5-AIQ对大肠癌细胞系HT-29细胞PARP活性抑制的生物学作用

背景与目的:聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[poly(adenosine 5′-diphosphate ribose)polymerase,PARP]抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-aminoisoquinolinone,5-AIQ)在炎症中具重要作用,但在肿瘤中的作用尚不清楚。本研究初步探讨5-AIQ对大肠癌PARP活性抑制的生物学作用。方法:链霉生物素-过氧化物酶法(Streptavidin-Peroxidase,SP)免疫组化法和免疫荧光双标法用于检测人大肠癌组织聚(腺苷二磷酸核糖)[poly(adenosine 5′-diphosphate ribose),PAR],及其与P-选择素(P-selectin)、细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的共表达,大肠癌切缘肠粘膜为对照。通过粘附实验观察5-AIQ对结肠癌HT-29细胞系与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)粘附的影响;同时采用SP法观察5-AIQ对HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达的影响。结果:45例大肠癌组织中,PAR阳性率(77.8%,35/45)明显高于对照肠粘膜(10.0%,1/10)(P<0.05);其中伴转移者PAR阳性率(86.7%,26/30)高于不伴转移者(60.0%,9/15)。PAR阳性与P-selectin和ICAM-1表达相关。结肠癌HT-29细胞与HUVEC粘附实验显示,5-AIQ浓度为100、300、500μmol/L时,细胞粘附率分别为56.79%、46.31%和39.77%,明显低于对照组(未加5-AIQ者)(粘附率为100%)。经5-AIQ处理的HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达HSCOR得分分别为1.41±0.12、1.57±0.13和1.23±0.13,明显低于未经5-AIQ处理的HT-29细胞(HSCOR得分分别为2.61±0.10、2.73±0.16和2.30±0.12)(P<0.05)。结论:大肠癌组织内PARP活性增强。PARP抑制剂5-AIQ可抑制大肠癌HT-29细胞与HUVEC的粘附,并可抑制大肠癌HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达。

PARP抑制剂5-AIQ对CT26细胞侵袭及转移的影响

目的探讨多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerases,PARPs]抑制剂5-氨基异喹啉酮[5-Aminoisoquinolinone.HCl,5-AIQ]对小鼠结肠腺癌CT26细胞基质黏附、运动、侵袭能力的影响。方法应用Westernblot检测5-AIQ对PARP表达的影响,细胞-基质黏附实验、细胞运动及侵袭实验观察5-AIQ抑制CT26细胞PARP后,其基质黏附、运动及侵袭能力的变化。结果5-AIQ处理组PARP表达明显弱于未处理组(P<0.05);黏附实验结果显示,与5-AIQ未处理组比较,5-AIQ100、500μmol/L处理组的吸光度值明显降低(P<0.01),其黏附抑制率分别是14.54%、21.69%;运动及侵袭实验中,5-AIQ500μmol/L处理组与未处理组的细胞数差别显著(P<0.05),其运动及侵袭抑制率分别是30.09%、37.47%。结论5-AIQ可抑制CT26细胞PARP的表达,并可降低CT26细胞基质黏附、运动及侵袭能力,5-AIQ在抗肿瘤侵袭转移中可能发挥作用。

PARP抑制剂5-AIQ对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3的作用

目的探讨多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerases,PARP]抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-Aminoisoquinolinone.HCl,5-AIQ),对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡和增殖的作用。方法将PC3细胞株分组培养并应用PARP抑制剂5-AIQ处理后,流式细胞仪检测5-AIQ对PC3细胞株凋亡的影响;应用蛋白印迹法检测5-AIQ对PC3细胞内PARP表达的影响;用MTS法检测5-AIQ对PC3细胞增殖的影响,同时采用流式细胞仪观察5-AIQ处理PC3细胞后细胞凋亡的变化。结果与未经5-AIQ处理的前列腺癌细胞比较,5-AIQ能明显抑制前列腺癌细胞内PARP的蛋白表达;对前列腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪分析显示,5-AIQ可引起细胞凋亡。结论 5-AIQ可以通过抑制细胞内PARP的表达,从而对细胞的增殖有明显抑制作用,并诱导细胞的凋亡。期望为雄激素非依赖性前列腺基因治疗提供一个新的方向。

