脑小血管病患者外周血GPER30、NPAS4、FKBP5表达与认知功能障碍的相关性研究

目的探讨脑小血管病(CSVD)患者外周血G蛋白耦联雌激素受体30(GPER30)、神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、FK506结合蛋白5(FKBP5)表达与认知功能障碍(CD)的相关性。方法前瞻性选取2022年1月至2023年12月郑州大学第二附属医院收治的227例CSVD患者,根据有无CD分为障碍组(n=66)与无障碍组(n=161)。比较两组患者的一般资料及外周血GPER30、NPAS4、FKBP5 m RNA表达水平,Logistic回归分析CSVD患者CD的影响因素,比较不同程度CD患者外周血GPER30、NPAS4、FKBP5 m RNA表达水平,采用Pearson法分析外周血GPER30、NPAS4、FKBP5 m RNA表达与蒙特利尔认知评估量表(Mo CA)评分的相关性。结果障碍组患者的年龄、病程分别为(72.49±5.68)岁、(2.69±0.78)年,明显高(长)于无障碍组的(67.51±7.04)岁、(2.31±0.62)年,差异均有统计学意义(P<0.05);障碍组患者的外周血GPER30 m RNA表达水平为1.02±0.17,明显低于无障碍组的1.66±0.31,NPAS4m RNA、FKBP5 m RNA表达水平分别为2.79±0.60、3.88±1.12,明显高于无障碍组的1.55±0.51、2.10±0.59,差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,年龄、病程、GPER30 m RNA、NPAS4 m RNA及FKBP5 m RNA均为CSVD患者CD的独立影响因素(P<0.05)。轻度组患者的外周血GPER30 m RNA表达水平为1.27±0.25,明显高于中重度组的0.70±0.12,NPAS4 m RNA、FKBP5 m RNA表达水平分别为2.31±0.58、3.19±1.07,明显低于中重度组的3.40±0.72、4.76±1.39,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson法分析结果显示,外周血GPER30 m RNA表达与CSVD患者Mo CA评分呈正相关(r=0.704,P<0.05),NPAS4 m RNA、FKBP5 m RNA与Mo CA评分呈负相关(r=-0.572、-0.542,P<0.05)。结论外周血GPER30、NPAS4、FKBP5是CSVD患者CD的独立相关因素,各指标表达水平与CD病情严重程度均具有一定相关性,可为临床判断CD、评估CD病情严重程度提供参考,以指导后续临床工作。

膝骨关节炎病人血清ADAMTS5和CXCR4表达与病情严重程度的相关性分析

目的探究膝骨关节炎(KOA)病人血清解聚蛋白样金属蛋白酶5(ADAMTS5)和趋化因子受体4(CXCR4)表达水平与病情严重程度的相关性。方法选取2021年1月至2023年1月在成都医学院第一附属中医医院就诊治疗的KOA病人136例为研究对象,根据KL分级将KOA病人分为轻度组46例、中度组68例、重度组22例;另选取同期在该院体检健康者136例作为健康组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清ADAMTS5、CXCR4和白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平;采用Pearson分析血清ADAMTS5和CXCR4水平与相关指标相关性;采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清ADAMTS5和CXCR4在KOA重度病人中的诊断价值。结果与健康组相比较,KOA组的炎症因子IL-17、TNF-α水平和身体质量指数均显著上调,TIMP-1水平显著下调(P<0.05);KOA组血清ADAMTS5(3.63±1.15)g/L水平较健康组(2.23±0.59)g/L显著上调(P<0.05);KOA组血清CXCR4(302.48±53.46)ng/L水平较健康组(163.97±35.82)ng/L显著上调(P<0.05);KOA病人血清ADAMTS5和CXCR4水平随KOA病情严重程度的加重均呈现逐渐上升的趋势(P<0.05);Pearson相关分析显示,KOA病人血清ADAMTS5、CXCR4水平与IL-17、TNF-α、身体质量指数均呈正相关,与TIMP-1呈负相关(P<0.05);ROC结果显示,血清ADAMTS5、CXCR4诊断KOA重度病人的曲线下面积(AUC)分别为0.89、0.89,两者联合诊断的AUC为0.98,均优于其各自单独诊断(Z=2.25、3.06,P<0.05),且特异度为96.49%,灵敏度为95.45%。结论KOA病人血清ADAMTS5、CXCR4水平均显著上调,两者表达水平随病人病情严重程度的加重而逐渐上升,且在诊断重症KOA病人中具有重要价值。

