3-甾酮-1-脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达及甾体转化研究

将简单节杆菌3-甾酮-1-脱氢酶基因(ksdD)克隆到大肠杆菌表达载体pET-22b(+)上,构建重组质粒pET-ksdD,利用IPTG诱导酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达,4h后取样,分别对超声破碎后的上清和沉淀进行SDS-PAGE和酶活分析,结果表明表达出的3-甾酮-1-脱氢酶的分子量大约为56kD,超声破碎后的细胞破碎液对4-AD的转化率较简单节杆菌提高了近10倍。

3-甾酮-1-脱氢酶基因的表达及甾体转化分析(英文)

利用带有P43启动子的表达分泌载体pWB980,实现了简单节杆菌3-甾酮-1-脱氢酶在枯草芽孢杆菌中的表达,表达出的目的蛋白的分子量为55kDa。利用分光光度法检测得到胞内和胞外可溶性部分的酶活分别为每毫克蛋白110±0.5mU和15±0.6mU,比出发菌株简单节杆菌提高了将近30倍。重组芽孢杆菌对甾体底物4-AD(4-烯-雄甾-3,17-双酮)的转化率为45.3%,比出发菌株简单节杆菌提高了近10倍。利用枯草芽孢杆菌对甾体底物进行脱氢为甾体药物的生产开辟了一个新的途径。

重组枯草芽孢杆菌的构建及对甾体的C_(1，2)位脱氢

本文将简单节杆茵3-甾酮-1-脱氢酶基因克隆到分泌表达载体pWB980上,并转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到重组芽孢杆菌菌株。重组芽孢杆菌表达出的目的蛋白的分子量为55KDa,分光光度法检测到胞内和胞外可溶性部分的酶活分别为110±0．5mU和15±0．6mU每毫克蛋白,对甾体底物4-AD的转化率为45．3%,比出发茵简单节杆菌提高了将近10倍。

甾体微生物转化反应关键酶3-甾酮-Δ~1-脱氢酶的研究进展

3-甾酮-Δ~1-脱氢酶是甾体化合物微生物代谢的关键酶,负责催化3-酮基类甾体化合物A环上的C1,2位脱氢反应。其不仅在甾体母核的早期降解途径中发挥重要作用,而且能通过A环C1,2位上双键的导入显著提高甾体化合物的生理活性。本文详细阐述了3-甾酮-Δ~1-脱氢酶在微生物中的种属分布和序列特征、酶的生物学特性、生理作用、催化机理以及分子改造等,为深入研究该酶在甾体生物转化领域中的应用提供重要参考。

邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯诱导小鼠胚胎Leydig细胞凋亡的体外实验研究

目的研究邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯EDi（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP]对小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡诱导作用。方法DEHP50、100、200ug／ml分别作用于体外培养、纯化的胎龄16d（GD16）小鼠胚胎睾丸Leydig细胞。光镜、电镜观察Leydig细胞形态和超微结构变化，DNA末端原位标记染色法（TUNEL法）和Annexin-V／PI双染法流式细胞仪分别检测kydig细胞凋亡指数、凋亡细胞比例。结果DEHP处理组透射电镜可见凋亡典型的形态学变化，凋亡指数及凋亡细胞比例与对照组比较有显著或非常显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）。结论DEHP能诱导小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡。

严重烫伤对睾丸间质细胞影响的实验研究

采用大鼠30%Ⅲ度烫伤模型,应用光镜、电镜、3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)组织化学染色及其相对活性的测定和血清睾酮及黄体生成素(LH)浓度的检测,分不同时相对严重烫伤后30天内大鼠睾丸间质细胞的改变进行了动态观察。结果表明,烫伤后睾丸间质细胞有不同程度的变性、坏死;间质细胞内3β-HSD 活性迅速降低,伤后30天仍保持较低水平;血清睾酮水平迅速下降,并持续维持较低水平,伤后30天仍不回升,而血清 LH 浓度无明显改变。提示烫伤后血清睾酮下降的机理可能与睾丸间质细胞的受损及糖皮质激素升高有关。