4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bax/Bak蛋白相关性研究

目的:观察4-HPR对肺腺癌细胞A549凋亡的影响并探讨其机制。方法:不同剂量4-HPR处理A549细胞,倒置显微镜观察A549细胞形态学变化和对细胞生长的抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡情况,Western Blot分析凋亡相关蛋白Bax/Bak等的表达。结果:细胞数目随药物浓度增加而减少,失去正常生长,光泽度下降,变小变圆;细胞凋亡程度随药物浓度增加而增强,细胞核肿胀变圆,致密浓染或碎裂;凋亡过程,Bax/Bak、P53表达明显增加。结论:4-HPR可明显抑制肺腺癌A549细胞的增殖,增加Bax/Bak、P53的表达,促进A549凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。

4-HPR对人胆管癌QBC939细胞放射敏感性的增强作用

目的探讨N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(fenretinide,4-HPR)对人胆管癌QBC939细胞的放射敏感性。方法应用人胆管癌QBC939细胞进行培养,取对数生长期的细胞进行实验。随后采用MTT测定4-HPR对胆管癌QBC939细胞的抑制作用,计算出半数抑制浓度(IC50)。采用细胞克隆实验分析4-HPR对QBC939细胞的放射增敏作用。采用流式细胞仪分析4-HPR对细胞凋亡的影响。Western blot检测相关蛋白的表达。结果 4-HPR对QBC939细胞具有抑制增殖作用,随剂量增加而增强。4-HPR与不同剂量的X线照射QBC939细胞后,与单纯照射组比较,4-HPR+照射组的细胞存活分数下降(P<0.01)。单纯照射组、4-HPR照射组的平均致死剂量(D0)分别为2.72、1.93 Gy,准域剂量(Dq)分别为2.06、0.94 Gy,4-HPR的放射增益比(SER)为1.41,说明4-HPR对胆管癌QBC939细胞有放射增敏作用。流式细胞仪检测结果显示,4-HPR作用于QBC939细胞后细胞凋亡率升高。bcl-2和caspase-3的Western blot检测结果显示,4-HPR明显增加了放射线诱导的胆管癌QBC939细胞的凋亡,表现为bcl-2的低表达和caspase-3的高表达。结论 4-HPR对胆管癌QBC939细胞有抑制作用和放射增敏作用,其放射增敏作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。

4-HPR联合顺铂对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其与VEGF、u-PA表达变化的关系

目的:探讨羟苯基维胺脂(N-4-hydroxyphenyl retinode,4-HPR)联合顺铂(DDP)对卵巢癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,u-PA)表达变化的关系。方法:BALB/c裸鼠皮下接种卵巢癌SKOV3细胞,成瘤后随机分为4组:对照组、DDP组、4-HPR组、4-HPR+DDP组。观察各组肿瘤生长情况,应用免疫组织化学法观察各组移植瘤VEGF表达的变化,应用RT-PCR法检测各组移植瘤VEGF、u-PA mRNA表达的变化;应用Western印迹方法检测各组移植瘤VEGF、u-PA蛋白表达的变化。结果:4-HPR联合DDP能显著抑制移植瘤的生长,并能抑制VEGF、u-PA mRNA及蛋白的表达,两者联合用药作用优于各单独用药组。结论:4-HPR联合DDP能显著抑制卵巢癌移植瘤的增殖能力,且这种作用与VEGF、u-PA的表达有关。

4-HPR及其衍生物的研究进展

具有抗肿瘤活性的维甲酸类化合物N-(羟基苯基)维甲酰胺(4-HPR)及其衍生物的研究进展,并展望其今后的研究动向。维甲酸类化合物通过激活受体蛋白来调控核基因的表达,产生抗肿瘤作用。介绍一些有望成为临床抗肿瘤药物的化合物及其活性。