PDCD5、TNS4表达水平与中晚期肺癌患者预后的相关性研究

目的探讨程序性细胞死亡分子5(PDCD5)、张力蛋白4(TNS4)在Ⅲ~Ⅳ期肺癌患者中的表达情况及其与患者预后的关系。方法回顾性选取2015年1月—2018年12月我院收治的82例Ⅲ~Ⅳ期肺癌患者的临床资料进行研究。使用免疫组化法检测82例患者癌组织和其中45例患者癌旁正常组织(距瘤体边缘2cm以上)的PDCD5、TNS4表达水平,比较其阳性率并分析其与患者临床病理特征的关系。随访5年,使用Kaplan-Meier生存曲线分析不同PDCD5、TNS4表达水平患者5年生存率情况。结果癌组织内PDCD5表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05);癌组织内TNS4表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05)。PDCD5高表达组与PDCD5低表达组TNM分期、发生淋巴结转移比例比较有统计学差异(P<0.05);TNS4高表达组与TNS4低表达组TNM分期、发生淋巴结转移比例比较有统计学差异(P<0.05);PDCD5高表达患者5年生存率为80.00%,高于低表达患者5年生存率52.63%;TNS4低表达患者5年生存率为85.19%,高于高表达患者5年生存率49.09%。结论PDCD5、TNS4表达水平在Ⅲ~Ⅳ期肺癌组织与癌旁正常组织中有明显差异,且对患者预后评估具有一定参考价值。

支持IPv4/IPv6双栈的5G通信网络可靠性组网部署研究

5G网络要求更多的基站部署以支持更高的数据传输速率和连接密度。为实现网络数据的并行高速传输,确保网络应用业务的实时性和稳定性,文中提出一种支持IPv4/IPv6双栈的5G通信网络可靠性组网部署方法。结合IPv4和IPv6双栈,构建双栈转换机制结合有限双协议栈模型,在模型下构建5G通信网络结构,并通过高架立体交叉网优化IPv4/IPv6双栈的5G通信网络组网结构,提升IPv4/IPv6双栈5G通信网络的通信速度。采用冗余路径算法,实现5G网络IPv4/IPv6双栈通信中的服务功能链编排,解决IPv4/IPv6双栈通信中的冗余问题。实验结果表明,该方法能够构建一种更稳定、更高效的5G通信网络组网结构,提高了网络频谱效率,优化了网络环境。

PAI-1基因启动子区-675位4G/5G多态性在糖尿病肾病并发脑梗死患者中表达的研究

目的:探讨PAI-1基因启动子区-675位4G/5G多态性在糖尿病肾病并发脑梗死患者中的分布特点及其对纤溶系统功能的影响,评估该基因多态性与糖尿病肾病并发脑梗死的相关性,为临床诊断和治疗提供理论依据。方法:收集2022年1月—2024年7月在大庆龙南医院确诊为糖尿病肾病的150例患者,其中发生脑梗死的患者43例作为观察组,未发生脑梗死的患者107例作为对照组。通过原位杂交技术检测PAI-1基因启动子区-675位4G/5G多态性,比较两组的基因多态性分布,分析其与纤溶系统指标(D-二聚体、纤维蛋白原)的关系,并进行多因素回归分析评估基因多态性和环境因素对糖尿病肾病并发脑梗死的影响。结果:观察组D-二聚体、纤维蛋白原、LDL-C水平及合并高血压、有吸烟与饮酒史的比例均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组4G/4G基因型患者的比例显著高于对照组,4G/5G和5G/5G基因型患者比例均显著低于对照组(P<0.05)。4G/4G基因型患者的D-二聚体和纤维蛋白原水平均显著高于4G/5G和5G/5G基因型患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。4G/4G基因型、纤溶系统指标(D-二聚体、纤维蛋白原)、LDL-C水平、有吸烟与饮酒史、合并高血压均为糖尿病肾病患者发生脑梗死的独立危险因素(P<0.05)。结论:PAI-1基因启动子区-675位4G/5G多态性与糖尿病肾病并发脑梗死的发生存在一定关联,4G/4G基因型患者的纤溶系统功能显著异常,提示该基因多态性可能对糖尿病肾病并发脑梗死的发生发挥作用。

