3p25.3p25.2染色体杂合缺失伴矮小及多发畸形1例遗传学特征与临床表型分析

目的 分析3号染色体p25.3p25.2(3p25.3p25.2)片段缺失的临床表型及分子遗传学特点.方法 回顾分析1例3p25.3p25.2染色体片段缺失患儿的临床资料,分析其临床表型及分子遗传学特征.结果 患儿,男,1岁4个月.宫内发育迟缓,重度矮小、全面生长发育落后、语言发育迟缓、特殊面容伴多发畸形(小头畸形、小下颌、长人中、低耳位、双侧耳前瘘管等)、先天性十二指肠闭锁、肠旋转不良,先天性心脏病、隐睾、龟头裸露、肌张力低下、婴儿期喂养困难、睡眠障碍、甲状腺功能减低.患儿染色体核型分析46,XY.基因芯片分析示3p25.3p25.2区域存在一段3327 kb的杂合缺失,共39个基因缺失.结论 3p25.3p25.2区域3327 kb杂合缺失,致SETD5、VHL、FANCD2基因缺失导致该患儿临床表型.

食管癌患者3p25等位基因杂合缺失的初步研究

目的 :检测 35例食管癌患者 3p2 5 D3S10 38染色体位点的杂合缺失 ,为寻找此位点附近潜在的抑癌基因奠定基础。 方法 :微卫星 DNA- PCR-银染法检测 3p2 5 D3S10 38位点杂合缺失。结果:3p2 5 D3S10 38位点有 11例存在杂合缺失 (L OH) ,L OH率为 31.4 % ,此位点杂合缺失在各民族中均存在。结论:3p2 5 D3S10 38存在杂合缺失且有一定发生频率 ,可能与食管癌的发生有关 ,值得继续研究。

158例非小细胞肺癌中3p25杂合性丢失研究

目的 探讨非小细胞肺癌组织 (NSCLC)中 3p2 5位点上等位基因的杂合性丢失 (LOH)与肺癌发生、发展的相关性。方法 采用银染聚合酶链反应结合二核苷酸 (CA)n重复程序出现多态性评价LOH ,分析 1 58例NSCLC癌组织中 3p2 5等位基因的LOH。结果 1 58例NSCLC组织中 80例出现 3p2 5LOH ,总的杂合性丢失率为 50 .6%。腺癌组织中 3p2 5杂合性丢失率为 62 .0 % ,鳞癌为 43 .2 % ,两者间差异有显著性 (P <0 .0 5)。 3p2 5LOH与NSCLC临床分期关系不明显 ,Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期分别为 52 .2 %、45.0 %及 52 .8% ,4例良性肺肿瘤和 5例正常胎儿肺组织均未出现 3p2 5LOH。结论 本研究结果表明 3p2 5LOH在NSCLC中普遍存在 ,从而说明 3p2 5位点处可能存在着某些与肺癌发生。

糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

血清miR-25-3p和IBSP表达在乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的应用价值

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清微小RNA(miR)-25-3p和整合素结合唾液酸蛋白(IBSP)表达的应用价值。方法回顾性选取2021年11月至2023年12月大庆龙南医院收治的乙型肝炎肝硬化患者150例、慢性乙型肝炎患者50例、健康体检人员50名分别作为肝硬化组、肝炎组、健康组。统计分析3组研究对象的血清miR-25-3p和IBSP表达水平;分析不同临床参数与血清miR-25-3p和IBSP表达水平关系;分析肝硬化患者肝功能评分与血清miR-25-3p和IBSP表达水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响肝硬化失代偿并发腹腔积液的因素;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-25-3p和IBSP表达水平单独与联合检测在肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的价值。结果肝硬化组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平分别为5.21±0.40、(9.33±1.27)ng/mL,均明显高于肝炎组[1.15±0.33、(3.14±0.36)ng/mL]、健康组[0.91±0.11、(1.01±0.30)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);肝炎组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均明显高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。中、重度肝纤维化、有消化道出血、有腹腔积液患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均分别高于轻度肝纤维化、无消化道出血、无腹腔积液患者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组患者的Child-Pugh评分、血清蛋白胆红素评分(ALBI)、终末期肝病模型评分(MELD)与血清miR-25-3p和IBSP表达水平均呈显著正相关(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液影响因素包括miR-25-3p、IBSP(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清miR-25-3p和IBSP表达水平联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度和约登指数均明显高于单独检测(P<0.05)。结论乙型肝炎肝硬化患者病情越重,血清miR-25-3p和IBSP表达水平越高。检测血清miR-25-3p和IBSP表达水平能够为乙型肝炎肝硬化病情的判断及肝硬化失代偿并发腹腔积液的诊断提供有效依据。

