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小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达
被引量:
5
1
作者
赵金国
曾巧英
+3 位作者
殷宏
刘爱红
李有全
罗建勋
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期461-464,共4页
根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8。测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边...
根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8。测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%。将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别。
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关键词
小亚璃眼蜱
4d8
基因
克隆
原核表达
下载PDF
职称材料
微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析
2
作者
刘军龙
关贵全
+5 位作者
李有全
马米玲
刘爱红
任巧云
殷宏
罗建勋
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2009年第10期11-14,共4页
按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核...
按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1,构建重组原核表达载体pGEX4T-1-4D8,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白分子质量为45 ku左右,与预期大小一致。Western blot显示,兔抗微小牛蜱唾液腺、肠道和卵巢抗体能够识别重组表达蛋白。
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关键词
微小牛蜱
4d8
基因
原核表达
下载PDF
职称材料
小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析
被引量:
1
3
作者
赵金国
刘爱红
+1 位作者
殷宏
罗建勋
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期375-379,共5页
为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目...
为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。
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关键词
小亚璃眼蜱
4d8
基因片段
真核表达
毕赤酵母
原文传递
题名
小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达
被引量:
5
1
作者
赵金国
曾巧英
殷宏
刘爱红
李有全
罗建勋
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期461-464,共4页
基金
国家自然科技资源共享平台项目(2005DKA21100)
国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10A207)
国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAD40B06)
文摘
根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8。测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%。将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别。
关键词
小亚璃眼蜱
4d8
基因
克隆
原核表达
Keywords
Hyalomma anatolicum anatolicum
4d8 gene
cloning
prokaryotic expression
分类号
S852.746 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析
2
作者
刘军龙
关贵全
李有全
马米玲
刘爱红
任巧云
殷宏
罗建勋
机构
家畜疫病病原生物学国家重点实验室
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2009年第10期11-14,共4页
基金
国家自然科技资源共享平台项目(2005DKA21100)
国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAD40B06)
文摘
按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1,构建重组原核表达载体pGEX4T-1-4D8,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白分子质量为45 ku左右,与预期大小一致。Western blot显示,兔抗微小牛蜱唾液腺、肠道和卵巢抗体能够识别重组表达蛋白。
关键词
微小牛蜱
4d8
基因
原核表达
Keywords
Boophilus microplus
4d8 gene
prokaryotic expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S852.746 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析
被引量:
1
3
作者
赵金国
刘爱红
殷宏
罗建勋
机构
天水市动物疫病预防控制中心
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期375-379,共5页
基金
国家自然科技资源共享平台项目(2005DKA21100)
国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10A207)
国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAD40B06)
文摘
为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。
关键词
小亚璃眼蜱
4d8
基因片段
真核表达
毕赤酵母
Keywords
Hyalomma anatolicum anatolicum
4d8 gene
fragment
eukaryotic expression
Pichia pastoris
分类号
S852.746 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达
赵金国
曾巧英
殷宏
刘爱红
李有全
罗建勋
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
下载PDF
职称材料
2
微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析
刘军龙
关贵全
李有全
马米玲
刘爱红
任巧云
殷宏
罗建勋
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2009
0
下载PDF
职称材料
3
小亚璃眼蜱4D8基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析
赵金国
刘爱红
殷宏
罗建勋
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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