FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用

本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响。结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。

颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a预测短暂性脑缺血发作后继发脑梗死的临床价值

目的探讨颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a预测短暂性脑缺血发作(TIA)后继发脑梗死的临床应用价值。方法选取我院收治的90例TIA患者,根据TIA后30 d内是否继发脑梗死分为脑梗死组42例和非脑梗死组48例,比较两组临床资料、颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a的差异。采用Logistic回归分析筛选TIA后继发脑梗死的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分、血清miR-146a单独及联合应用预测TIA后继发脑梗死的诊断效能。结果脑梗死组与非脑梗死组颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a均为TIA后继发脑梗死的独立危险因素(OR=2.807、2.680、2.762,均P<0.05)。ROC曲线分析显示,颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a预测TIA后继发脑梗死的曲线下面积分别为0.892、0.854和0.889,其联合应用的曲线下面积为0.925。结论颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a在预测TIA后继发脑梗死中具有较好的临床应用价值。

血清CX3C基序趋化因子配体1及Ⅰ型纤溶酶原激活抑制物水平与慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者病情严重程度及预后的关系研究

目的 研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清CX3C基序趋化因子配体1(CX3CL1)、Ⅰ型纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)水平与病情严重程度及预后的关系。方法 选取2019年1月至2021年1月重庆医科大学附属永川医院收治的COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者96例为研究对象(呼吸衰竭组)、同期诊治的单纯COPD患者60例为单纯COPD组、同期健康体检的健康人群60例为健康对照组。检测受试者血清CX3CL1、PAI-1水平。比较不同健康状况受试者、不同病情严重程度呼吸衰竭组患者血清CX3CL1、PAI-1水平差异。分析影响COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者不良预后的因素以及血清CX3CL1、PAI-1对不良预后的预测价值。结果 呼吸衰竭组、单纯COPD组CX3CL1、PAI-1水平均高于健康对照组[(266±29)、(219±35)ng/L比(156±23)ng/L,(15.2±2.3)、(12.3±2.2)μg/L比(8.2±1.8)μg/L],且呼吸衰竭组高于单纯COPD组(均P<0.05)。呼吸衰竭组中轻度组、中度组、重度组血清CX3CL1、PAI-1水平随疾病严重程度加重呈上升趋势(均P<0.05)。COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清CX3CL1、PAI-1水平与第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)、第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV1/FVC比值)呈负相关(均P<0.001)。呼吸衰竭组中预后不良组血清CX3CL1、PAI-1水平均高于预后良好组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清CX3CL1、PAI-1升高是COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者不良预后的独立危险因素(均P<0.001)。血清CX3CL1、PAI-1联合检测对COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者不良预后预测的曲线下面积大于CX3CL1、PAI-1单独诊断(均P<0.001)。结论 COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清CX3CL1、PAI-1水平升高,二者与病情严重程度有关,联合检测有助于评估COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者的临床预后。

8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者血糖在目标范围内时间的相关性及预测糖尿病周围神经病变的价值