血清circCOL1A2和miR-25-3p水平与T2DM合并DR的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组。分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血4~6 mL。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测3组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标。分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值。结果(1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000)。NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000)。3组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000)。NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000)。DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000)。(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000)。2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027)。Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045)。(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000)。(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000)。(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素。结论T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值。

血清miR-25-3p、CXCL12水平与非小细胞肺癌患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系分析

目的:分析血清miR-25-3p、脊髓趋化因子CXC配体12(CXCL12)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系。方法:选择2017年02月至2020年07月医院收治的175例NSCLC患者,所有患者均接受胸腔镜肺叶切除术治疗。术前检测患者血清miR-25-3p、CXCL12水平,术后随访3年,根据患者预后情况分为预后不良组(复发转移)与预后良好组(非复发转移)。对比预后不良组与预后良好组血清miR-25-3p、CXCL12水平,对比预后不良组与预后良好组的临床资料,分析NSCLC患者术后预后不良的影响因素,分析血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合对NSCLC患者术后预后不良的预测价值。结果:随访3年,175例患者失访6例,随访率为96.57%,其中复发转移31例,复发转移率为18.34%,剩余138例均未发生复发转移,中位复发转移时间为24.75个月(95%CI:18.32~28.47)。预后不良组血清miR-25-3p、CXCL12水平高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组Ⅱ期、低分化例数占比高于预后良好组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,Ⅱ期(HR=3.827,95%CI:1.682~8.705)、低分化(HR=3.466,95%CI:1.524~7.884)、血清miR-25-3p(HR=2.732,95%CI:1.201~6.215)、血清CXCL12(HR=3.152,95%CI:1.386~7.170)为NSCLC患者术后预后不良的影响因素(P<0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线结果显示,血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合预测NSCLC患者术后预后不良的灵敏度分别为80.65%(95%CI:0.627~0.853)、83.87%(95%CI:0.641~0.869)、93.55%(95%CI:0.782~0.973),特异度分别为78.26%(95%CI:0.602~0.835)、76.09%(95%CI:0.584~0.791)、91.30%(95%CI:0.769~0.934),曲线下面积(area under curve,AUC)值分别为0.767、0.755、0.908(P<0.05),且二者联合的AUC值更高(P<0.05)。结论:术前检测血清miR-25-3p、CXCL12水平可用于预测NSCLC患者胸腔镜肺叶切除术后预后,且二者联合的预测价值更高。

松下TC-33P25G彩电总线调整

松下TC-33P25G彩电是松下公司开发的大屏幕多制式彩色电视机机心，采用新型频率合成调谐系统和总线控制技术，可接收国际线路21种制式电视信号，具有射频画中画处理功能。