维生素A及其衍生物4-HPR的研究进展

维生素及其衍生物在临床上应用广泛,具有调节和控制多种正常组织和上皮细胞的增殖分化、生长发育、形态发生、代谢、内环境的稳定、平衡暗视觉和生殖等生物学活性。近年来的研究显示其衍生物,N-(4- 羟基苯基)维生素甲酰胺(4HPR)作为一种维甲酸类化合物,可通过诱导肿瘤细胞调亡抑制肿瘤细胞生长。该文主要就维生素A及其衍生物的代谢和对疾病的作用机制作一综述。

4-HPR的生物学活性的研究概况

4-HPRR[N-(4-hydroxypheyl)retinamide]是一种合成的视黄族类化合物(retinoidsds,以下简称视黄族)之一。4-HPR最早是由Moon(1979)等首先发现的,它主要累积于乳腺上皮细胞和脂肪细胞之中,能够抑制乳腺癌的发生发展,并具有一定的治疗作用。之后,其他学者也相继发现它也能抑制其它癌的发生发展。几十年来。

4-HPR促髓母细胞瘤细胞凋亡的机制

目的探讨4-羟苯维胺酯对髓母细胞瘤细胞株的促凋亡的效应,及其对抗凋亡相关基因BclxL表达的影响。方法将2.5μM的4-羟苯维胺酯作用于髓母细胞瘤D283MED细胞株,用MTT实验,克隆形成实验检测4-羟苯维胺酯对细胞增殖的抑制作用,TUNEL法检测瘤细胞的凋亡率。采用RT-PCR及Western blot方法检测Bcl-xL的mRNA和蛋白的表达。结果4-羟苯维胺酯可显著抑制D283MED瘤细胞的增殖,明显促进瘤细胞凋亡(P<0.05);RT-PCR及Western blot结果显示Bcl-xL的mRNA和蛋白均明显减少。结论4-羟苯维胺酯通过下调Bcl-xL基因及其蛋白的表达,从而抑制髓母细胞瘤D283细胞的增殖,促进瘤细胞凋亡。

PMA对4-HPR抑制HepG2细胞体外迁移的影响

目的观察乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)对N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4-HPR)抑制肝癌细胞HepG2体外迁移的影响,并探讨相关机制。方法 PMA单独或联合4-HPR处理HepG2细胞,倒置显微镜下观察HepG2细胞形态学变化和药物对生长的影响;细胞划痕实验检测HepG2细胞体外迁移能力的变化;Western blot法检测迁移相关蛋白神经钙黏蛋白(N-cadherin)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达和肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化程度。结果 PMA联合4-HPR处理组细胞密度小,形态更为细长;二者联合处理细胞迁移距离明显减少,而PMA单独处理细胞迁移距离增加(P <0. 05);抑制细胞迁移过程中,N-cadherin、MLCK表达减少,MLC磷酸化亦降低(P <0. 05)。结论 PMA联合4-HPR可抑制HepG2细胞的迁移,相比4-HPR组能更显著减少MLCK的表达和MLC的磷酸化,为进一步探讨4-HPR联合PMA治疗肝癌提供实验基础。

活性氧在4-HPR诱导膀胱癌细胞T24凋亡中的作用

目的研究4HPR诱导的膀胱癌细胞凋亡,探讨DNA氧化损伤与修复在其中的作用。方法以4HPR处理T24细胞后,检测其生长抑制情况,用荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)含量,用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,用Westernblot法检测DNA修复蛋白XRCC1的表达。结果4HPR能诱导细胞发生凋亡,2.5、5.0、10.0μmolL4HPR引起的凋亡率分别达到1.8%、4.0%和10.5%,在此过程中伴随着细胞内ROS水平升高(最高达到3倍),并使DNA修复蛋白XRCC1的表达下降,使caspase3激活。抗氧化物质维生素C能有效地抑制4HPR引起的ROS升高,并能部分抑制其引起的细胞生长抑制、凋亡及XRCC1蛋白表达的下降。结论ROS的生成并造成DNA损伤可能是4HPR诱导膀胱癌细胞凋亡的主要机制。