PARP抑制剂5-AIQ对小鼠结肠癌CT26细胞PARP/NF-κB复合物和NF-κB活性的影响

目的探讨PARP抑制剂5-AIQ对小鼠结肠癌CT26细胞核内PARP抑制后,对PARP/NF-κBP65复合物形成和NF-κB活性的影响。方法Western blot检测结肠癌CT26细胞核内PARP与NF-κBP65的表达,免疫共沉淀法分析CT26细胞核内PARP/NF-κBP65复合物形成,电泳迁移率改变分析法检测CT26细胞核转录因子NF-κB的结合活性。结果5-AIQ处理组与5-AIQ未处理组比较,前者小鼠结肠癌CT26细胞核内PARP与NF-κBP65的表达水平均明显减弱(P<0.05),PARP/NF-κBP65复合物形成明显减少(P<0.05),NF-κB的活性显著降低(P<0.05)。结论5-AIQ可通过抑制PARP的表达,减少PARP/NF-κBP65复合物的形成,进而使NF-κB活性降低。

PARP-1抑制剂5-AIQ联合依托泊苷对PC3细胞增殖的影响

目的研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)联合化疗药物依托泊苷(VP16)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株增殖的影响。方法 MTS比色法观察不同浓度5-AIQ联合VP16对PC3细胞的增殖抑制作用,并应用WesternBlot法检测应用5-AIQ或VP16及二者联合应用对PC3细胞内PARP-1蛋白表达的影响。结果 MTS结果显示,与单独应用VP16(5μmol/L、25μmol/L或125μmol/L)比较,联合应用5-AIQ(125μmol/L或500μmol/L)可以明显增强VP16对PC3细胞的增殖抑制作用,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。而且当5-AIQ与低剂量VP16(5μmol/L)联合应用时可以达到与高剂量VP16(25μmol/L或125μmol/L)类似甚至更强的增殖抑制作用。WesternBlot结果显示,与对照组比较,5-AIQ(250μmol/L)或VP16(50μmol/L或100μmol/L)均可以明显下调PC3细胞内源性PARP-1的表达(P<0.05)。与二者单一处理组(5-AIQ,250μmol/L)或(VP16,50μmol/L)相比,二者联合应用可进一步下调PARP-1的表达水平。结论 PARP-1抑制剂5-AIQ可以明显增强VP16对PC3细胞的增殖抑制作用,该作用可能与PARP-1蛋白的表达抑制有关。

PARP抑制与小鼠结肠癌CT26细胞生长活性的关系

目的:探讨PARP抑制与结肠癌CT26细胞生长活性的关系。方法:采用PARP抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-aminoisoquinolinone,5-AIQ)处理小鼠结肠癌CT26细胞,MTT法检测CT26细胞离体生长,免疫荧光双标、激光共聚焦检测结肠癌CT26细胞核内PARP与NF-κB p65的表达。结果:不同浓度的5-AIQ处理组(0.1mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L)结肠癌CT26细胞生长抑制率分别为17.52%、27.63%和39.93%,抑制率随5-AIQ浓度的增加而增加,差异具显著性(P<0.05)。PARP与NF-κB p65在CT26细胞核内存在共表达,且呈正相关(P<0.05)。5-AIQ处理组与5-AIQ未处理组相比,PARP与NF-κB p65的表达均减弱,差异具显著性(P<0.05),PARP与NF-κB p65亦呈正相关(P<0.05)。结论:PARP抑制剂5-AIQ可以抑制结肠癌CT26细胞生长活性。其可能与PARP抑制,使NF-κB活性降低有关。PARP在结肠癌生长过程中可能具有重要作用。

PARP抑制剂对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响

目的探讨5-AIQ抑制小鼠结肠癌CT26细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]后对其肝转移的影响。方法以小鼠脾脏接种小鼠结肠癌CT26细胞肝转移为模型,采用CT26细胞体外药物处理后脾脏接种和脾脏接种后直接腹腔给药两种方式,将36只BALB/c小鼠按随机区组设计分成6组,其中4组做实验组,2组做对照组,每组6只。观察脾脏原发肿瘤和肝脏转移肿瘤的变化。Western blot检测PARP在各组脾脏原发瘤组织中的蛋白表达量。结果经过药物5-AIQ处理后,CT26细胞脾脏接种的小鼠和CT26细胞直接脾脏接种后腹腔给药处理的小鼠,脾脏肿瘤体积缩小和肝脏转移结节数目及分级减少,与对照组比较差别显著(P<0.05),但是不同剂量之间未见明显差异(P>0.05)。各5-AIQ处理组小鼠脾脏组织PARP表达明显低于未给药处理小鼠脾脏原发瘤组织(P<0.05)。结论5-AIQ能抑制CT26细胞PARP表达,对结肠癌CT26细胞脾脏原发瘤的生长及肝转移具有一定的抑制作用。