人单核细胞株巨细胞病毒编码miR-US25-1-3p过表达后蛋白质组学变化分析

目的分析人单核细胞株(THP-1)过表达人巨细胞病毒(HCMV)编码miR-US25-1-3p后蛋白质表达谱变化及价值。方法采用脂质体将hcmv-miR-US25-1-3p模拟物转染THP-1细胞构建hcmv-miR-US25-1-3p过表达细胞株,RT-qPCR验证转染效果;采用串联质谱标签标记联合液相色谱-串联质谱对hcmv-miR-US25-1-3p过表达后THP-1细胞蛋白质组学进行定量分析,生物信息学分析差异表达蛋白质生理病理功能;westernblot验证重要差异蛋白表达变化。结果与对照相比,THP-1细胞过表达hcmV-miR-US25-1-3p后65种蛋白质呈现差异表达,其中17种上调,48种下调。GO、COG和KEGG注释及功能预测结果显示,差异表达蛋白主要参与炎症反应信号通路、代谢过程、细胞及遗传信息功能,与肿瘤、病毒性心肌炎、非酒精性脂肪肝、原发性免疫缺陷病、类风湿关节炎、多种病原体感染、阿尔茨海默病、亨廷顿病等多种疾病相关。48种下调蛋白质中,文献调研和生物信息学分析发现,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)参与抗病毒及炎症反应,上述蛋白质下调表达经western blot验证。结论HCMV编码的hcmv-miR-US25-1-3p能够影响宿主蛋白表达谱,并可能通过抑制TRAIL和RANTES表达,促进病毒潜伏、免于宿主细胞杀伤。

急性胰腺炎患者血清miR-25-3p、TLR4水平变化及其临床意义

目的检测血清微RNA(microRNA,miR)-25-3p,Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达水平,并讨论两者与急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者预后的关系。方法选取2019年3月至2021年3月丽水市第二人民医院收治的178例AP患者作为AP组,同期体检的健康者100例作为对照组。AP组根据病情分为轻型急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)组(n=95)和重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)组(n=83),根据治疗后3个月预后情况分为生存组(n=148)和死亡组(n=30)。比较miR-25-3p、TLR4在各组患者血清中的表达水平,分析miR-25-3p与TLR4表达水平的相关性,采用多因素Logistic回归分析AP患者预后的影响因素,受试者操作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析血清miR-25-3p、TLR4预测AP患者预后的价值。结果AP组血清miR-25-3p表达水平明显低于对照组,TLR4表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SAP组血清miR-25-3p表达水平明显低于MAP组,TLR4表达水平明显高于MAP组,差异均有统计学意义(P<0.05)。AP组miR-25-3p表达水平与TLR4呈负相关(r=-0.731,P<0.001)。生存组的血清miR-25-3p表达水平明显高于死亡组,而TLR4表达水平明显低于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,脂肪酶、急性生理与慢性健康评分Ⅱ(acute physiological and chronic health evaluation-Ⅱ,APACHEⅡ)评分及miR-25-3p为AP患者预后的影响因素。ROC结果显示,血清miR-25-3p、TLR4及联合预测AP预后死亡的曲线下面积为0.844[95%置信区间(confidence interval,CI):0.784~0.904、0.835(95%CI:0.734~0.936)及0.914(95%CI:0.861~0.967)。结论AP患者血清miR-25-3p表达水平降低,TLR4表达水平升高,二者均与病情严重程度及预后有关,联合检测其表达水平有助于评估预后。

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和裂解的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验确认miR-25-3p与lncRNA OIP5-AS1和SOX4的靶向关系。结果 与NG组相比,HG组细胞中lncRNA OIP5-AS1和SOX4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-25-3p水平降低(P<0.05);敲低lncRNA OIP5-AS1可显著下调SOX m RNA和蛋白水平,上调miR-25-3p水平,增加HK-2细胞活力和SOD、CAT活性以及Bcl-2蛋白水平,降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA、ROS水平、Bax蛋白水平及Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(P<0.05);上调miR-25-3p表达与敲低lncRNA OIP5-AS1的作用一致;在敲低lncRNA OIP5-AS1的基础上,下调miR-25-3p可明显减弱lncRNA OIP5-AS1敲低对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示lncRNA OIP5-AS1和miR-25-3p,以及miR-25-3p和SOX4之间存在结合位点。结论 lncRNA OIP5-AS1可能通过miR-25-3p/SOX4轴促进高糖诱导的HK-2细胞损伤。