目的探讨8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α)、镍纹样蛋白(Metrnl)、微管相关蛋白3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/微管相关蛋白-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)与2型糖尿病(T2MD)患者血糖在目标范围内时间(TIR)的相关性及对糖尿病周围神经病变(DPN)预测价值。方法选取2020年5月至2022年10月新乡医学院第一附属医院收治的187例T2DM患者进行前瞻性研究,根据是否合并DPN分为DPN组(n=48)和无DPN组(n=139)。比较两组患者及根据TIR四分位数分组的患者8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ水平,采用Pearson相关性分析8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR相关性,采用多因素Logistic回归分析DPN的相关影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ预测DPN的价值。结果DPN组患者的TIR为(51.43±7.68)%,明显低于无DPN组的(56.94±8.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);DPN组患者的8-isoPGF2α、Metrnl分别为(162.78±51.33)pg/mL、(259.18±74.42)pg/mL,明显高于无DPN组的(129.56±43.00)pg/mL、(208.37±65.61)pg/mL,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ为0.89±0.27,明显低于无DPN组的1.15±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);根据TIR第25、50、75百分位数将全部患者分为Q1~Q4四组,8-isoPGF2α、Metrnl在Q4组最低,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ在Q4组最高;8-isoPGF2α、Metrnl随着TIR降低逐渐升高,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ随着TIR降低而降低,四组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,8-isoPGF2α、Metrnl与TIR呈显著负相关(r=-0.786、-0.665,P<0.01),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR呈显著正相关(r=0.711,P<0.01);多因素Logistic回归分析结果显示,TIR、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ是DPN的独立相关保护因素(P<0.05),8-isoPGF2α、Metrnl是DPN的独立相关危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,单一指标中,Metrnl预测DPN的AUC最大(0.830),特异度最高(87.05%),8-isoPGF2α+Metrnl+LC3B-Ⅱ预测DPN的AUC为0.923(95%CI:0.875~0.957),大于Metrnl,预测敏感度为87.50%,特异度为85.61%(P<0.05)。结论8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者TIR有关,均是患者并发DPN的预警因素。联合检测三者能为临床分层管理和早期识别DPN高风险人群提供参考。

白术内酯Ⅰ调节IL-6/STAT3信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白术内酯Ⅰ调节白细胞介素-6(IL-6)/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法用不同浓度白术内酯Ⅰ(0、25、50、75、100、150μmol/L)处理子宫内膜RL-952细胞,MTT法检测细胞存活率;将RL-952细胞分为对照组(无处理)、白术内酯Ⅰ(50μmol/L)组、IL-6组(10 ng/mL)、白术内酯Ⅰ(50μmol/L)+IL-6组(10 ng/mL),MTT法、Edu染色检测细胞增殖;qRT-PCR法检测细胞中IL-6、STAT3表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;western blot检测MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平。结果与0μmol/L比较,25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L、150μmol/L白术内酯Ⅰ干预的RL-952细胞存活率显著下降,呈浓度依赖性(P<0.05);与对照组比较,白术内酯Ⅰ组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05),细胞凋亡率显著性升高(P<0.05),IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),细胞凋亡率显著性降低(P<0.05);与白术内酯Ⅰ组比较,白术内酯Ⅰ+IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),细胞凋亡率显著性降低(P<0.05);与IL-6组比较,白术内酯Ⅰ+IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05),细胞凋亡率显著性升高(P<0.05)。结论白术内酯Ⅰ可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路来抑制子宫内膜癌RL-952细胞增殖、迁移和侵袭。

膀胱癌根治性术后血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ变化及临床意义

目的探讨膀胱癌根治性术后血清胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)变化及临床意义。方法选择本院2019年1月至2023年9月接受膀胱癌根治性术治疗的56例患者做为研究对象,比较手术前后,不同组织学分级,有无淋巴结转移,不同TNM分期及有无肌层浸润性膀胱癌患者的血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平。结果膀胱癌根治性术后患者的血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平均明显高于手术前(P<0.05);高级别膀胱癌术后患者的血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平均明显低于低级别膀胱癌患者(P<0.05);无淋巴结转移膀胱癌术后患者的血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平均明显高于淋巴结转移膀胱癌患者(P<0.05);T_(1)~T_(2)期膀胱癌术后患者的血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平均明显高于T3~T4期膀胱癌患者(P<0.05);非肌层浸润性膀胱癌术后患者的血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平均明显高于肌层浸润性膀胱癌患者(P<0.05)。结论根治性膀胱癌手术后,血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平显著上升,与肿瘤分级、淋巴结转移肌层浸润、TNM分期密切相关。检测血清IGFBP-3、IGF-Ⅰ水平变化可作为膀胱癌患者术后监测的重要指标,有助于更精准地评估患者的病情进展和预后。