2型糖尿病伴干眼症病人血清和泪液分泌型卷曲相关蛋白5、脂肪酸结合蛋白4水平与病情严重程度的相关性

目的分析分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP-5)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在2型糖尿病(T2DM)伴干眼症病人血清和泪液中的表达及其与病情严重程度的相关性。方法选取2020年12月至2021年12月唐山市眼科医院收治的T2DM病人145例,其中单纯T2DM病人84例168眼(T2DM组),伴干眼症病人61例122眼(T2DM伴干眼症组),另选取同期该院体检健康者50例100眼作为对照组。T2DM伴干眼症病人又分为轻度组(29例)、中度组(17例)、重度组(15例)。利用酶联免疫吸附法测定所有受试者血清和泪液中SFRP-5、FABP4水平;相关性分析采用Pearson法或Spearman法;logistic回归分析影响T2DM病人干眼症发生的因素。结果T2DM伴干眼症组、T2DM组血清和泪液SFRP-5水平均低于对照组(106.09±8.37、135.72±9.26比158.34±9.45,28.85±5.13、58.27±6.14比45.18±5.92),T2DM伴干眼症组低于T2DM组(P<0.05);T2DM伴干眼症组、T2DM组血清和泪液FABP4水平均高于对照组(70.63±6.59、58.27±6.14比45.18±5.92,15.91±3.76、10.28±3.58比7.72±3.29),T2DM伴干眼症组高于T2DM组(P<0.05)。重度组、中度组血清和泪液SFRP-5水平(68.29±7.15、95.54±8.34比131.82±9.02,12.83±4.62、24.72±5.49比39.56±5.18)、泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SIT)低于轻度组,重度组低于中度组(P<0.05);重度组、中度组血清和泪液FABP4水平(84.56±6.83、73.18±6.94比61.93±6.27,25.64±4.19、17.15±3.86比10.16±3.47)及眼表疾病指数量表(OSDI)积分高于轻度组,重度组高于中度组(P<0.05)。T2DM伴干眼症病人血清与泪液SFRP-5水平呈正相关,血清与泪液FABP4水平也呈正相关(P<0.05)。T2DM伴干眼症病人血清和泪液SFRP-5水平与OSDI积分均呈负相关,与BUT、SIT均呈正相关(P<0.05);血清和泪液FABP4水平与OSDI积分均呈正相关,与BUT、SIT均呈负相关(P<0.05)。血清和泪液SFRP-5水平是影响T2DM病人干眼症发生的独立保护因素,而血清和泪液FABP4水平是独立危险因素(P<0.05)。结论SFRP-5在T2DM伴干眼症病人血清和泪液中均低表达,FABP4均高表达,二者与病情严重程度密切相关。

联苯吡菌胺关键中间体3′,4′-二氯-5-氟-1,1′-联苯-2-胺的合成

为获得联苯吡菌胺关键中间体3′,4′-二氯-5-氟-1,1′-联苯-2-胺的适合工业化生产工艺路线,对其合成工艺进行了优化。以3,4-二氯溴苯和2-溴-4-氟苯胺为原料,经格氏和Suzuki偶联2步反应合成了3′,4′-二氯-5-氟-1,1′-联苯-2-胺,其结构经1H NMR、MS表征确证,并对合成条件进行了优化。优化条件下,3′,4′-二氯-5-氟-1,1′-联苯2-胺合成总收率61.9%,纯度98%。该工艺成本低,收率高,具有工业化生产前景。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