4-HPR对瘢痕疙瘩成纤维细胞Procollagen Ⅰ、MMP-1及信号通路PI3K/Akt的影响

目的探讨4-羟苯基维胺(4-hydroxyphenyl-retinamide,4-HPR)对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用及PI3K/Akt信号转导通路的影响。方法通过免疫印迹方法检测人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR对Ⅰ型前胶原(type I pro-collagen,ProcollagenⅠ)和基质金属蛋白酶-1(matrix metallo-protein-1,MMP-1)蛋白表达水平,观察4-HPR联合TGF-β1、PD98059、SP600125、SB203580及LY294002对瘢痕疙瘩成纤维细胞中相关蛋白表达的影响。结果瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR使ProcollagenⅠ蛋白表达水平明显减少,MMP-1蛋白表达水平明显增加,并且具有4-HPR浓度依赖性(P<0.01)。在瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR+TGF-β1组中ProcollagenⅠ蛋白表达水平较TGF-β1组明显降低(P<0.01),但P-Smad2和P-Smad3蛋白表达均无显著改变(P>0.05)。LY294002组中ProcollagenⅠ蛋白水平与对照组相比显著降低,MMP-1显著升高(P<0.01)。但PD98059、SB203580及SP600125组中ProcollagenⅠ和MMP-1蛋白水平与对照组相比未发生明显变化(P>0.05),且4-HPR可有效抑制P-Akt蛋白表达水平(P<0.01)。结论人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR可以抑制Ⅰ型前胶原蛋白的表达、上调MMP-1的表达,而这种调控作用可能与PI3K/Akt信号传导通路被削弱有关。

N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺抑制人肺腺癌A549细胞体外迁移机制

目的研究N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4-HPR)对人肺腺癌细胞A549体外迁移能力的影响及其作用机制。方法 1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)和4-HPR处理肺腺癌A549细胞24 h后,细胞划痕实验检测其对A549细胞体外迁移能力的影响;Western blot法检测骨桥蛋白(OPN)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达和肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化程度;细胞划痕实验观察MLCK抑制剂ML-7对A549细胞迁移能力的影响。结果 1μmol/L 4-HPR处理的A549细胞与细胞对照以及溶剂对照细胞相比,迁移距离明显降低(P<0.05);Western blot分析结果表明1μmol/L 4-HPR可明显降低A549细胞MLCK的表达和MLC磷酸化(P<0.05),而对OPN表达无显著影响;ML-7可明显减少A549细胞迁移距离(P<0.05)。结论 4-HPR可能通过减少MLCK的表达和MLC磷酸化,抑制A549细胞的体外迁移。

4-羟苯基维胺脂联合超声治疗对兔耳增生性瘢痕组织Bax蛋白表达的影响

目的探讨4-羟苯基维胺脂(N-4-hydroxyphenyl retinode,4-HPR)联合超声治疗对兔耳增生性瘢痕组织成纤维细胞凋亡与Bax蛋白表达的影响。方法建立兔耳增生性瘢痕模型,分别设立对照组、4-HPR组、超声组、4-HPR+超声组,兔耳瘢痕形成后进行4-HPR注射及超声治疗,采用免疫组化的方法观察真皮层成纤维细胞中Bax蛋白的表达,对比研究在兔耳增生性瘢痕实验性治疗过程中4-HPR联合超声治疗对成纤维细胞凋亡活性的影响。结果与对照组相比,兔耳增生性瘢痕组织在4-HPR和超声联合治疗时对成纤维细胞Bax蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),并且具有4-HPR浓度依赖性和超声剂量强度依赖性。结论 4-HPR联合超声治疗可能通过Bax途径促进增生性瘢痕组织真皮层的成纤维细胞凋亡,对兔耳增生性瘢痕有明显的防治作用。

一种大规模合成N-(4-羟苯基)维甲酰胺的新方法(英文)

介绍了抗肿瘤药物N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)的合成新方法.该方法包括如下反应步骤:全反式维甲酸与二氯亚砜反应生成酰氯,再与三乙胺成盐,然后将得到的酰基铵盐与对氨基苯酚发生酰胺化反应,制得4-HPR.该方法解决了文献报道方法在大规模合成时存在的多种问题如后处理繁琐、收率低等,具有操作简单、反应条件温和以及产率高等特点.此外,研究了反应试剂的摩尔比对反应收率的影响,最佳摩尔比为二氯亚砜和对氨基苯酚物质的量分别是维甲酸物质的量的2倍和3倍,总收率为80.7%.