血小板活化因子和ABCD3-Ⅰ评分预测老年短暂性脑缺血发作后进展为脑梗死的价值

目的探究血清血小板活化因子结合ABCD3-Ⅰ评分预测老年短暂性脑缺血发作(TIA)后进展为脑梗死的价值。方法回顾性选择2020年6月至2022年6月来保定市第二医院治疗的260例老年TIA患者进行研究。患者发病第2天进行临床检查及检验。将入院7 d内进展为脑梗死的50例患者作为观察组,未进展为脑梗死的210例患者作为对照组。分析比较2组患者血清血小板活化因子(PAF)水平、ABCD3-Ⅰ评分。统计比较TIA患者ABCD3-Ⅰ评分分层与患者进展为脑梗死的发生率。比较观察组患者TIA不同持续时间血清PAF水平、ABCD3-Ⅰ评分。采用ROC曲线分析PAF联合ABCD3-Ⅰ评分评价TIA后进展为脑梗死的价值。结果观察组患者的血清PAF水平、ABCD3-Ⅰ评分均显著高于对照组(P<0.01)。TIA患者ABCD3-Ⅰ评分分层低危组、中危组、高危组脑梗死发生率为0.00%、8.87%、33.91%(P<0.05)。观察组患者TIA持续时间越长血清PAF水平、ABCD3-Ⅰ评分越高(P<0.05)。PAF水平、ABCD3-Ⅰ评分、PAF水平联合ABCD3-Ⅰ评分评价患者发生脑梗死曲线下面积分别为0.799、0.784、0.841;敏感性分别为70.2%、68.1%、85.6%;特异性分别为57.4%、72.1%、80.9%(P<0.01)。PAF水平联合ABCD3-Ⅰ评分评价患者发生脑梗死曲线下面积显著高于2个指标单独预测(P<0.05)。结论血清PAF结合ABCD3-Ⅰ评分对老年TIA后进展为脑梗死有一定的预测价值。

白术内酯Ⅰ通过SGLT1/NHE3通路治疗腹泻的机制研究

目的:探讨白术内酯Ⅰ通过SGLT1/NHE3通路治疗腹泻的机制。方法:Caco-2细胞建立体外肠道吸收模型,将细胞分别设为空白对照组、抑制剂(SGLT1抑制剂根皮苷、P38MAPK抑制剂SB203580、Ezrin抑制剂NSC668394)组、白术内酯Ⅰ组、白术内酯Ⅰ+抑制剂组,采用2-NBDG测定白术内酯Ⅰ对Caco-2细胞葡萄糖摄取的影响;Western Blot法检测SGLT1、p-P38MAPK、p-MAPKAPK2、p-AKT2、p-Ezrin、MLCK、p-MLC、NHE3等蛋白表达,荧光定量PCR检测SGLT1、MLCK、NHE3 mRNA表达。结果:白术内酯Ⅰ促进Caco-2细胞葡萄糖摄取,上调SGLT1、NHE3、MLCK的表达;此外,白术内酯Ⅰ增加了MLCK和P38MAPK/Ezrin信号通路中的蛋白磷酸化。结论:白术内酯Ⅰ可激活SGLT1促进Caco-2细胞葡萄糖摄取,通过P38MAPK/Ezrin信号通路上调其下游靶点NHE3和MLCK促进水钠吸收是其治疗腹泻的机制之一。

铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化

背景:病理性瘢痕主要表现为异常的细胞外基质积累和过度的成纤维细胞增殖,成纤维细胞过度增殖就会产生大量以胶原纤维为主的细胞外基质。因此深入探讨成纤维细胞纤维化在病理性瘢痕形成中的作用,将为揭示病理性瘢痕的机制和生物学治疗提供新思路。目的:探讨铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3(RAS-selective lethal small molecule 3,RSL3)对人病理性瘢痕成纤维细胞纤维化的影响。方法:收集10例宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科提供的病理性瘢痕组织和同一个体正常皮肤组织,提取人病理性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞用于后续实验;苏木精-伊红染色观察病理性瘢痕组织和正常皮肤组织的形态;倒置显微镜观察病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的外观形态;免疫荧光实验验证所提取的细胞是否为成纤维细胞;用不同浓度的RSL3(1,3,5,7,9,11,13μmol/L)干预细胞,CCK-8法检测RSL3作用于成纤维细胞的半数抑制浓度(IC_(50));设置对照组(不做处理)和RSL3干预组(用7μmol/L的RSL3干预细胞24 h),qRT-PCR和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的mRNA和蛋白的表达;检测细胞丙二醛浓度;划痕试验检测细胞划痕后24 h剩余划痕面积,并计算剩余划痕面积百分比。结果与结论:①与正常皮肤组相比,病理性瘢痕组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA:t=3.252,P<0.01;蛋白:t=5.075,P<0.01);②与正常皮肤成纤维细胞组相比,病理性瘢痕成纤维细胞组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA:t=10.32,P<0.01;蛋白:t=26.22,P<0.01);③与对照组相比,RSL3干预组谷胱甘肽过氧化物酶4表达减少(mRNA:t=2.798,P<0.05;蛋白:t=4.643,P<0.01),丙二醛浓度上升(t=2.917,P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白(mRNA:t=15.84,P<0.01;蛋白:t=4.610,P<0.01)、Ⅲ型胶原蛋白(mRNA:t=28.86,P<0.01;蛋白:t=7.713,P<0.01)和α-平滑肌肌动蛋白(mRNA:t=2.671,P<0.05;蛋白:t=7.417,P<0.01)的表达减少,迁移能力减弱(t=14.06,P<0.01);④提示RSL3通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶4的表达,进而抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化和迁移能力。

多发性骨髓瘤患者的血清PINP、DKK1和SFRP3水平及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者的血清I型原胶原氨基端前肽(PINP)、dickkopf Wnt信号通路抑制因子1(DKK1)和分泌型卷曲相关蛋白3(SFRP3)水平及其临床意义。方法纳入150例MM患者(MM组)及150健康体检者(对照组)。比较两组研究对象之间、不同临床分期MM患者之间、不同临床疗效MM患者之间的血清DKK1、PINP、SFRP3水平。采用Logistic回归模型分析治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平与MM患者临床疗效的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平对MM患者临床疗效的预测效能。结果MM组患者治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平高于对照组(P<0.05);Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期MM患者治疗前血清DKK1、PINP、SFRP3水平依次升高(P<0.05);有效组患者治疗前血清DKK1、PINP、SFRP3水平低于无效组(P<0.05)。治疗前血清DKK1、SFRP3、PINP水平升高是影响MM患者临床疗效的独立危险因素(P<0.05)。治疗前血清DKK1和SFRP3水平对MM患者临床疗效无预测价值(曲线下面积<0.5,P>0.05),而治疗前血清PINP水平对MM患者的临床疗效有一定的预测价值(曲线下面积=0.663,P<0.05)。结论MM患者治疗前的血清DKK1、PINP和SFRP3水平高于健康人群,且与疾病严重程度有关,是MM患者临床疗效的影响因素。治疗前血清PINP水平对预测MM患者的临床疗效有一定的价值。

