防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用研究

目的 研究中药防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用及其作用机制。方法 建立LPS诱导小鼠RAW264.7细胞体外炎症模型,采用MTT比色法测定不同浓度(160、80、40、20、10μmol/L)5-O-甲基维斯阿米醇苷对小鼠RAW264.7细胞活性的影响;实验分空白组,LPS组,阳性对照组(吲哚美辛,10μmol/L),5-O-甲基维斯阿米醇苷低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量组,空白组、LPS组加入空白培养基,其余给药组加入相应药物,2h后加入LPS(10μg/mL),采用格里斯试剂法检测小鼠RAW264.7细胞上清液的一氧化氮(NO)的分泌,酶联免疫吸附试验法检测小鼠RAW264.7细胞中的前列腺素E_(2)(PGE_(2))、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,RT-qPCR检测小鼠RAW264.7细胞核因子-κB(NF-κB)p65、白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)的mRNA表达,Western blot检测Toll受体4(TLR4)、NF-κB p65蛋白表达。结果5-O-甲基维斯阿米醇苷(10~80μmol/L)对小鼠RAW264.7细胞活性无明显影响。与空白组比较,LPS组小鼠RAW264.7细胞NO、PGE_(2)、TNF-α含量升高(P<0.01),NF-kB p65、IL-1β、INOS、COX-2的mRNA表达及TLR4、NF-κB p65蛋白表达增加(P<0.01);与LPS组比较,5-O甲基维斯阿米醇苷低、中、高剂量组R小鼠AW264.7细胞中NO、PGE_(2)、TNF-α含量均降低(P<0.01),NF-κB p65、IL-1β、INOS、COX-2的mRNA表达和TLR4、NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.01)。结论 防风中5-O甲基维斯阿米醇苷能抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症反应,具有一定的抗炎作用。

防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷抗炎作用及机制研究

目的研究防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷的抗炎作用及其机制。方法建立脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠单核巨噬细胞体外炎症模型,采用酶联免疫吸附测定法细胞中的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR4)含量;采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎模型,观察5-O-甲基维斯阿米醇苷对结肠炎小鼠结肠损伤的影响,采用酶联免疫吸附测定法测定小鼠结肠组织上清液中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β蛋白表达。结果与脂多糖组比,5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组能降低RAW264.7炎症细胞中IL-1β、IL-6、TLR4含量(P<0.01),并呈现浓度依赖性;与空白组比,结肠炎模型组小鼠体质量及结肠长度降低,结肠组织有明显的病理改变。与模型组比,5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组能缓解结肠炎小鼠肠炎症状和减轻肠黏膜病理损伤,降低结肠中MDA含量,增加SOD活性(P<0.01),并能下调结肠组织中的TNF-α、IL-1β蛋白表达水平(P<0.01)。结论防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷可抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症,对DSS诱导小鼠结肠炎有一定的治疗作用。

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法:建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法,将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组,并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导平滑肌细胞增殖的作用,用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果:升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均能明显抑制TNF-α引起的平滑肌细胞增殖,与TNF-α组相比有极显著差异(P<0.01)。升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均使G1/G0期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少,与TNF-α组相比差异极显著(P<0.01)。结论:升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。

RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量

目的建立防风药材中4种有效成分含量同时测定的方法，以比较不同产地防风药材及不同部位中有效成分的含量，为防风药材质量标准的制定及防风的资源开发提供科学依据。方法采用RP-HPLC法。色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-水，梯度洗脱；流速：1．0mL·min^-1；检测波长：254mm；柱温：30℃。结果升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷能够达到基线分离；升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷质量浓度在1．92～400mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9998，n=5），平均加样回收率分别为97．5％、97．7％，RSD分别为1．3％、2．8％（n=9）；升麻素、亥茅酚苷质量浓度在0．96～200mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999，n=5），平均加样回收率分别为99．3％、97．7％，RSD分别为2．0％、1．7％。结论本方法为防风药材的资源开发提供了参考，可用于防风药材的质量控制。

HPLC测定感冒清热颗粒中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷

目的 :建立反相高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中的升麻苷及 5 O 甲基维斯阿米醇苷含量 ;方法 :采用APEXODS色谱柱 ,分别以醋酸钠水溶液 (40mmol·L-1,pH 6 .9) 甲醇 (6 5∶35 )和水 甲醇 四氢呋喃 (6 2∶38∶1)为流动相 ,检测波长为 2 5 4nm ,流速为 0 .8mL·min-1;结果 :升麻苷与 5 O 甲基维斯阿米醇苷分别在 0 .72～ 6 .5 μg·mL-1与 0 .92～ 16 .5 μg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好 (r =0 .9999) ;加样回收率分别为 10 0 .3%和 94 .7%。测得感冒清热颗粒中含有升麻苷 0 .133mg·g-1和 5 O 甲基维斯阿米醇苷 0 .16 7mg·g-1。结论 :该法简便、快速。