血清KLF5和actinin-4水平与肝细胞肝癌肝动脉化疗栓塞术治疗预后的关系

目的探讨血清Krüpple样因子5(KLF5)、辅肌动蛋白4(actinin-4)对肝细胞肝癌(HCC)肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗预后的关系。方法选取西安交通大学第二附属医院2015年3月至2020年3月期间收治的130例HCC患者作为HCC组,同期收治的86例肝硬化患者作为对照。术后随访3年,根据生存结局分为生存组(n=38)和死亡组(n=92)。采用ELISA检测各组血清KLF5和actinin-4水平,并分析血清KLF5与actinin-4水平之间的相关性;Cox回归分析HCC患者预后死亡的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)评估血清KLF5和actinin-4水平对HCC患者预后死亡的预测价值。结果死亡组患者血清KLF5和actinin-4水平明显高于生存组(P<0.05),且血清KLF5与actinin-4水平呈正相关(P<0.001);低分化、中国肝癌分期方案(CNLC)分期为Ⅲa期、血管侵犯、KLF5和actinin-4水平升高是HCC患者预后死亡的危险因素(P<0.05);血清KLF5和actinin-4单独及联合预测HCC患者预后死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.835、0.866、0.936,联合预测效果较高(Z二者联合-KLF5=2.792,P=0.005,Z二者联合-actinin-4=2.014,P=0.044)。结论HCC患者血清KLF5和actinin-4水平升高,二者血清水平对预后具有较高预测价值。

脓毒症并发急性肾损伤患者血清HDAC4和KLF5的表达及其临床价值

目的探究脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患者血清组蛋白去乙酰基转移酶4(HDAC4)和锌指蛋白转录因子5(KLF5)表达及临床价值。方法选取2020年9月—2022年9月本院收治的60例脓毒症并发AKI患者作为AKI组,选取同期北京市大兴区人民医院收治的75例脓毒症未发生AKI患者作为非AKI组。比较两组的临床资料、血清HDAC4和KLF5水平。ROC分析血清HDAC4和KLF5对脓毒症患者并发AKI的诊断价值。Logistic回归分析影响脓毒症患者并发AKI的因素。结果与非AKI组相比,AKI组患者血清HDAC4、KLF5、降钙素原(PCT)、肌酐(Cr)、序贯性器官衰竭(SOFA)、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分较高,AKI组血小板计数(PLT)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着AKI组患者分期升高,血清HDAC4和KLF5水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HDAC4、KLF5可辅助诊断脓毒症患者是否并发AKI的曲线下面积(AUC)是0.800(95%CI:0.723~0.876)、0.810(95%CI:0.735~0.886);二者联合诊断的AUC为0.908(95%CI:0.856~0.961),均优于各自单独检测(Z=2.277、2.102,P<0.05)。Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分、SOFA评分、HDAC4、KLF5是影响脓毒症患者是否并发AKI的危险因素(P<0.05)。结论脓毒症并发AKI患者血清HDAC4、KLF5水平升高,且二者联合检测对脓毒症并发AKI的诊断效能较高,对评估脓毒症并发AKI有较好的临床诊断价值。