蛋白酶体抑制剂MG-132增强4-羟苯基维胺脂诱导的肺癌细胞凋亡

[目的]观察4-羟苯基维胺脂(4-HPR)联合应用蛋白酶体抑制剂MG-132对肺癌A549细胞凋亡的影响.[方法]用倒置显微镜和TUNEL染色观察4-HPR或(和)MG-132联合应用后A549细胞形态学变化及对细胞生长的抑制作用;免疫印迹法检测核转录因子-κB(NF-κB)的表达.[结果]不同给药组细胞数量明显变少,失去正常的生长,细胞密度低,光泽度下降,肿胀变形,变圆;4-HPR加MG-132组细胞凋亡率明显升高,MG-132明显增强4-HPR诱导的A549细胞凋亡;免疫印迹观察显示,MG-132降低4-HPR诱导的NF-κB的表达.[结论]MG-132是通过降低NF-κB的表达而增强4-HPR诱导的A549细胞凋亡.

4-羟苯基维甲酰胺对膀胱癌细胞的放疗增敏性研究

目的:观察N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-H PR)联合γ-射线对人膀胱移行细胞癌的生长抑制和诱导凋亡作用,分析两者之间是否存在协同作用。方法:应用四甲基偶氮蓝比色(M TT)法检测4-H PR对膀胱癌细胞株T24的细胞毒性作用、半数抑瘤率及起效浓度和时间。应用流式细胞仪检测4-H PR、γ-射线及两者联合应用时对T24细胞生长抑制作用。结果:2.5滋m ol/L、5滋m ol/L、10滋m ol/L的4-H PR作用T24细胞5天的凋亡率分别为6.2%、28.0%和26.0%,死亡率分别为0.3%、12.5%和26.7%。联合作用组细胞分别加入2.5滋m ol/L、5滋m ol/L的4-H PR,100cgy的γ-射线照射一次,3天后T24细胞的凋亡率分别为20.0%、26.0%,细胞的死亡率均在5.0%以下。5天后T24细胞的凋亡率分别为38.0%、35.0%,而细胞的死亡率分别为12.4%、21.1%。结论:小剂量的4-H PR可以诱导T24细胞凋亡,大剂量的4-H PR主要导致T24细胞死亡。小剂量的4-H PR联合小剂量的γ-射线对T24细胞凋亡有明显的协同作用。

4-羟苯基维胺联合超声对兔耳增生性瘢痕组织细胞增殖抑制作用的研究

目的 :采用兔耳增生性瘢痕模式探讨4-羟苯基维胺(HPR)联合应用超声波对增生性瘢痕组织细胞的增殖抑制作用,探索防治增生性瘢痕的新方法。方法:建立兔耳增生性瘢痕模型,分别设立对照组、4-HPR组、超声组、4-HPR+超声组,增生性瘢痕形成后分别进行治疗。4-HPR浓度分为2μmol/L、20μmol/L,超声强度分为超声有效声强为0.5 W/cm2,脉冲持续2ms(P2档);超声有效声强为0.75 W/cm2,脉冲持续3 ms(P3档);超声有效声强为1.25 W/cm2,脉冲持续5 ms(P5档),分别照射每个部位持续1、3和5 min,每7 d治疗1次,共进行4次。治疗结束1周后,经手术采集瘢痕组织,添加Brd U进行培养3 h,用10%甲醛固定,石蜡切片,用Brd U免疫组化的方式,检测真皮层成纤维细胞的增殖效应。结果:与对照组相比,4-HPR和超声照射对增生性瘢痕组织真皮层成纤维细胞增殖活性的抑制具有统计学意义(P<0.05),2μmol/L 4-HPR的低剂量联合应用超声波时差异也有统计学意义(P<0.01)。结论:4-HPR以及超声联合治疗能抑制增殖性瘢痕组织真皮层成纤维细胞的增殖。