升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙对血管内皮细胞分泌细胞因子的影响

目的:观察升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致心脏微血管内皮细胞损伤,引起IL-6和TNF-α分泌的影响。方法:采用体外培养的乳鼠心脏微血管内皮细胞,测定其生长曲线及药物的最大无毒浓度后,经升麻甙(50、100、200μg/ml)与5-O甲基维斯阿米醇甙(50、100、200μg/ml)预处理24h,再与ox-LDL(MDA含量为3nmol/ml)共同孵育24h,用ELISA法和放免法分别检测细胞培养液中IL-6和TNF-α的水平。结果:升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙在50、100、200μg/ml时能够明显抑制ox-LDL引起的内皮细胞IL-6、TNF-α分泌,且呈剂量依赖性。结论:升麻甙与5-O甲基维斯阿米醇甙能够抑制血管内皮细胞产生炎性细胞因子IL-6和TNF-α。

HPLC法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(5μm,150 mm×4.6 mm id)柱,甲醇-水流动相体系梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.7 ml/min,柱温25℃,进样量5μl。结果成功建立了防风中4种主要成分的HPLC含量测定方法,且方法学考察结果良好。结论该方法简便可行,定量准确,可用于防风中4种主要成分的质量控制。

高效液相色谱法测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的测定感冒清热颗粒中5-0-甲基维斯阿米醇苷的含量。方法采用高效液相色谱法,Hypersil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-水(44∶56)为流动相;流速1.0mL/min;检测波长:292nm。结果5-0-甲基维斯阿米醇苷在0.0922～0.922μg范围呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.9%,RSD=0.71%(n=6)。结论本测定方法简便、准确、重复性好,可用于感冒清热颗粒质量控制。

参浮化痰丸质量标准的研究

目的建立参浮化痰丸(党参、浮小麦、陈皮、防风、黄芩、制半夏等)的质量标准。方法采用薄层色谱法对参浮化痰丸中的陈皮、防风、黄芩进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定制剂中橙皮苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷的质量浓度。橙皮苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的色谱条件为SYMMETRY C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(17∶83),检测波长分别为283 nm和254 nm,柱温为30℃,体积流量为1.0mL/min;升麻素苷的色谱条件为SYMMETRY C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(33∶67),检测波长254 nm,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min。结果制剂中陈皮、防风、黄芩的薄层斑点清晰,分离度好,专属性强,阴性对照无干扰。橙皮苷在150.0～750.0μg/mL范围内,峰面积与进样质量浓度具有良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为102.63%,RSD为1.29%;5-O-甲基维斯阿米醇苷在99.1～495.6μg/mL范围内,峰面积与进样质量浓度线性关系良好,r=0.999 9,平均加样回收率为102.62%,RSD为1.17%;升麻素苷在7.7～38.6μg/mL范围内,峰面积与进样质量浓度有良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为97.02%,RSD为1.25%。结论所建立的方法可靠、准确、专属性强,可以用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法同时测定玉屏风汤剂中6种成分

目的建立以高效液相色谱法同时测定玉屏风散中2类化合物(黄酮类和色原酮类)6种有效成分升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷、芒柄花素含量的分析方法。方法采用AgilentExtend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温25℃;流动相为甲醇-1%乙酸水溶液,梯度洗脱,流速0.8mlmin;检测波长254nm。结果升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷、芒柄花素分别在90～1810ng、97～1940ng、190～1906ng、105～3144ng、88～2625ng、109～3279ng范围内标准曲线呈良好的线性关系,相关系数均在0.9999以上;平均加样回收率分别为98.2%,99.1%,97.3%,97.8%,98.8%,99.2%。结论方法简便快速,结果准确,重复性好,线性范围宽,灵敏度高,可用于玉屏风制剂中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷和芒柄花素含量的同时测定,为玉屏风散质量监控及新剂型研究提供了更加合理、可靠的检测方法。

防风色原酮类成分的近红外光谱定量分析

目的:本文建立了能快速测定防风中升麻素、4种色原酮含量之和的近红外光谱定量模型。方法:用高效液相色谱法测定55批防风饮片的4种色原酮的含量作为参考值,结合偏最小二乘回归法(PLS)建立回归模型。筛选了不同的光谱预处理方法、波段及最佳因子数,最终模型通过相关系数(R2)、预测均方根误差(RMSEP)和校正均方差(RMSEC)来评估其稳健性。结果:升麻素的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 025 0、0. 024 0、0. 949 9,4种色原酮含量总和的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 2460、0. 1720、0. 9110。结论:本研究建立的近红外光谱定量模型较准确,可用于对防风质量的快速检测。