血清因子表达与乙肝纤维化及病理变化程度的关系

目的探讨血清因子25(OH)D3、miR-25-3p、CHI3L1表达与乙肝纤维化及病理变化程度的关系。方法选取我院收治乙肝患者100例,统计分析不同炎症活动度、肝纤维化分期患者的血清25(OH)D3、miR-25-3p、CHI3L1表达,分析不同肝纤维化分期患者的肝纤维化指标。结果炎症活动度G0~G1、G2、G3、G4患者的血清25(OH)D3表达逐渐降低(P<0.05),血清miR-25-3p、CHI3L1表达均逐渐升高(P<0.05);肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4患者的血清25(OH)D3表达逐渐降低(P<0.05),血清miR-25-3p、CHI3L1表达逐渐升高(P<0.05)。肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4患者的血清PCⅢ、CIV、LN、HA表达均逐渐升高(P<0.05)。结论血清25(OH)D3与乙肝炎症活动度、肝纤维化分期均呈负相关关系,血清miR-25-3p、CHI3L1表达与乙肝炎症活动度、肝纤维化分期均呈正相关关系。

MiR-25-3p靶向NOTCH1对食管鳞癌细胞ECA109侵袭、迁移、增殖的影响

目的探讨miR-25-3p靶向NOTCH1基因对食管鳞癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响,阐明miR-25-3p和NOTCH1基因在食管鳞癌中的作用机制。方法将ECA109细胞以1×10~6/ml均匀接种于培养皿,每组设3个复孔,实验分为两组。第1组:miR-25-3p上调组(转染miR-25-3p模拟物)、miR-25-3p下调组(转染miR-25-3p抑制剂)和NC组;第2组:NOTCH1上调组(转染NOTCH1模拟物)、NOTCH1下调组(转染NOTCH1抑制剂)和NC组。实时荧光定量PCR法分别检测各组miR-25-3p、NOTCH1表达水平,Transwell小室检测转染miR-25-3p、NOTCH1后ESCC细胞侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖能力,生物信息学分析和荧光素酶活性测定以确定NOTCH1是否为miR-25-3p的靶基因。结果①NOTCH1是miR-25-3p的靶基因;②细胞实验结果显示,与NC组相比,miR-25-3p上调组促进ECA109细胞的侵袭(P<0.05),CCK-8增殖试验显示在ECA109细胞中miR-25-3p上调组促进细胞增殖(P<0.05);③下调NOTCH1促进细胞生长(P<0.05),下调NOTCH1可增强ECA109细胞的侵袭能力(P<0.005),上调NOTCH1可抑制ECA109细胞的侵袭能力(P<0.005)。结论 miR-25-3p通过靶向调节NOTCH1促进人ESCC细胞的侵袭、迁移和增殖,miR-25-3p有望成为ESCC治疗的新靶点。

miR-25-3p靶向ADAM15保护脓毒症诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探讨miR-25-3p是否靶向去整合素金属蛋白酶15(ADAM15)保护脓毒症诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法以脂多糖(LPS)诱导HUVEC模拟脓毒症内皮细胞损伤。实时定量PCR、免疫印迹法检测LPS诱导后HUVEC中miR-25-3p和ADAM15表达量。噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术分析miR-25-3p和ADAM15表达对LPS处理的HUVEC活力、凋亡的影响。试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)释放量以及乳酸盐脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。双荧光素酶实验和免疫印迹法分析miR-25-3p对ADAM15的调控作用。结果LPS诱导后HUVEC中miR-25-3p表达量显著降低(P<0.05),ADAM15表达量显著增加(P<0.05)。过表达miR-25-3p或沉默ADAM15后LPS诱导的HUVEC活力、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05),凋亡率、MDA含量以及LDH释放量显著降低(P<0.05)。miR-25-3p直接靶向结合ADAM15并负调控其表达。过表达ADAM15显著减弱miR-25-3p过表达对LPS处理的HUVEC活力、凋亡、氧化损伤的影响(P<0.05)。结论miR-25-3p靶向ADAM15可拮抗LPS诱导的HUVEC损伤,miR-25-3p/ADAM15途径是脓毒症内皮细胞损伤的潜在靶点。