XRN4/EIN5调控拟南芥对盐胁迫和ABA的耐受性

XRN4/EIN5是植物的5′-3′核酸外切酶,主要参与细胞质中RNA的降解,同时也是乙烯信号通路的核心基因,在植物的生长发育和乙烯信号转导中起着重要作用。为探究该基因在植物抗逆性方面的作用,以XRN4/EIN5 T-DNA插入突变体ein5-6为材料,设计不同浓度NaCl(0、50、100、150、200 mmol/L)和ABA(0、0.10、0.25、0.50、1.00、1.50μmol/L)处理,基于拟南芥种子发芽率、子叶绿化率、叶片数、叶片面积进行统计分析,结果发现,当盐浓度低于50 mmol/L时,ein5-6的种子发芽率、子叶绿化率、叶片数和叶片面积比野生型Col-0高;当盐浓度达到100 mmol/L时,ein5-6的种子发芽率和子叶绿化率在发育前期比Col-0高,60 h和96 h之后比Col-0低,而二者的叶片数和叶片面积没有差异;当盐浓度达到150 mmol/L及以上时,ein5-6的种子发芽率、子叶绿化率、叶片数和叶片面积比Col-0低。另外,ein5-6对ABA与盐胁迫响应的趋势一致,ABA浓度较低时ein5-6的子叶绿化率高于Col-0,但随着处理时间的延长和ABA浓度的增加,其子叶绿化率越来越低,最终明显低于Col-0。表明与野生型相比,ein5-6对盐胁迫和ABA处理更敏感,推测XRN4/EIN5参与了盐胁迫和ABA响应的调节。

5-取代-4-氨基-3-巯基-1,2,4-三唑衍生物的应用进展

5-取代-4-氨基-3-巯基-1,2,4-三唑是一类重要的五元杂环化合物,由于分子中含有巯基和伯胺基两个活性基团,既可以单个基团参与反应生成N-或S-取代产物,又可以同时发生反应生成稠杂环化合物。由其衍生而来的化合物具有广泛的生物活性,在抗菌、抗肿瘤、抗结核、抗炎镇痛、酶抑制剂、荧光探针等方面都表现出优异的性能。综述了近年来5-取代-4-氨基-3-巯基-1,2,4-三唑衍生物在医学、农业及材料领域的应用,为今后进一步研究、开发此类化合物提供参考。

H3K27乙酰化修饰促进lncRNA OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导过敏性鼻炎鼻黏膜上皮细胞凋亡

目的本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA OIP5-AS1)转录的促进作用,探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响。方法白细胞介素13(IL-13)处理NEC以建立AR细胞模型。采用实时定量PCR检测OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和体外细胞模型中的表达。ELISA检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、嗜酸性粒细胞趋化因子1(eotaxin-1)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的浓度。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法用于检测NEC的凋亡。双荧光素酶报告实验用于验证OIP5-AS1和TLR4的关系。染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析用于验证OIP5-AS1启动子区组蛋白的H3K27乙酰化修饰。结果与健康对照和未处理的NEC相比,OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和IL-13刺激的NEC中均表达升高。敲减OIP5-AS1可降低IL-13诱导的NEC的TLR4水平,而过表达OIP5-AS1可增加IL-13处理的NEC的TLR4水平。敲减OIP5-AS1可降低IL-13处理的NEC凋亡率及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC的分泌,而过表达TLR4可部分逆转敲减OIP5-AS1对NEC凋亡及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC表达的影响。此外,H3K27ac在OIP5-AS1的启动子区域显著富集,H3K27乙酰化可促进OIP5-AS1在IL-13诱导的NEC中的表达。结论H3K27乙酰化修饰促进OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导AR中NEC凋亡。

铸造Mg-5Sm-4Gd合金的反常抗拉强度

通过电子拉伸试验,结合显微组织、稀土相和拉伸断口分析,研究了铸造Mg-5Sm-4Gd合金的室温和高温抗拉强度。结果表明:随着温度的升高,Mg-5Sm-4Gd合金的抗拉强度先升高后降低,出现了反常温度效应。该合金主要由α-Mg基体以及稀土相Mg41Sm5和Mg5Gd组成,平均晶粒尺寸约为200μm。拉伸断裂方式主要为脆性断裂。抗拉强度反常温度效应与合金的晶粒尺寸、α-Mg基体的晶格常数及稀土相的热稳定性有关。