磷肥和钾肥配合施用对防风有效成分含量的影响

为了研究不同配比的磷钾肥对1 a生、2 a生有效成分含量的影响,采用田间试验测定1 a生、2 a生防风根干重,以HPLC测定防风有效成分升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。结果表明,当1 a生和2 a生防风施肥处理分别为P2O5124 kg/hm2和K2O 46 kg/hm2、P2O5186 kg/hm2和K2O 92 kg/hm2时,防风根干重均达到最大值。当1 a生、2 a生防风分别施用P2O5124 kg/hm2和K2O 46 kg/hm2、P2O5124 kg/hm2和K2O 92 kg/hm2时,防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷总含量最高。钾肥对1 a生、2 a生防风根干重均有显著影响。最适于防风有效成分积累的磷肥量为P2O5124 kg/hm2。一定范围内配合施用磷钾肥促进防风生长,有利于升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量积累。综合考虑产量与品质,在田间氮素补至一致条件下,即每公顷含氮量为72 kg时,1 a生、2 a生防风肥料施用量分别为P2O5124 kg/hm2和K2O 46 kg/hm2、P2O5124 kg/hm2和K2O 92 kg/hm2,可获得成本低、优质高产防风,对于农业生产实践具有指导意义。

关防风HPLC特征指纹图谱研究及4个色原酮类成分一测多评法分析研究

目的:建立指纹图谱及一测多评法测定关防风中4个化学成分含量。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～10min,20%A→40%A;10～30 min,40%A→65%A;30～40 min,65%A;40～60 min,65%A→80%A;60～70min,80%A),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温30℃;采用高效液相色谱法测定12批关防风的指纹图谱,建立指纹图谱共有模式。以5-O-甲基维斯阿米醇苷为内参物,建立升麻素、升麻素苷、亥茅酚苷的相对校正因子,并进行含量计算,实现一测多评。同时采用外标法测定12批关防风中4个色原酮类成分的含量,比较计算值与实测值的差异,验证一测多评法的准确性。结果:12批关防风指纹图谱标定了共20个共有峰,指认了其中7个化学成分。12批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.90。建立的相对校正因子重现性良好,采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著差异(P>0.05);通过聚类分析,栽培品和野生药材能有效区分。结论:所建立的方法准确、可行,可用于关防风中4个化学成分的定性定量分析。

齿痛消炎灵颗粒HPLC特征指纹图谱研究及多成分定量测定

目的建立齿痛消炎灵颗粒(CXG)的HPLC指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价其质量提供依据。方法采用Dikma Luster ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱:0~15 min,20%~30%甲醇;15~30 min,30%甲醇;30~40 min,30%~60%甲醇;40~55 min,60%甲醇;体积流量1.0 m L/min;检测波长254、283、274、300 nm;柱温30℃。通过相似度评价对10批次CXG指纹图谱进行质量评价,并对指认的6个指标成分进行定量测定。结果共确定CXG HPLC指纹图谱18个共有峰,通过与混合对照品比较指认其中6个指标成分分别为升麻素苷(4号峰)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(7号峰)、胡薄荷酮(10号峰)、橙皮苷(15号峰)、丹皮酚(16号峰)和欧前胡素(17号峰),利用相似度软件对10批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0.9以上。升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、橙皮苷、丹皮酚和欧前胡素线性范围分别为0.013~0.505 mg/m L(r=0.999 8)、0.052~2.097 mg/m L(r=0.999 2)、0.019~0.772 mg/m L(r=0.998 9)、0.025~1.003 mg/m L(r=0.999 1)、0.006~0.251 mg/m L(r=0.999 5)和0.014~0.576 mg/m L(r=0.999 4)。10批样品中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、橙皮苷、丹皮酚和欧前胡素线质量分数分别在7.267~7.333 mg/g、4.260~4.522 mg/g、2.033~2.093 mg/g、12.234~12.771 mg/g、19.023~19.334 mg/g和11.152~11.291 mg/g。结论所建立的CXG HPLC指纹图谱和定量测定分析方法灵敏度高、专属性强,可用于CXG的质量控制。

防风药材质量标准研究

目的对防风药材进行质量标准提高研究。方法TLC法检定防风药材中5个色原酮类成分,HPLC法测定防风中4个主要有效成分的含量。结果防风药材中可同时鉴定出防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅰ和防风色原酮Ⅱ。结论防风药材中含防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷不得少于0.11%,防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷不得少于0.11%,防风色原酮Ⅰ不得少于0.01%和防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷不得少于0.02%,4种成分的总量不得少于0.40%。

正交试验优选伤科熏洗汤剂的水提取工艺研究

目的:优选伤科熏洗汤剂的水提取工艺条件。方法:以挥发油提取率、升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的提取量为考察指标,HPLC测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量,采用L9(34)正交试验设计进行优选。结果:优选提取工艺:加10倍量水提取3次,每次20 min。结论:优选的提取工艺为伤科熏洗汤的临床应用提供了参考依据。