3D打印模型结合经皮肝Ⅰ期胆道造瘘术联合硬质胆道镜手术治疗肝内胆管结石的临床效果

目的研究3D打印模型结合经皮肝Ⅰ期胆道造瘘联合硬质胆道镜手术治疗Ⅰ型胆管分型患者肝内胆管结石的疗效和安全性。方法选取40例I型胆管分型的肝内胆管患者手术治疗的临床资料,其中3D打印组共17例患者采用3D打印模型结合经皮肝Ⅰ期胆道造瘘联合硬质胆道镜手术方案;对照组共23例患者行单纯经皮肝Ⅰ期胆道造瘘联合硬质胆道镜手术。观察分析两组患者的一期手术时间、一期取净率、多期取石发生率、最终取净率、手术出血量、通道大小、并发症7项指标。结果3D打印组的患者一期取净率、最终取净率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3D打印组的患者多期取石发生率、一期手术时间、手术出血量和主要术后并发症低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间的通道大小差异无统计学意义(P>0.05)。结论3D打印模型结合经皮肝Ⅰ期胆道造瘘联合硬质胆道镜手术治疗肝内胆管结石,手术时间短,取石率高,并发症少,安全性高,具备临床应用价值。

血流动力学参数联合ABCD3-Ⅰ评分对短暂性脑缺血发作患者脑卒中风险的预测价值

目的探讨血流动力学参数联合ABCD3-Ⅰ评分在短暂性脑缺血发作(TIA)后早期发生缺血性脑卒中(IS)风险的预测价值。方法收集2019年5月至2021年5月在解放军联勤保障部队第九八八医院神经内科就诊的TIA患者110例,根据TIA发作后7 d内结局分为7 d内IS组20例和7 d内无IS组90例,根据TIA发作后30 d内结局分为30 d内IS组31例和30 d内无IS组79例。ABCD3-Ⅰ评分低危患者15例,中危患者49例,高危患者46例。记录所有患者TIA发作时的ABCD3-Ⅰ评分及颈动脉血流动力学参数收缩期血流速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)及阻力指数(RI)。比较不同等级ABCD3-Ⅰ评分患者IS发生率;使用多因素logistic回归和ROC曲线分析。结果ABCD3-Ⅰ评分低、中、高危患者7、30 d内IS发生率比较,差异有统计学意义(P=0.000)。7 d内IS组高血压、RI及ABCD3-Ⅰ评分明显高于7 d内无IS组,PSV、EDV明显低于7 d内无IS组(P<0.05,P<0.01)。30 d内IS组高血压、RI及ABCD3-Ⅰ评分明显高于30 d内无IS组,PSV、EDV水平明显低于30 d内无IS组,差异有统计学意义(P<0.01)。高血压、PSV、EDV及ABCD3-Ⅰ评分均是TIA后7 d内及30 d内发生IS的危险因素(P<0.05,P<0.01);血流动力学参数联合ABCD3-Ⅰ评分预测TIA患者7 d及30 d内发生IS的曲线下面积分别为0.929(95%CI:0.864~0.970)和0.900(95%CI:0.828~0.949),均高于单独血流动力学参数或ABCD3-Ⅰ评分预测(P<0.05)。结论血流动力学参数联合ABCD3-Ⅰ评分可用于TIA发作后脑卒中风险的评估,预测价值高于单独指标。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

基于PI3K/AKT/GSK3β通路探讨党参多糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒性脑炎小鼠神经功能的影响及脑保护作用

目的:观察党参多糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠神经功能的影响及脑保护作用,并探究可能机制。方法:取全部50只巴比赛(BALB/c)小鼠,其中40只小鼠建立Ⅰ型HSE模型,除去试验过程中死亡小鼠,剩余30只随机分为HSV-Ⅰ组、党参多糖组、联合组,每组10只;另剩10只小鼠设为健康组。建模结束次日,联合组小鼠灌胃党参多糖(100 mg/kg),腹腔注射LY294002[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制剂]30 mg/kg;党参多糖组小鼠灌胃党参多糖(100 mg/kg),腹腔注射等体积二甲基亚砜(DMSO);健康组、HSV-Ⅰ组小鼠灌胃等量生理盐水,腹腔注射等体积DMSO。每日1次,持续7 d。检测血清炎性因子、氧化应激因子水平及神经功能指标;检测脑、肝、肺组织病毒滴度;免疫印迹法检测脑组织AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、GSK3β、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达。结果:与HSV-Ⅰ组比较,党参多糖组血清白介素-1β(IL-1β)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)、干扰素γ(IFN-γ)、钙结合蛋白(S-100B)水平降低,超氧化物歧化酶(SOD)活性水平、脑组织p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β升高,脑、肝、肺组织病毒滴度均降低(P<0.05);与党参多糖组比较,联合组血清IL-1β、NO、MDA、ROS、IFN-γ、S-100B水平升高,SOD活性水平、脑组织p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β降低,脑、肝、肺组织病毒滴度均升高(P<0.05)。结论:党参多糖可抑制炎症及氧化应激反应、减轻神经组织及脑组织损伤、抑制HSV-Ⅰ病毒复制,推测其作用机制与激活PI3K/AKT/GSK3β信号通路有关。

