模板制备方法对单细胞PCR检测DMD基因的影响

旨在探讨模板制备方法对单细胞 PCR准确性的影响 ,采用 KOH/ DTT和液氮冻融煮沸两种不同方法裂解单个淋巴细胞 ,行 DMD基因外显子 17、19、4 4、4 5、4 8五重巢式 PCR.用 KOH/DTT法裂解的细胞扩增成功率为 98% ( 147/ 150 ) ,失败率为 2 % ( 3/ 150 ) ;用液氮冻融煮沸法裂解的细胞扩增成功率为 78% ( 117/ 150 ) ,失败率为 2 2 % ( 33/ 150 ) ,差异有显著性 (χ2 =2 8.4 ,P <0 .0 1) .结果表明单细胞 PCR模板制备与 PCR扩增失败有密切关系 ,选用合适的细胞裂解方法可提高单细胞

单细胞五重巢式PCR检测DMD基因

目的:探索建立单细胞多重巢式PCR检测杜氏肌营养不良症(DMD)基因外显子17、19、44、45、48的技术,及应用于植入前遗传学诊断(PGD)的前景。方法;获取正常男性单个淋巴细胞和无DMD家族史的单个胚胎细胞,行DMD基因外显子17、19、44、45、48的五重巢式PCR,分析扩增成功率、假阳性率和假阴性率。结果:20个单个淋巴细胞5个外显子扩增成功率为97％(97/100)、假阳性率为4％(1/25)、假阴性率为0％(0/25),20个单个胚胎细胞5个外显子扩增成功率为80％(80/100)、假阳性率为0％(0/25)。结论:本文建立的单细胞DMD基因外显子17、19、44、45、48的五重巢式PCR技术具有较高扩增成功率和特异性,应用于DMD的PGD具有现实的可能性。

五重巢式PCR同步检测单细胞杜氏肌营养不良基因和性别的研究

目的 建立五重巢式PCR技术同步检测单细胞DMD基因和性别 ,探讨该技术在杜氏肌营养不良症的植入前诊断 (DMD -PGD)的可行性。方法 获取正常男性、女性单个淋巴细胞和无DMD家族史的单个胚胎细胞 ,用五重巢式PCR技术检测DMD基因外显子 17、19、44、48和SRY基因。结果 在正常男性单个淋巴细胞扩增成功率为 96 7% (145 /15 0 ) ,假阳性率为 4% (1/2 5 ) ,假阴性率为 0 (0 /2 5 )。在正常女性单个淋巴细胞扩增成功率为 98% (147/15 0 ) ,假阳性率为 0 (0 /2 5 ) ,假阴性率为 0 (0 /2 5 )。 15个胚胎细胞扩增成功率为 10 0 % (6 6 /75 ) ,假阳性率为 0 (0 /2 5 )。结论 本文建立的单细胞DMD基因外显子 17、19、44、48和SRY基因五重巢式PCR技术具有较高的敏感性和特异性 ,有望应用于DMD