USP5表达水平在急性髓系白血病中的意义及其对AKT/mTOR/4EBP1信号通路的调控作用研究

目的:探讨USP5在急性髓系白血病(AML)中的临床意义、功能作用和潜在下游机制。方法:基于TCGA数据库分析USP5在AML和正常组织中的表达及其与患者生存的相关性。利用慢病毒在Jurkat和HL-60细胞中敲低和过表达USP5,分别通过RT-qPCR和Western blot检测USP5 mRNA和蛋白的表达。通过CCK-8和甲基纤维素集落形成实验进行细胞增殖和生长检测,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果:与正常组织相比,USP5在AML中高表达,USP5的上调与AML患者的生存呈负相关。敲减和过表达USP5分别会抑制和促进AML细胞的增殖和集落生长。敲减USP5的Jurkat和HL-60细胞可导致细胞周期停滞和细胞凋亡,此外,敲除USP5可以抑制AKT、mTOR和4EBP1的磷酸化。结论:过表达USP5与AML患者的不良预后相关。靶向调控USP5可抑制AKT/mTOR/4EBP1信号传导,抑制AML细胞的增殖和生长。

基于4G/5G技术的起重机在线监测系统研究

文章阐述了当前起重机安全保护装置和监控系统不能满足数字化和信息化要求,从危险程度和易导致事故角度出发,以起重量、起升限位状态和门机运行偏斜量这3个关键参数作为监测对象,提出了基于4G/5G技术的起重机在线监测系统。结合云平台和管理制度,有望解决以下行业难题:一是少数吊运3t以上重物的起重机却挂牌3t以下,作为非特种设备逃避监管,存在安全隐患;二是起升高度限位器已损坏但是没有被及时发现,导致“冲顶”事故。

mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响

旨在研究马立克病病毒(Marek′s disease virus,MDV)编码的mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响,将mdv1-miR-M4-5p模拟物、抑制物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞后48 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中mdv1-miR-M4-5p、TGF-β1、Smad2以及caspase-9、caspase-3、cyt-c、cyclinD1、Bcl-2等增殖和凋亡相关分子的转录;CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果显示:与对照组相比,mdv1-miR-M4-5p模拟物转染显著上调MDCC-MSB1细胞中mdv1-miR-M4-5p、cyclinD1、Bcl-2的转录水平,下调TGF-β1、Smad2、cyt-c、caspase-9和caspase-3的表达转录,促进细胞的增殖,减少G1期细胞,增加S和G2细胞,降低细胞凋亡率。与对照组相比,mdv1-miR-M4-5p抑制物转染后MDCC-MSB1细胞的增殖、凋亡及其相关分子转录的结果与mdv1-miR-M4-5p模拟物转染后的结果相反。综上,Mdv1-miR-M4-5p可促进MDCC-MSB1细胞增殖,抑制其凋亡,这可能是通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路来实现的。

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景:目前已有针对lncRNA\miRNA\mRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究,课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p,尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的:探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法:取36只新西兰兔,通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型,采用随机数字表法分4组,lncRNA组、miRNA组、ceRNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周,取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论:①苏木精-伊红与番红O固绿染色显示,4组软骨组织都有不同程度的退变表现,造模第4周时,lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失,细胞外基质破坏,出现表层糜烂、裂缝形成和软骨组织局部或全层缺失,并随时间延长软骨损伤程度逐渐加重,4组中miRNA组关节软骨炎症进展最缓慢;②qRT-PCR检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量高于其他3组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量低于其他3组(P<0.05);造模后第8,12周,miRNA组软骨组织中的NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量低于ceRNA组、对照组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);③Western Blot检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量始终低于其他3组(P<0.05);miRNA组造模后第8,12周软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);④结果表明,miR-146a-5p作为NONHSAT248596.1的作用靶点会受到其竞争性内源性RNA的作用造成活性被抑制,NONHSAT248596.1作用于miR-146a-5p后调控基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴,影响骨关节炎软骨组织中基质金属蛋白、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达,造成细胞外基质的降解及蛋白多糖的丢失。