HBx蛋白抑制乙型肝炎病毒诱导肝细胞表达Ⅰ型干扰素的研究

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)对Ⅰ型干扰素表达的影响,并进一步探讨相关机制。方法:以HepG2细胞和稳转HBV基因组的HepG2.2.15细胞为模型,转染针对乙型肝炎病毒X(HBx)基因的小干扰RNA(siRNA)[HBx-siRNA]至HepG2.2.15细胞,转染HBx蛋白表达质粒pEGFP-HBx至HepG2细胞,荧光定量PCR技术分析各细胞中的IFN-α、IFN-β mRNA含量,荧光显微镜观察HepG2细胞内质粒pEGFP-HBx的表达,Western blot技术分析各细胞中HBx和p-IRF3蛋白含量变化,以探讨HBV通过HBx蛋白对Ⅰ型干扰素表达的影响。结果:IFN-α和IFN-β mRNA在HepG2.2.15细胞中的含量略高于HepG2细胞,差异无统计学意义(P>0.05);RNA干扰抑制HepG2.2.15细胞中HBx蛋白的表达后,细胞中IFN-α、IFN-β mRNA含量显著升高,转染pEGFP-HBx的HepG2细胞中Ⅰ型干扰素的基因表达量和p-IRF3的蛋白表达量均降低。结论:HBV通过HBx蛋白抑制IRF3蛋白的活化,从而抑制Ⅰ型干扰素的表达。

放射性^(131)Ⅰ诱导的甲状腺功能减退大鼠模型的构建

背景:目前,甲状腺功能减退动物模型造模过程中动物及药物剂量的选择各有差异,造模成功与否的标准也未得到统一。目的:探讨放射性^(131)Ⅰ诱导大鼠甲状腺功能减退模型的可行性和最佳剂量。方法:健康雄性SD大鼠40只,随机分为5组,每组8只。其中4组大鼠分别腹腔注射4.625,9.25,12.95,18.5 MBq^(131)Ⅰ溶液,构建甲状腺功能减退模型;另一组大鼠为正常对照组注射等量生理盐水。分别于注射^(131)Ⅰ前、注射^(131)Ⅰ后4,8,12,16周测量大鼠体质量变化,采用ELISA试剂盒法分别测定血清中促甲状腺激素、FT3、FT4、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、尿酸水平,通过甲状腺^(131)Ⅰ静态显像评价甲状腺功能,苏木精-伊红染色观察甲状腺组织形态学改变。结果与结论:①与对照组相比,第8,12,16周9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠体质量下降(P<0.05);9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠血清促甲状腺激素浓度在4,8,12,16周逐渐升高,FT3、FT4水平逐渐下降(P<0.05);12.95 MBq、18.5 MBq组大鼠丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平高于对照组,18.5 MBq组尿素氮、肌酐水平较对照组升高(P<0.05);②注射^(131)Ⅰ前,各组甲状腺清晰显影,靶/非靶比值无显著差异(P>0.05);与对照组相比,第4周9.25 MBq、12.95 MBq、18.5 MBq组甲状腺未见显影,靶/非靶比值减小(P<0.05),且在8,12,16周随访均未显影,但各剂量组之间靶/非靶比值差异无显著性意义(P>0.05);注射^(131)Ⅰ后大鼠甲状腺滤泡体积变小、萎缩,部分呈不规则形态;③结果表明,采用腹腔注射9.25 MBq剂量^(131)Ⅰ,且该剂量在4周内可使大鼠成功建立稳定的甲状腺功能减退模型,该研究为核医学^(131)Ⅰ治疗领域动物模型的建立提供参考。

