抑郁模型大鼠不同脑区5-HT_(1A)蛋白表达及加味温胆汤的干预作用

目的:基于不同脑区5-HT_(1A)蛋白表达,探讨模型大鼠抑郁发病机制以及加味温胆汤的干预作用。方法:将32只SPF级雄性SD大鼠(体质量180~200 g)随机分为正常对照组、抑郁模型组、抑郁中药组、抑郁西药组各8只。采用慢性轻度不可预见性应激制作大鼠抑郁模型,其中正常对照组、抑郁模型组大鼠灌胃生理盐水,抑郁中药组灌胃12 g/kg加味温胆汤,抑郁西药组灌胃1.8 mg/kg百忧解。35天后进行行为学检测及取材,通过Western blot法检测各组大鼠杏仁核、前额皮质、海马CA3区及下丘脑组织中5-HT_(1A)蛋白表达。结果:行为学数据显示,抑郁模型组大鼠水平运动次数、垂直运动次数以及总路程较正常对照组减少(P<0.05),抗抑郁西药百忧解只对总路程有影响(P<0.05),而加味温胆汤能改善模型大鼠抑郁行为表现(P<0.05),提高水平运动、垂直运动次数,延长总路程。抑郁模型组大鼠海马CA3区5-HT_(1A)蛋白表达水平升高,加味温胆汤能降低海马CA3区5-HT_(1A)蛋白表达(P<0.05),百忧解能提高杏仁核5-HT_(1A)蛋白表达(P<0.05)。结论:抑郁模型大鼠不同脑区5-HT_(1A)蛋白表达不一致,抑郁模型大鼠海马CA3区5-HT_(1A)蛋白表达升高,加味温胆汤可能通过降低抑郁模型大鼠海马CA3区5-HT_(1A)蛋白表达发挥抗抑郁作用,而百忧解能提高杏仁核5-HT_(1A)蛋白表达,其抗抑郁机制有待进一步阐明。

自拟安神方对心肾不交证失眠大鼠皮质区和海马区5-HT和DA信号通路影响

目的探索自拟安神方(简称安神方)对大鼠不同脑区5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和多巴胺(dopamine,DA)信号通路的影响,揭示安神方抗大鼠心肾不交证失眠的机制。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照组,安神方高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其他各组采用多因素方法制备改良的心肾不交证失眠大鼠模型,灌胃治疗2周。HE染色观察大鼠脑组织形态结构。高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测大鼠皮质区和海马区DA和5-HT的含量。免疫蛋白印迹法检测5-HT信号通路上5-HT_(1A)受体、5-HT_(2A)受体、磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和DA信号通路上D_(1)R_(1)在皮质区和海马区的蛋白表达。结果HE染色显示模型组皮质区神经元有少量的凋亡,海马结构区变化不明显;安神方组皮质区神经元凋亡有所减轻。HPLC-ECD结果显示,与正常组比较,模型组皮质区和海马区DA含量均升高(P<0.05),5-HT含量均显著下降(P<0.05);与模型组比较,安神方组皮质区和海马区DA含量显著降低(P<0.05),同时海马区5-HT含量有所提高(P<0.05)。免疫印迹结果显示,与正常组比较,模型组皮质区5-HT_(1A)和CREB蛋白表达降低(P<0.05),海马区D_(1)R_(1)蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,安神方组皮质区5-HT_(1A)和信号通路上关键蛋白CREB的蛋白表达上调(P<0.05),并且海马区D_(1)R_(1)的蛋白表达下调(P<0.05),其信号通路上CREB蛋白表达差异虽无统计学意义,但各给药组仍有上调趋势。结论安神方抗心肾不交证失眠的机制可能与抑制皮质区神经元凋亡,并促进皮质区和海马区5-HT通路功能、抑制DA通路功能有关。

5-HTTLPR基因多态性与惊恐障碍发病风险关系的Meta分析

目的系统评价5-羟色胺转运体启动子区(5-HTTLPR)基因多态性与惊恐障碍(PD)发病风险的关系。方法利用PubMed、Embase、中国知网、维普网和万方数据知识服务平台等数据库检索5-HTTLPR基因多态性与PD发病风险关系的相关文献,根据异质性检验结果,采用固定效应模型分析总体人群及以种族划分为亚组人群5种基因遗传模型下5-HTTLPR基因多态性与PD发病风险的关系。结果共纳入合格文献11篇,包括PD组1431例,对照组2148例。在总体人群及以种族划分为亚组人群中,5种基因遗传模型下5-HTTLPR基因多态性与PD发病风险均无关(均P>0.05)。结论5-HTTLPR基因多态性可能与PD发病风险无关。