miR-146a-5p、SMAD4在甲状腺滤泡癌组织中表达变化和对FTC-238细胞系增殖迁移侵袭影响及靶向关系

目的通过观察甲状腺滤泡癌(FTC)组织中miR-146a-5p、SMAD4的表达变化及对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析miR-146a-5p与SMAD4之间的靶向关系,以探讨miR-146a-5p是否通过靶向SMAD4促进FTC增殖、迁移、侵袭。方法收集FTC组织标本30例份,非肿瘤甲状腺或距离肿瘤边缘>2 cm癌旁组织30例份,采用RT-qPCR法检测FTC组织及癌旁组织中miR-146a-5p、SMAD4 mRNA。将FTC-238细胞系分为miR-146a-5p mimics组和阴性对照(miR-NC组)分别转染miR-146a-5p mimics(使细胞过表达miR-146a-5p)及miR-NC。采用CCK8法观察两组培养12、24、48 h时的细胞增殖能力,划痕实验观察两组细胞迁移能力,Transwell小室实验观察两组细胞侵袭能力。分别采用RT-qPCR及免疫印迹法检测两组细胞中SMAD4 mRNA及蛋白。双荧光素酶报告基因实验验证miR-146a-5p与SMAD4的靶向关系。结果与癌旁组织相比,FTC组织中miR-146a-5p相对表达量降低(P<0.05);SMAD4 mRNA相对表达量升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,各个时间点miR-146a-5p mimics组细胞OD值降低(P均<0.05);与miR-NC组相比,miR-146a-5p mimics组细胞迁移、侵袭数目减少(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-146a-5p mimics组SMAD4 mRNA及蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。miR-146a-5p与SMAD4存在靶向关系。结论FTC组织中miR-146a-5p表达降低、SMAD4表达升高;miR-146a-5p过表达可抑制FTC-238细胞系增殖、迁移、侵袭;miR-146a-5p与SMAD4之间存在靶向关系。miR-146a-5p可能通过靶向抑制SMAD4促进FTC癌细胞的增殖、迁移、侵袭。

姜黄素通过激活Smad1/5-Smad4-β-catenin信号通路调控孤核受体4A1在易损斑块血管新生中的作用

目的:探究姜黄素激活Smad1/5-Smad4-β-catenin信号通路调控孤核受体4A1(NR4A1)在易损斑块血管新生中的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),将HUVEC分为模型组、Si-NR4A1组(NR4A1-/-HUVEC组)、姜黄素组(给予姜黄素20μg/mL干预处理),每组各10孔。在TNF-ɑ或氧化低密度脂蛋白(oxLDL)+BMP-9的刺激下行内皮细胞增殖、迁移、Matrigel基质胶管腔形成实验,并采用Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成能力,用ELISA法检测细胞上清液炎症因子,用Transwell法检测各组迁移能力,使用Western blot法检测Smad1/5、Smad4、β-catenin的表达水平。结果:RT-qPCR结果显示,各组NR4A1表达水平比较:姜黄素组<Si-NR4A1组<模型组(P<0.05);各组细胞迁移率、细胞迁移面积、细胞管腔形成能力、细胞增殖能力比较:姜黄素组<Si-NR4A1组<模型组(P<0.05);与Si-NR4A1组及模型组相比,姜黄素组肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、内皮素1(ET-1)、白细胞介素12(IL-12)水平下降(P<0.05);各组细胞的Smad1、Smad5、Smad4的蛋白表达水平比较:姜黄素组>Si-NR4A1组>模型组(P<0.05)。各组细胞的β-catenin蛋白表达水平比较:姜黄素组<Si-NR4A1组<模型组(P<0.05)。结论:姜黄素具有抑制细胞迁移与增殖等作用,并对内皮细胞功能起保护作用,其可能与通过NR4A1激活Smad1/5-Smad4-β-catenin表达有关。