4-羟苯维胺酯抑制大鼠膀胱癌的COX-2的表达和诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:使用N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导SD大鼠膀胱肿瘤模型,观察4-羟苯维胺酯(4-HPR)的对大鼠膀胱肿瘤的干预效果。方法:70只SD大鼠随机分成对照组(A组)、造模组(B组)、造模处理组(C组、D组、E组),处理组分别予以4-HPR、阿霉素(ADM)、卡介苗(BCG)行膀胱内灌注。给药结束后1周处死大鼠,用免疫组化检测大鼠膀胱肿瘤中COX-2的表达和微血管密度(MVD);用TUNEL法检测凋亡。结果:标本病理结果提示4-HPR、BCG、ADM对MNU诱导肿瘤的发生有明确的干预效果(P<0.05)。4-HPR能有效抑制COX-2的表达及微血管的生成并促使肿瘤细胞的凋亡(P<0.05)。结论:4-HPR、BCG、ADM对MNU的致癌过程均有干预作用,4-HPR与ADM、BCG的抗癌作用无显著性差异,且其副反应更少。

4-羟苯基维胺对瘢痕疙瘩成纤维细胞Procollagen Ⅰ和MMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型前胶原(ProcollagenⅠ)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA表达的影响。方法运用实时荧光定量PCR方法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞中ProcollagenⅠ和MMP-1 mRNA表达情况。观察4-HPR对ProcollagenⅠ和MMP-1 m RNA表达的影响。结果瘢痕疙瘩成纤维细胞中ProcollagenⅠmRNA表达明显高于正常皮肤成纤维细胞,而MMP-1 mRNA低表达,差异具有统计学意义。4-HPR不同浓度组瘢痕疙瘩成纤维细胞ProcollagenⅠmRNA表达水平明显减少,MMP-1 mRNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义。结论 ProcollagenⅠ和MMP-1基因表达在瘢痕生成过程中起重要作用。4-HPR可抑制ProcollagenⅠ和促进MMP-1 mRNA表达水平。

N-(4-羟苯基)维甲酰胺的生物素标记衍生物的合成

为了研究抗肿瘤药物N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)的作用机理和其生物学作用靶点,合成了4-HPR的生物素衍生物.采用全反式维甲酸与草酰氯反应生成酰氯,再与三乙胺成盐,然后将得到的酰基铵盐,与对氨基苯酚发生酰胺化反应,制得4-HPR.4-HPR与3-溴-1-丙醇烷基化反应得到含羟基链化合物,4-氨基丁酸与生物素发生酰胺化反应得到羧酸化合物.最后通过酯化反应将4-HPR与生物素连接得到目标化合物.该方法具有操作简单、反应条件温和以及产率较高等特点.

N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺对肺癌H1299细胞增殖的影响

目的:观察N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4-HPR)对人肺癌细胞H1299体外增殖能力的影响,并初步探讨了其作用机制.方法:体外培养人肺癌H1299细胞,CCK-8法检测不同浓度4-HPR对细胞增殖的影响.从中选定一个药物浓度,倒置显微镜下观察药物对细胞生长的影响,平板克隆实验观察对细胞增殖能力的影响,Western blot检测对p38磷酸化水平的影响.结果:4-HPR组较对照组细胞增殖减少,随药物作用浓度增加,对增殖的抑制作用更加明显(P﹤0.05).镜下观察到4-HPR组较对照组细胞聚集明显减少,细胞间隙增大,失去正常生长.平板克隆实验结果表明,4-HPR组细胞克隆密度和体积较小,克隆形成率降低(P﹤0.05).Western blot分析表明,4-HPR可明显增加H1299细胞p-p38的表达(P﹤0.05).结论:4-HPR可明显抑制肺癌H1299细胞增殖,抑制作用与p-p38蛋白表达增加相关.