PET/CT影像组学结合LncRNA-DGCR5在NSCLC精准医疗中的应用研究

目的研究PET/CT影像组学结合长链非编码RNA DiGeorge综合征临界区基因5(LncRNA-DGCR5)在非小细胞肺癌(NSCLC)精准医疗中的应用价值。方法106例NSCLC患者均接受PET/CT检查及放化疗治疗,根据治疗后实体肿瘤疗效评价标准(RECIST)对其进行疗效评价,将完全缓解和部分缓解患者纳入治疗有反应组(58例),疾病稳定和疾病进展患者纳入治疗无反应组(48例)。比较2组患者的PET/CT图像纹理参数[最大标准摄取值(SUV_(max))、平均值、方差、峰度、偏度、对比度、熵、能量];实时荧光定量PCR检测外周血LncRNA-DGCR5表达;构建受试者工作特性(ROC)曲线分析各指标对NSCLC患者疗效的预测价值。结果有反应组SUV_(max)、熵及LncRNADGCR5表达低于无反应组(P<0.05),能量高于无反应组(P<0.05),其余参数比较差异无统计学意义;以LncRNADGCR5表达均值2.01为临界值,将患者分为LncRNA-DGCR5低表达组(51例)和高表达组(55例),与LncRNADGCR5低表达组比较,LncRNA-DGCR5高表达组PET/CT纹理参数中SUV_(max)、熵升高,能量降低(P<0.05);ROC曲线结果显示,SUV_(max)、熵、能量及LncRNA-DGCR5预测NSCLC患者疗效的AUC分别为0.897、0.851、0.795和0.949,且联合预测的AUC最高,为0.998。结论PET/CT影像组学结合LncRNA-DGCR5有助于预测NSCLC患者的疗效,从而在NSCLC精准医疗中提供指导。

瑞芬太尼通过上调lncRNA DGCR5表达影响卵巢癌细胞增殖和转移的机制研究

目的探讨瑞芬太尼对长链非编码RNA(lncRNA)DiGeorge综合征关键区域基因5(DGCR5)表达的调控及卵巢癌细胞生长和转移的影响。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测0、0.5、5.0、50.0、500.0 ng/mL瑞芬太尼组、si-NC组、si-lncRNA DGCR5组、si-NC+500 ng/mL瑞芬太尼组、si-lncRNA DGCR5+500 ng/mL瑞芬太尼组卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3的增殖;采用流式细胞仪、Transwell法、免疫印迹试验(Western blot)和定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)依次检测SKOV3、OVCAR3细胞的凋亡、迁移、侵袭以及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达和lncRNA DGCR5表达。结果与0 ng/mL瑞芬太尼比较,0.5、5.0、50.0、500.0 ng/mL瑞芬太尼可降低SKOV3、OVCAR3细胞的增殖活性、迁移及侵袭细胞数量以及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平,增加凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白和lncRNA DGCR5表达水平,差异有统计学意义(P<0.01)。与si-NC组比较,lncRNA DGCR5低表达可使卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3的lncRNA DGCR5表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,细胞增殖活性、迁移及侵袭数量、CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01)。lncRNA DGCR5低表达可以逆转瑞芬太尼对卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结论瑞芬太尼通过上调lncRNA DGCR5,抑制卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3的增殖和转移,促进其凋亡。

手术切除联合植入5-氟尿嘧啶治疗局部区域复发乳腺癌患者的效果

目的:观察手术切除联合植入5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗局部区域复发乳腺癌患者的效果。方法:选取2015年3月至2019年3月该院收治的96例局部区域复发乳腺癌患者进行前瞻性研究,按照摸球法将其分为观察组与对照组各48例。对照组行切除手术治疗,观察组在对照组基础上联合植入5-FU治疗,比较两组手术前后T细胞亚群指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))水平和自然杀伤细胞(NK)水平,术后1年、3年复发率、生存率和并发症发生率。结果:手术前后,两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)和NK细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后1年,观察组复发率为10.42%,明显低于对照组的27.08%,差异有统计学意义(P<0.05);术后3年,观察组复发率为25.00%,明显低于对照组的45.83%,差异有统计学意义(P<0.05);术后1年,两组生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后3年,观察组生存率为91.67%,明显高于对照组的75.00%,差异有统计学意义(P<0.05);住院期间,两组并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手术切除联合植入5-FU治疗局部区域复发乳腺癌患者可提高3年生存率和降低复发率,效果优于单纯手术切除。