miR-10b靶向TGFBR1/SMAD3通路对特发性矮小症的软骨细胞增殖、肥大的影响机制

目的研究miR-10b对特发性矮小症(ISS)的影响及作用机制。方法收集ISS患儿(ISS组)和体检健康儿童(健康对照组)各54例,qPCR检验血清miR-10b表达量,分析ISS组患儿血清miR-10b表达与患儿临床资料的关系。采用miR-10b inhibitor、si-TGFBR1及各自阴性对照转染C28/I2细胞,利用CCK-8实验检测C28/I2细胞增殖能力,Western blot检测侏儒相关转录因子2(RUNX2)、X型胶原α1链(COL10A1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、SMAD3、pSMAD3蛋白表达量。在StarBase数据库筛选miR-10b靶点,利用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10b与TGFBR1的靶向关系。结果ISS组血清miR-10b表达量高于健康对照组,且miR-10b表达越高,患儿的身高、IGF-1、骨特异性碱性磷酸酶的下降越明显(P<0.05)。与NC组相比,miR-10b inhibitor组细胞增殖能力升高,RUNX2、COL10A1、TGFBR1、pSMAD3蛋白表达上调(P<0.05);StarBase数据库提示miR-10b存在TGFBR1的结合位点,双萤光素酶报告基因实验证实两者结合。与si-NC相比,si-TGFBR1组TGFBR1表达量下调,细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论miR-10b通过靶向TGFBR1/SMAD3通路在特发性矮小症中抑制软骨细胞的增殖、肥大。

心安Ⅰ号胶囊对动脉粥样硬化模型大鼠血管炎症及PI3K/AKT/GRP78信号通路的作用机制研究

目的:探讨心安Ⅰ号胶囊对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠血管炎症及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)/葡萄糖调节蛋白78抗原(GRP78)信号通路的影响。方法:60只大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、AS组、心安Ⅰ号胶囊低剂量组、心安Ⅰ号胶囊中剂量组、心安Ⅰ号胶囊高剂量组、阿司匹林组,每组10只。除Sham组外均建立AS大鼠模型,建模成功后,心安Ⅰ号胶囊低、中、高剂量组分别给予0.47、0.94、1.88 g/kg的心安Ⅰ号胶囊药液灌胃,阿司匹林组给予0.25 g/kg的阿司匹林药液灌胃,Sham组及AS组给予等量蒸馏水灌胃。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清炎性因子水平;全自动生化分析仪检测血脂水平;苏木精-伊红(HE)染色观察组织病理形态;免疫组化检测颈动脉组织核转录因子κB(NF-κB)及NF-κB p65阳性表达;蛋白免疫印迹检测颈动脉组织检测PI3K、AKT、GRP78蛋白水平。结果:与Sham组比较,AS组大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管内皮黏附分子-1(VCAM-1)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及颈动脉组织中NF-κB、NF-κB p65阳性细胞数、PI3K、AKT、GRP78蛋白升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)平降低(P<0.05);与AS组比较,心安Ⅰ号胶囊低、中、高组TNF-α、IL-6、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1、TG、TC、LDL-C、NF-κB、NF-κB p65、PI3K、AKT、GRP78均降低,LDL-C水平升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;心安Ⅰ号胶囊高剂量组与阿司匹林组以上指标比较差异无统计学意义(P>0.05);Sham组大鼠颈部动脉壁未见增厚,未见斑块形成及损伤脱落;AS组大鼠动脉可见明显斑块,且伴随胆固醇结晶,血管内皮损伤及出现坏死组织沉积,心安Ⅰ号胶囊低剂量组存在稍许的动脉壁增厚,细胞排列整齐度较差,心安Ⅰ号胶囊中剂量组未见坏死细胞,增生纤维组织有所改善,心安Ⅰ号胶囊高剂量组及阿司匹林组未见坏死细胞,排列整齐,结构完整。结论:心安Ⅰ号胶囊可以显著改善AS大鼠血管炎症表达,减轻血脂紊乱,该机制与抑制PI3K/AKT/GRP78信号通路激活相关。

