成功后,随机分组为模型组(DM)和牛磺酸治疗组(TA),其下又各设4周、8周亚组,应用RT-PCR法检测背根节细胞中Caspase-3和NF-κB的mRNA表达。结果:在正常鼠组织中弱表达Caspase-3和NF-κB mRNA,4周、8周后DM组二者表达增加,牛磺酸治疗组中,Caspase-3和NF-κB的mRNA表达与同期模型组比较其表达均有下降(P<0.05)。结论:牛磺酸的神经保护作用可能与其抑制NF-κB的活化,下调Caspase-3基因的表达,从而抑制神经组织细胞凋亡有关。

色谱/质谱联用法测定NF_3中微量CF_4

本文利用色谱 质谱联用技术对NF3中微量CF4进行了测定。采用选择离子监测 (SIM)方式测定 ,定量选择离子m z为 69,方法简单、准确、选择性好 ,CF4浓度在 55～ 550 0mg m3范围内与峰面积呈线性关系 ,方法最低检测浓度5.5mg m3,相对标准偏差 5.6%。

膀胱移行细胞癌的ClC-3和NF-κB的表达及意义

目的:探讨ClC-3和NF-κB在膀胱移行细胞癌中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学染色技术检测31例病理诊断为膀胱移行细胞癌和6例正常膀胱组织中ClC-3和NF-κB的表达。结果:膀胱移行细胞癌组织中ClC-3主要在癌细胞的胞膜表达,阳性表达率74%(23/31)。其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级阳性表达率40%(4/10),Ⅱ级阳性表达率81%(9/11)、Ⅲ级阳性表达率100%(10/10)。NF-κB在癌细胞的胞浆内表达,阳性表达率83%(26/31)。其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级阳性表达率60%(6/10),Ⅱ级阳性表达率90%(10/11),Ⅲ级阳性表达率100%(10/10)。6例正常膀胱组织中仅有1例ClC-3表达弱阳性,NF-κB表达均为阴性。膀胱移行细胞癌组织中ClC-3和NF-κB阳性表达率高于正常膀胱组织(P<0.01)。结论:ClC-3和NF-κB可能与膀胱移行细胞癌病理分级和增殖有关。

肝细胞肝癌中survivin、caspase-3和NF-κB的表达及其相关性

目的:探讨survivin、caspase-3、NF-κB在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,及其与临床病理指标的关系。方法:采用免疫组织化学技术检测40例HCC组织及10例正常肝组织中survivin、caspase-3、NF-κB的表达情况。结果:survivin在HCC组织阳性表达率为67.5%,在对照组中不表达,两者比较有显著性差异(χ2=12.082,P<0.05);门静脉癌栓者阳性表达率高于无门静脉癌栓者(χ2=5.405,P<0.05);有远处转移者阳性表达率高于无远处转移者(χ2=4.596,P<0.05)。caspase-3在HCC组织阳性表达率为35.0%,在对照组中表达率为80.0%,两者比较有显著性差异(χ2=4.875,P<0.05)。NF-κB在HCC组织阳性表达率为77.5%,在对照组中不表达,两者比较有显著性差异(χ2=17.238,P<0.05);中低分化阳性表达率高于高分化(χ2=4.198,P<0.05)。caspase-3的表达与survivin的表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05);NF-κB的表达与survivin的表达呈正相关(r=0.519,P<0.05)。结论:survivin、caspase-3、NF-κB在HCC的发生、发展中起着不同程度的作用;联合检测survivin、caspase-3、NF-κB,有助于对HCC恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估,进而为HCC的预后分析及临床治疗提供依据。

APP17肽对卵巢去势大鼠学习、记忆功能和海马神经NT-3、NF表达的影响

目的 探讨APP1 7肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能及作用机制。方法 雌性大鼠分三组 :①正常组 ,②去卵巢组 ,③用APP1 7肽保护去卵巢组。通过水迷宫测试 ,观察行为学的改变。而后灌注固定 ,取大脑组织冰冻切片 ,做NT 3、NF免疫组化染色。结果 (1 )行为学检查 :给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠游完全程的时间及错误反应次数均较未给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠少 (P<0 0 5)。 (2 )用APP1 7肽保护的卵巢去势大鼠海马区神经元神经营养素 3(NT 3)、神经丝蛋白 (NF)的表达与正常大鼠相似 ,阳性细胞计数及平均灰度 (反映染色强度 )与卵巢去势大鼠比较差异显著 (P <0 0 5)。结论 卵巢去势大鼠存在学习、记忆障碍 ,APP1