基于系统聚类方法划分中国PM2.5防治区域

中国各城市细颗粒物(PM_(2.5))环境空气质量差异较大,呈现明显的区域污染特征。合理划分PM_(2.5)污染防治区域、开展区域性大气环境管理,是改善区域空气质量的重要途径。根据2015年全国108个重点城市大气PM_(2.5)的日均浓度数据,使用系统聚类方法对各城市的PM_(2.5)全年污染变化特征进行分析,从而划分出不同防治区域。依据聚类分析的3项原则,综合比较4种不同聚类方法及结果,最后提出可以划分出8个PM_(2.5)污染防治区域:a赣鄂湘接壤地区(长株潭及周边城市),b成渝及周边地区,c粤桂地区,d闽浙沿海城市群,e东三省地区,f长三角地区,g山东及周边地区,h京津冀、山西中北部、陕西关中城市群。

鸡8个功能基因5′-侧翼区与内含子的SNP多样性比较

本研究旨在探讨鸡功能基因5′-侧翼区的单核苷酸多态性(SNP)水平。作者以白来航鸡、隐性白洛克鸡、杏花鸡、丝羽乌骨鸡、固始鸡、红色原鸡为材料,扩增了GH、DDBC1、RIKEN、RASGRP3、IGF1、THRSP、VIP及PRL共8个基因的5′-侧翼区DNA序列。扩增序列全长为8,399bp,SNP的总数为161个,平均每52bp出现一个SNP。8个功能基因5′-侧翼区核苷酸多样性的θ均值和π均值分别为0.00620±0.00110和0.00559±0.00100。比较检验表明,5′-侧翼区的SNP多样性显著低于内含子区域。5′-侧翼区是基因表达的一个重要调控区域,在分子进化和系统发生过程中承受着比内含子区域更大的选择压,其较低的SNP多样性是适应性较好的表现。Tajima检验与Fu和Li检验表明,与鸡繁殖性状显著关联的VIP基因和PRL基因很可能是人工选择或自然选择的目的基因。

鳜鱼(Siniperca chuatsi)β-肌动蛋白基因cDNA全序列与5′侧翼区的克隆与分析

采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128bp,编码375个氨基酸。将所得序列与其它动物类群的β-肌动蛋白基因序列进行比较分析显示,鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等不同类群脊椎动物β-肌动蛋白氨基酸序列同源性均在96%以上,说明该基因在生物进化过程中高度保守。通过鳜鱼与其它脊椎动物β-肌动蛋白基因的核苷酸序列构建的进化树显示,脊椎动物β-肌动蛋白聚类成3个分支,鱼类β-肌动蛋白基因形成一个独立的分化群,说明鱼类β-肌动蛋白基因起源于一个共同祖先。克隆得到的鳜鱼β-肌动蛋白基因5'侧翼序列长1399bp,对其进行序列分析,在其起始密码字ATG上游200bp范围内发现含有CAATbox、CC(A/T)6GG(CArGbox)、TATA box对转录调控起重要作用的顺式元件,同时在侧翼区也发现含有GC box、MYOD、YY1、SP1、GATA等多个潜在调控元件。鳜鱼β-肌动蛋白基因5′侧翼序列的克隆成功,为今后转基因鳜鱼的研究工作奠定了基础。

鹅催乳素受体基因cDNA5′端序列克隆

为寻找鹅就巢性相关基因,从洪泽湖性成熟公鹅睾丸组织分离并合成鹅cDNA第一链;利用RACE克隆了鹅催乳素受体基因(gPRLR)5′端序列。所克隆的499 bp 5′端序列可划分为348 bp的5′-UTR、151 bp的以ATG作为起始密码子的阅读开放框。与鸡催乳素受体基因(cPRLR)cDNA序列作比对,此499 bp序列可划分为238 bp的第1外显子、69 bp的第2外显子、114 bp的第3外显子及81 bp的部分第4外显子,起始密码子位于第3外显子45 bp处。阅读开放框核苷酸序列与cPRLR cDNA同源部位的阅读开放框同源性达到88%,推导的氨基酸序列同源性达到84%。