miR-25-3p靶向NF2对恶性外周神经鞘瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探究miR-25-3p对恶性外周神经鞘瘤细胞ST88-14增殖、迁移及侵袭的影响,并初步研究其作用机制。方法体外培养ST88-14细胞,随机分为对照组(不做转染处理)、miR-25-3p inhibitor组(用miR-25-3p inhibitor储存液转染)和miR-25-3p阴性对照(NC)组(用miR-25-3p NC储存液转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各组细胞miR-25-3p及2型神经纤维瘤(NF2)mRNA表达情况。噻唑蓝(MTT)法检测各组ST88-14细胞增殖情况。划痕实验和侵袭实验(Transwell)检测各组ST88-14细胞迁移和侵袭能力。蛋白印迹分析法检测各组ST88-14细胞Merlin蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与NF2的靶向关系。结果与对照组和miR-25-3p NC组相比,miR-25-3p inhibitor组ST88-14细胞miR-25-3p表达水平、细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、NF2 mRNA及Merlin蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。miR-25-3p与NF2 mRNA 3′-非翻译区(3′-UTR)有结合位点,与NF2-3′UTR-WT+miR-25-3p NC组比较,NF2-3′UTR-WT+miR-25-3p inhibitor组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论miR-25-3p可能通过靶向上调NF2表达,抑制恶性外周神经鞘瘤细胞的增殖、迁移及侵袭行为。

circRNA001131通过结合miR-25-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达

目的:研究环形RNA(circRNA)001131对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法:采用Masson三色染色法对腹主动脉缩窄(AAC)手术诱导的心肌重构大鼠心肌进行胶原纤维的染色观察。利用芯片检测AAC手术诱导的大鼠心肌中circRNA表达谱的变化。RT-qPCR检测AAC大鼠心肌及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的大鼠CFs中circRNA001131的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA001131的稳定性。利用重组circRNA001131腺病毒(rAd-circRNA001131)感染大鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验验证circRNA001131与miR-25-3p的结合作用。结果:RT-qPCR结果证实,circRNA001131在AAC手术诱导的大鼠心肌和Ang-Ⅱ处理的大鼠CFs中表达增强。放线菌素D和RNase R实验结果显示,circRNA001131与其宿主基因--第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Pten)mRNA相比,降解水平明显降低。过表达circRNA001131可显著抑制大鼠CFs中纤维化相关基因Col1a1和Col3a1的表达。双萤光素酶报告基因实验证实circRNA001131与miR-25-3p间存在结合作用,miR-25-3p可以减弱circRNA001131对大鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论:circRNA001131在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-25-3p发挥抑制心肌纤维化的作用。

miR-92a-3p和miR-25-3p海绵上调Kiss1并影响雌性小鼠的青春期启动及动情周期

下丘脑Kiss1神经元产生的神经肽kisspeptin通过影响促性腺激素释放激素的分泌,参与青春期的启动、生殖系统的成熟以及排卵等过程的神经内分泌调节。Kiss1基因的表达受到包括多种反式调控因子及表观遗传的调控。预测与前期研究表明,miR-92a-3p、miR-25-3p的种子序列能够与Kiss1的3′-UTR直接结合,抑制Kiss1的表达。为进一步研究miR-92a-3p、miR-25-3p在Kiss1表达调控中的作用,本研究分别构建了对miR-92a-3p、miR-25-3p具有抑制作用的特异性吸附海绵载体:sponge-miR-92a和sponge-miR-25,以实现miRNA的功能缺失。流式细胞术和双荧光素酶报告基因系统分别证实,这2个海绵载体均能够非常有效地吸附外源性或内源性靶miRNA。sponge-miR-92a和sponge-miR-25载体被进一步包装成慢病毒LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25。实时荧光定量PCR结果显示,经LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25感染的下丘脑原代神经元细胞中,Kiss1表达水平均显著上调(P<0.05);将LV-sponge-miR-92a注射到下丘脑后,雌性小鼠阴门开启时间明显提前(P<0.05);下丘脑注射LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25扰乱了雌性小鼠的正常动情周期。综上所述,成功构建了能够有效吸附miR-92a-3p、miR-25-3p的海绵载体,证明它们在解除miR-92a-3p、miR-25-3p对Kiss1的抑制中的作用,下丘脑注射海绵对雌性小鼠的阴门开启时间和动情周期均产生一定程度的影响,提示miR-92a-3p、miR-25-3p可能在青春期的启动和生殖成熟过程中发挥重要的作用。