EPO对糖尿病大鼠视网膜caspases-3、NF-κB和TNF-α表达的影响

目的研究促红细胞生成素(EPO)对糖尿病(DM)大鼠视网膜组织caspases-3、TNF-α和NF-κB表达的影响,探讨糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制。方法采用链脲佐菌素诱导DM,成模后,随机分为DM未治疗组和EPO治疗组,再设亚组。应用SABC法检测EPO对大鼠视网膜组织中caspases-3、NF-κB和TNF-α表达的影响。结果在正常大鼠和DM1个月组,三者均无阳性表达或只呈弱阳性表达,3个月组视网膜中可见阳性表达,多位于神经节细胞层,6个月组可见表达向其他层次扩展。EPO治疗组三者的表达均较同期DM未治疗组下降,3个月和6个月组的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论早期糖尿病视网膜caspases-3、NF-κB和TNF-α的表达上调,三者可能均参与了早期DR的发生,上述结果将为EPO治疗视网膜疾病提供理论基础。

TNF-α对肾脏近端小管上皮细胞caspase-3的调控作用及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠原代肾小管上皮细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)激活与表达的调控以及核因子-κB(NF-κB)在其中的作用。方法:体外分离与培养大鼠肾小管上皮细胞,以TNF-α(10μg/L)按不同时间给予刺激,Western blotting检测caspase-3及其活化裂解片段cleaved caspase-3,以及I-κBα和磷酸化I-κBα(pI-κBα)蛋白水平。分别以TNF-α(10μg/L)处理24h、NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082(5μmol/L)处理25h、Bay11-7082(5μmol/L)预处理1h后加入TNF-α(10μg/L)刺激24h,检测caspase-3及cleaved caspase-3的变化。结果:TNF-α刺激6至24h,cleaved caspase-3与caspase-3的相对比值显著高于对照组;而caspase-3蛋白水平在TNF-α刺激后6h无明显增高,12h低于对照组,24h回升;Bay11-7082处理组和Bay11-7082+TNF-α处理组的caspase-3蛋白表达与活化水平显著低于TNF-α处理组和对照组。结论:TNF-α促进大鼠原代肾小管上皮细胞caspase-3的激活与表达,这一过程与NF-κB的激活有关。

SAA蛋白与BCL-2、Caspase-3及NF-κB关系的研究

目的:探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)的超表达和抑制表达对BCL-2、Caspase-3及NF-κB这3种信号分子蛋白表达的影响。方法:将课题组前期已构建成功的pc DNA3.1(+)-SAA超表达载体和p GPU6/GFP/Neo-SAA表达干扰载体采用脂质体法分别转染鼻咽癌CNE2细胞,建立SAA蛋白超表达的pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系和干扰SAA蛋白表达的p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系。pc DNA3.1(+)-SAACNE2细胞、CNE2细胞、p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞中SAA蛋白的表达量会逐渐减少,当SAA蛋白的表达量改变时,通过免疫印迹法检测BCL-2、Caspase-3及NF-κB在pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞、CNE2细胞、p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞中的表达。结果:SAA蛋白的表达在pc DNA3.1(+)-SAA-CNE2细胞系中明显增多(P<0.05),在p GPU6/GFP/Neo-SAA-CNE2细胞系中显著减少(P<0.05),由此可知,pc DNA3.1(+)-SAA超表达载体和p GPU6/GFP/Neo-SAA表达干扰载体成功转染CEN2细胞。免疫印迹检测结果示:随着SAA蛋白表达的增多,BCL-2的表达增多(P<0.05)、Caspase-3及NF-κB的表达减少(P<0.05)。结论:SAA蛋白在人鼻咽癌CNE2细胞中的表达与抑制凋亡的BCL-2蛋白表达有协同作用,对凋亡调节分子Caspase-3及NF-κB蛋白的表达有抑制作用,可推测SAA蛋白可能有促进肿瘤生长、转移的作用。