奶牛乳铁蛋白基因5′侧翼区遗传多态性及其与乳腺炎关联性分析

牛乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是保护乳腺组织的防御因子之一,是具有多种功能的糖蛋白。关于牛LF基因的多态性研究的报道较多,但其多态性与奶牛乳腺炎相关性的研究较少。文章采用PCR-RFLP、CRS-PCR对268头中国荷斯坦牛LF基因启动子区的-926(G/A)、-915(T/G)、-478(/G)、+72(T/C)突变进行基因型分型,应用最小二乘线性模型分析LF基因多态性与体细胞评分(Somaticcellscore,SCS)的相关性。结果表明,新发现+72(T/C)和-478(/G)对SCS有显著影响,而其他两个位点对SCS影响不显著(P>0.05)。+72(T/C)的AB基因型是优良基因型,其个体的SCS值均显著低于AA型(P<0.01)、BB型个体(P<0.05)。-478(/G)位点的C等位基因是优良的等位基因,CC基因型个体的SCS值极显著低于CD、DD基因型个体(P<0.01)。因此,LF基因+72(T/C)的AB基因型和-478(/G)位点的CC基因型均是奶牛乳腺炎抗性的优良基因型,可作为分子标记应用于奶牛乳腺炎抗性筛选。

鹅肌肉生长抑制素基因5′-调控区序列特征和组织表达分析

根据鸡的Myostatin基因序列设计引物,从鹅的基因组DNA中扩增到了Myostatin基因的5′-调控区,克隆并测序后获得了1.3 kb片段序列。与其他物种的序列比较发现,鹅Myostatin基因的该调控序列与鸭同源性为94.8%,与鸡同源性为69.2%,而与小鼠仅为14.3%。通过生物信息学方法,分析确定了其启动子和转录起始位点,发现在转录起始位点上游-34 bp处存在1个TATA盒,-77 bp处存在1个CAAT盒。还发现在该片段中包含5个E框、2个MEF2结合位点、1个MSX2盒和1个MTATA盒等肌肉特异性转录因子结合位点。采集鹅肝脏、胸肌、腿肌、心脏、肺、肠、肾和脑等8种组织并提取总RNA,用Northern blot方法检测了Myostatin基因mR-NA在8种组织中的表达情况,发现其只在胸肌和腿肌中表达,而在其他几种组织中没有检测到表达信号。

人肝刺激因子基因5′-侧翼序列克隆和结构分析

为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定hHSS基因转录起始位点 。

杜氏盐藻2种碳酸酐酶基因5’上游的克隆与序列分析

目的 :克隆盐藻 2种碳酸酐酶基因 (DCA1、CA1 ) 5’上游区序列 ,并对其进行测序和序列分析。方法 :利用DraⅠ、EcoRV、PvuⅡ和StuⅠ 4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA ,并与衔接头连接 ,构建成盐藻步行基因组文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4 ;巢式PCR方法从盐藻步行基因组文库中扩增DCA1和CA1基因 5’上游区序列 ,双脱氧末端终止法测序。结果 :DCA1基因 ,在GWL1、GWL3中分别扩增出约 1 .3kb和 4 .5kb的特异带 ,而CA1基因 ,则在GWL2、GWL4中分别扩增出 1 .7kb和 2 .5kb的特异带 ;序列分析结果表明 ,所得序列的 3’端与已知DCA1、CA1基因cDNA 5’端序列完全一致。该 2序列均有多个与转录调控有关的保守序列 (如TATA -box、CAAT -box)和富含GT的重复序列等许多相似之处。结论 :采用基因组步行方法从已知cDNA周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的DCA1、CA1基因的 5’上游区序列 ,可能是

牛FSHR基因5′端侧翼序列的分析和多态性研究

以中国西门塔尔牛基因组DNA为模板 ,参照绵羊的FSHR基因序列设计和合成引物 ,PCR扩增获得长度为 931bp ,包括 5′端侧翼 797bp和结构基因第一外显子区 134bp的牛FSHR基因片段。将该片段克隆于PUC18载体中 ,作序列分析发现 :牛的FSHR基因转录启动子的遗传结构与人和鼠的FSHR基因不同 ,它的基因转录启动区含有TATA盒和类CAAT盒序列。在检索出的转录调节元件、或特征性序列位点 ,牛与绵羊在 5个序列位点有碱基变异 ,这可能与牛和绵羊的产仔率高低不同相关。对 34头份中国西门塔尔牛的扩增产物 ,应用PCR RFLP方法进行多态性分析 ,TaqⅠ酶切出现了多态性 ,酶切产物电泳呈现 3种基因型 ,由 2种等位基因构成。通过对基因频率和基因型频率在种用公牛、双胎母牛和随机牛类群中分布的比较研究结果 ,认为该基因与牛的繁殖性状存在连锁相关。