碲掺杂石墨烯的制备及电催化Ⅰ_(3)^(-)还原反应的教学实验设计

培养化学工程专业本科生的自主创新能力,是新时代高校化工教育高质量发展的必然需求。面向北京化工大学化工类本科生的创新能力培养,设计了碲掺杂石墨烯的制备及其电催化Ⅰ_(3)^(-)还原反应性能的教学实验,内容包括碲掺杂石墨烯的制备,掺杂含量调控,结构和化学组成分析,电催化性能测试,和光电性能测试。通过本教学实验,可以拓宽学生的学术视野,了解前沿学科发展动态;结合实验操作,学生还可掌握多种实验技能。通过对催化剂的构效关系解耦,有助于提升学生的独立思考能力和培养创新思维。

3D-精准构建臼杯和生物型臼杯系统在全髋关节置换手术中的应用效果及对患者骨特异性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型前胶原氨基端前肽水平的影响

目的:对比3D-精准构建臼杯和生物型臼杯系统(Pinnacle臼杯)在全髋关节置换手术中的应用效果,并分析两种方法对患者骨特异性磷酸酶(BGP)、骨钙素(BAP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)水平的影响。方法:选取60例老年股骨颈骨折患者为研究对象,均行全髋关节置换手术,随机分为观察组30例与对照组30例。对照组患者在全髋关节置换术中应用Pinnacle臼杯作为髋假体,观察组患者应用3D打印技术精准构建臼杯后,采取钛合金骨小梁金属臼杯作为髋假体。对比两组患者手术后3 d、术后1、3个月的运动VAS评分和静息VAS评分,Barthel指数与髋关节功能,BGP、BAP、PINP水平,并对比两组患者术后近远期并发症发生率和慢性疼痛现象。结果:术后3 d两组患者运动、静息VAS评分对比无统计学差异(均P>0.05),术后1、3个月两组运动、静息VAS评分均降低,术后3个月明显低于术后1个月和术后3 d,且观察组低于对照组(均P<0.05);术后3 d两组患者BGP、BAP、PINP水平对比无统计学差异(均P>0.05),术后1、3个月两组患者BGP、BAP、PINP水平明显升高,术后3个月明显高于术后1个月和术后3 d,且观察组高于对照组(均P<0.05);术后3 d两组患者Barthel指数与髋关节功能对比无统计学差异(均P>0.05),术后1、3个月两组Barthel指数、Harris评分均升高,术后3个月高于术后1个月和术后3 d,且观察组高于对照组(均P<0.05);观察组1例患者术后3 d出现伤口脂肪液化,1例术后5个月出现假体周围感染,并发症发生率为6.67%,对照组2例患者分别在术后3个月和10个月出现假体周围感染,1例患者术后12个月出现假体松动,并发症发生率为10.00%,两组对比无统计学差异(均P>0.05),且观察组慢性疼痛发生率6.67%,明显低于对照组26.67%(P>0.05)。结论:对老年股骨颈骨折全髋关节置换术患者采取3D-精准构建臼杯比常规Pinnacle臼杯更能够降低患者术后疼痛程度,提高骨代谢相关因子表达水平,促进髋关节功能水平恢复,减少慢性疼痛发生率,安全性较高,值得临床应用推广。