miR-25-3p通过靶向TLR4抑制糖尿病肾病炎症反应

目的:探讨miR-25-3p靶向Toll样受体4(TLR4)对小鼠糖尿病肾病炎症的影响。方法:应用原位杂交检测miR-25-3p在糖尿病肾病(DN)患者肾组织中的表达。采用生物信息学预测miR-25-3p的靶标基因,双荧光素酶报告验证miR-25-3p对TLR4的调控作用。在DN小鼠尾静脉注射miR-25-3p agomir或者agomir NC,治疗4周后处死,采用终点法测24 h尿白蛋白(UP)含量,采用血糖仪测定血糖,采用RT-qPCR检测miR-25-3p和TLR4的表达量,Western blot检测TLR4和促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量,采用HE染色观察肾组织病理学变化。结果:miR-25-3p在DN小鼠肾组织表达降低。miR-25-3p靶向调控TLR4基因表达。与注射agomir NC的db/db小鼠相比,在miR-25-3p agomir治疗的db/db小鼠中miR-25-3p的表达水平明显升高(P<0.05),而尿微量白蛋白、血糖、TLR4和促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-25-3p通过靶向TLR4抑制糖尿病肾病,对糖尿病肾病具有保护作用。

血浆外泌体通过微小RNA-25-3p对心肌纤维化影响的初步研究

目的:初步明确血浆外泌体及其内容物微小RNA-25-3p(microRNA-25-3p,miR-25-3p)对心肌纤维化的影响。方法:分别提取10只健康C57BL/6小鼠(对照组)和10只心肌梗死术后小鼠(心肌纤维化模型组)的血浆外泌体。利用电镜、纳米跟踪颗粒分析、标志物蛋白检测鉴定外泌体;实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测两种外泌体对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导下的小鼠心脏成纤维细胞纤维化水平的影响;q PCR检测两种外泌体内miR-25-3p的水平;Western blot和免疫荧光染色检测miR-25-3p模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞增殖和向肌成纤维细胞分化能力的影响。结果:对照组血浆外泌体可使AngⅡ诱导增加的纤维化相关指标下调,而心肌纤维化模型组外泌体则失去这一功能且其内miR-25-3p含量更高;miR-25-3p模拟物上调纤维化相关指标,而miR-25-3p抑制物则表现相反作用。结论:健康小鼠血浆外泌体可改善心肌纤维化;血浆外泌体内的miR-25-3p上调可促进心肌纤维化发生。

微小RNA-25-3p靶向下调甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5基因对乳腺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨微小RNA-25-3p(miR-25-3p)靶向甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5(GDPD5)对乳腺癌细胞顺铂耐药性的影响及分子机制。方法本研究起止时间为2018年10月至2019年6月,人乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌顺铂耐药细胞MCF-7/DDP购于中国科学院上海细胞研究所,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测正常乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌顺铂耐药细胞MCF-7/DDP中miR-25-3p、GDPD5和谷胱甘肽巯基转移酶π(GST-π)的表达水平。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测过表达miR-25-3p或过表达miR-25-3p联合顺铂对MCF-7/DDP细胞的增殖抑制作用,蛋白质印迹法检测GDPD5、GST-π和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-25-3p和GDPD5的靶向关系。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7/DDP细胞中miR-25-3p的表达显著下调,GDPD5和GST-π的表达显著上调。过表达miR-25-3p后,MCF-7/DDP细胞存活率显著降低[(50.36±5.04)%比(100.00±10.11)%],CyclinD1相对表达水平降低(0.40±0.05)比(1.12±0.11),GST-π表达水平降低(0.35±0.04)比(1.15±0.12);且过表达miR-25-3p可降低MCF-7/DDP细胞的顺铂耐药性。miR-25-3p可靶向负性调控GDPD5的表达。过表达GDPD5可部分逆转miR-25-3p对MCF-7/DDP细胞增殖和顺铂耐药性的影响。结论miR-25-3p通过靶向下调GDPD5抑制MCF-7/DDP细胞存活,进而降低MCF-7/DDP细胞对顺铂的耐药性。