3个黄牛品种的myostatin 5′调控区多态与生长性状的相关分析

用PCR-RFLPs方法对南阳牛、秦川牛、郏县红牛3个品种共411个个体的myostatin5′调控区的单核苷酸多态性(SNPs)进行分析。结果表明,3个品种在myostatin5′调控区T→A突变以等位基因T为主,仅在郏县红牛中发现1个AA型纯合体,郏县红牛品种显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),其它品种处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。对黄牛myostatin5′调控区T→A突变与南阳牛、秦川牛和郏县红牛生长性状进行相关分析,结果显示,TT型南阳牛6月龄的胸围和胸围指数显著低于TA型个体,TT型南阳牛18月龄的体高显著高于TA型个体(P<0.05),但基因型对秦川牛和郏县红牛生长性状的效应不显著(P>0.05)。提示在南阳牛的育种实践中应该综合考虑南阳牛生长阶段和所要选择的性状。

BamHI酶切位点变异区域性分布在HCV1b型5'非编码区的研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)1b型5'非编码区BamHⅠ酶切位点变异的区域性分布。方法对来自中国4个不同地区的64例HCV1b基因型血清样品进行5'-NCR扩增后,分别用MboⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切分析,比较不同地区变异株分布的差异。结果测序证实中国HCV1b基因型在117位有BamHⅠ酶切位点。64例血清样品中,BamHⅠ单切点变异株,华南7例(28%),东北1例(10%),华北1例(11.1%),西南0例;MboⅠ及BamHⅠ切点均无的变异株,西南8例(40%),华南2例(4%),东北1例(10%),华北0例。结论证实HCV1b型BamHⅠ变异具有区域性分布特点,华南地区和西南地区变异较多,华北和东北变异较少。而这一变异是否与干扰素治疗耐药有关,尚有待于进一步研究。

小麦抗逆相关基因TaSAP1的5′非翻译区内含子功能分析

逆境相关蛋白(stress associated protein,SAP)是植物中一类具有A20/AN1锌指结构域的蛋白,而A20/AN1锌指蛋白主要参与植物逆境响应。小麦中TaSAP1基因参与植株对各种逆境的响应,其5′非翻译区含有2个内含子(5'untranslated region intron,5UI)。本研究利用重叠PCR,构建了TaSAP1的2个5UI缺失突变的表达载体,并转化二穗短柄草(Brachypodium distachyon),通过分析GUS活性,研究TaSAP1启动子及其5UI的生物学功能。结果表明TaSAP1启动子P1可受干旱、低温和外源ABA胁迫上调表达,表达活性分别是对照的10、6和4倍。TaSAP1基因2个5UI对启动子活性至关重要,2个5UI同时突变可致P1失活;Intron-1缺失突变导致P1活性降低约2.7倍(P<0.05),但不影响P1对逆境胁迫的响应;Intron-2缺失突变导致P1失去对干旱、低温和外源ABA的响应能力。本研究结果为深入研究TaSAP1 5UI的生物学功能奠定了基础,也为改善作物抗逆性提供了重要元件。

鲢鱼可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGST)基因cDNA全序列与5′调控区的克隆与分析

淡水鱼类可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGST)在微囊藻毒素去毒代谢过程中具有独特的关键作用,因而也称为微囊藻毒素去毒酶.从淡水食毒藻鱼类鲢鱼(Hypophthalmichthysmolitrix)肝脏通过简并引物克隆微囊藻毒素去毒酶基因cDNA核心序列,应用5′RACE和3′RACE技术分别扩增该序列的5′末端和3′末端序列,最后通过序列拼接获得鲢鱼肝脏微囊藻毒素去毒酶基因cDNA全序列.序列分析结果表明,鲢鱼肝脏微囊藻毒素去毒酶基因cDNA全长920bp,其中5′-UTR长74bp,3′-UTR长174bp,编码区长672bp,编码223个氨基酸.应用基因组步行法,在鲢鱼克隆得到淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因5′侧翼区878bp序列.与哺乳动物及海水鱼sGST基因不同,鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因的5′侧翼区,发现存在多个脂多糖反应元件(LPSRE),表明来源于毒藻的脂多糖可能对鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因表达有潜在调控作用.

杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析。方法:利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列,测序并进行分析。为检测其表达特性,构建了该片段与GUS嵌合基因的表达载体pNR-GUS,通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的表达。结果:从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列。GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性。结论:所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有“开关”活性的可控性启动子。