云南省野猪源猪瘟病毒E2及5'NTR基因序列测定分析

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)感染猪引起的一种急性、热性、接触性传染病,严重危害我国养猪业健康稳定发展。本研究采用RT-PCR方法,对从云南省宁洱县2头病死野猪体内分离到的2株CSFV毒株进行了E2及5'NTR基因扩增、克隆及序列测定;采用DNAMAN、MEGA6等分子生物学软件,对测得的序列与国内外参考毒株进行了同源性分析及系统发育分析。结果显示:2株野猪源CSFV株E2、5'NTR基因同源性分别为87.2%、100%,与国内外参考毒株同源性分别为81.0%~97.6%、93.6%~98.5%,与我国强毒株Shimen株的同源性分别为81.0%~81.2%、95.6%;2株野猪源CSFV毒株E2基因属于基因2.1亚型,5'NTR基因属于基因2.3亚型。氨基酸序列分析显示:其中一株分离毒株的E2基因有6个氨基酸具有2.1d分子变异特征,另一株兼有2.1d和2.1b亚型分支特征,可能是2.1b和2.1d亚型的过渡毒株。结果表明,云南省野猪源CSFV虽存在一定的遗传衍化,但总体比较稳定。本研究为云南省CSF防控提供了分子流行病学依据,为进一步做好分子变异等研究奠定了基础。

急性高眼压模型中p75^(NTR)抑制剂对视网膜神经节细胞作用的研究

目的验证通过抑制p75^(NTR)(p75 neurotrophin receptor)可降低急性高眼压(acute ocular hypertension,AOH)对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的损伤作用。方法应用大鼠急性高眼压模型,玻璃体腔注射p75^(NTR)抑制剂(TAT-Pep5),按建模后1、3、5 d取材,分为正常对照组、假手术组、急性高眼压组、急性高眼压+TAT-Pep5组。采用免疫荧光技术、Western blotting等方法检测急性高眼压模型中相关蛋白的表达变化。TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况。结果急性高眼压模型视网膜Müller细胞上proNGF表达增加。注射p75^(NTR)抑制剂TAT-Pep5后急性高眼压视网膜上cleavedcaspase 3蛋白量减少,并且RGCs凋亡数目减少。结论视网膜神经节细胞损伤可引起proNGF表达增加,选择性阻断Müller细胞上的p75^(NTR)或干预其信号传导通路,可以减少急性高眼压模型中RGCs凋亡。

中国株丙型肝炎病毒(HCV)感染猕猴后5'NTR—C区基因组的cDNA序列分析

从用于接种猕猴的受ＨＣＶ感染的２份献血员的血清，第一代猕猴感染ＨＣＶ１１个月的１＃食蟹猴血清和第二代猕猴受第一代猕猴ＨＣＶ血清感染ＨＣＶ３个月后的１４＃恒河猴血清，提取ＫＮＡ，用自行设计的ＨＣＶ５＇非编码区和核心区（５＇ＮＴＲ—Ｃ区）引物进行逆转录ＰＣＲ，将扩增的７７９ｂｐｃＤＮＡ片段克隆到ｐＵＣ１９质粒上；每一株挑３个克隆用双脱氧链终止法测定其序列并矫正偏差。４株ＨＣＶ的５＇ＮＴＲ—Ｃ区序列，原代人Ａ株（ＣＸ１）ｃＤＮＡ全长７７９ｂｐ，原代人Ｂ株（ＣＸ２）ｃＤＮＡ全长７７８ｂｐ，第一代猕猴株（ＣＸ３）ｃＤＮＡ全长７７６ｂｐ，第二代猕猴株（ＣＸ４）ｃＤＮＡ全长均为７７７ｂｐ，ＣＸ１株和ＣＸ４株均在５＇ＮＴＲｎｔ—２１６有—Ｃ的插入，ＣＸ３和ＣＸ４Ｃ区ｎｔ３８５—３８７处的３个硷基缺失；ＣＸ１株与ＣＸ２、ＣＸ３、ＣＸ４比较，同源性分别为９８．０７％。９６．１５％、９５．２５％：ＣＸ２与ＣＸ３、ＣＸ４的同源性分别为９６．２８％、９５．７６％；ＣＸ３与ＣＸ４的同源性为９７．５６％。由克隆的ＨＣＶＣ区ｃＤＮＡ推导的氨基酸序列，从ＨＣＶ的启始密码起，ＣＸ１株、ＣＸ２株序列全长１６８个氨基酸。

高黏常温精薄罩面技术应用研究

本文旨在丰富公路预防性养护技术,开发绿色低碳、舒适降噪、美观抗滑、经济耐久的新型预防性养护技术.通过对高黏常温精薄罩面技术进行研究,确定了NTAC-5专用骨架结构矿料级配,分析比对了NTR交联型常温复合改性沥青技术指标和性能优势,结合常温就地拌和摊铺施工和碾压工艺对混合料试验方法进行设计,并与空隙型超薄罩面混合料和A级微表处混合料进行路用性能比较.高黏常温精薄罩面结合了微表处简单、快速、环保的施工工艺优点和热拌超薄罩面混合料路用性能优势,解决了路面麻面、松散、裂缝、轻型车辙等路面病害问题.

中国口服脊髓灰质炎减毒活疫苗安全性评估

目的研究北京生物制品研究所(北京所)和中国医学科学院医学生物学研究所(昆明所)生产的口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)减毒位点的基因特征,对比Sabin标准株,从基因序列的基础上研究OPV是否安全有效,从而为中国维持无脊灰状态OPV的使用和免疫策略提供科学依据。方法随机选取生产的不同批次OPV,先进行病毒分离和扩增,用中和试验定型,分出Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰疫苗病毒,然后用聚合酶链反应(PCR)得到各型脊灰疫苗病毒的5′非编码区(5′NTR区)和VP1蛋白编码区基因核苷酸片段,测序后,与各型脊灰Sabin标准株进行比较分析。结果两个所生产的OPV各型疫苗病毒的5′NTR区核苷酸序列与标准Sabin株各型别5′NTR区无差别,同源性为100%;VP1区核苷酸序列比较,北京所与昆明所OPVⅠ型VP1区与SabinⅠ型VP1区核苷酸序列同源性为100%;北京所OPVⅡ型VP1区与SabinⅡ型VP1区比较,有5个碱基变化,同源性为99.45%,昆明所OPVⅡ型VP1区与SabinⅡ型VP1区比较,有6个碱基变化,同源性为99.34%;北京所与昆明所OPVⅢ型VP1区与SabinⅢ型VP1区比较,都有2个碱基变化,同源性为99.78%。北京所与昆明所生产的OPV,3个型别的5′NTR区和VP1蛋白编码区基因核苷酸序列与标准Sabin株比较,所有神经毒力位点未发生变化,未发生毒力回复突变。结论中国北京所和昆明所生产的OPV是安全有效的,应对如何停止使用OPV,如何用脊灰灭活疫苗取代OPV进行前期研究工作。