5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人喉癌HEP-2细胞株增殖与凋亡作用的影响

目的研究5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人喉癌HEP-2细胞株增殖与凋亡作用的影响。方法以人喉癌HEP-2细胞株为研究对象,以5-氟尿嘧啶为对照,用MTT法测定5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对HEP-2细胞的增殖抑制率;用流式细胞术测定5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体作用于HEP-2细胞后细胞的凋亡率及其细胞周期动力学的变化。结果5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对HEP-2细胞的IC50是5-氟尿嘧啶的1/3;5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体与5-氟尿嘧啶分别采用0.05、0.17μg/ml的浓度作用于HEP-2细胞72 h后,均提高阻滞HEP-2细胞于S期的比例,且5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体组S期细胞百分率明显高于5-氟尿嘧啶组。终浓度为0.05μg/ml的5-氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体作用于HEP-2细胞的凋亡率分别为(10.35±1.33)%、(21.57±0.11)%。结论与5-氟尿嘧啶相比较,5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人喉癌HEP-2细胞具有较好的体外增殖抑制作用,并且提高阻滞HEP-2细胞于S期的比例,能够提高HEP-2细胞的凋亡率。

利用产气肠杆菌EAM-Z1转化合成5-氟尿苷的转化率影响因素的研究

利用产气肠杆菌EAM Z1转化合成5 氟尿苷,从筛选中间体稳定剂、底物流加、底物诱导、菌体冻融和石英砂研磨等方面研究转化率的影响因素,结果:(1)转化过程中加入40 mmol/L的硼砂可以将转化率达到75.56%,提高30.28%;加入10 mmol/L的甘氨酸可以使转化率达到61.92%,提高6.76%;(2)流加5 氟尿嘧啶可以将转化率提高到87.78%;(3)培养过程中加入尿苷诱导效果并不明显,尿苷浓度为 0.001 g/L时效果最佳,提高3.63%;(4)菌体冻融和石英砂研磨使转化率下降26%。

5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖抑制与凋亡作用的影响

目的研究5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞株增殖与凋亡作用的影响。方法本研究以人鼻咽癌HNE-1细胞株为研究对象,以5-氟尿嘧啶为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对HNE-1细胞的增殖抑制率;用流式细胞仪(FCM)测定5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体作用与HNE-1细胞72h后细胞的凋亡率。结果 5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对HNE-1细胞的IC50是5-氟尿嘧啶的1/3;浓度为0.043μg/mL 5-氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体作用于HNE-1细胞的凋亡指数分别为(6.31±0.17)%、(19.53±1.79)%。结论本实验研究显示,与5-氟尿嘧啶相比较,5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体对人鼻咽癌HNE-1细胞具有很好的生长增殖抑制作用,并且能够显著提高HNE-1细胞的凋亡率。

Fcy::Fur/5-FC基因治疗对小鼠宫颈癌的体内实验研究

目的:研究融合基因Fcy::Fur联合5-FC对宫颈癌移植瘤的生长抑制作用及其副反应。方法:构建宫颈癌U27瘤株的Km小鼠荷瘤模型,阳离子脂质体介导Fcy::Fur融合基因体内转染联合腹腔注射5-FC,观察肿瘤体积、重量、倍增时间、生长抑制率以及胃肠道副反应。结果(1)治疗结束时基因治疗组和5—FU组肿瘤体积和重量分别为2.22±0.60cm3、2.38±0.04g和2.32±0.68cm3、2.49±0.73g,小于对照组的4.42±1.49cm3、4.74±1.59g,P<0.05;肿瘤倍增时间由对照组的44.33±2.33h延长为基因治疗组和5-FU组的50.04±2.71h和49.52±3.21h,P<0.05;基因治疗组和5-FU组的肿瘤生长抑制率分别为49.83%和47.51%,两者在肿瘤体积、重量和倍增时间及生长抑制率方面比较均无统计学意义,P>0.05。(2)5-FU组小鼠有明显的胃肠道反应,体重增长缓慢,与其它两组比较,P<0.05;而基因治疗组小鼠体重增长与对照组比较,P>0.05。结论:融合性自杀基因Fcy::Fur联合5-FC对小鼠宫颈癌移植瘤的生长有抑制作用,无明显胃肠道副反应。

应用球面对称设计优化两相体系生物转化合成5-氟尿苷

应用球面对称设计研究了水/有机溶剂两相体系对嘧啶核苷磷酸化酶基因工程菌生物转化合成5-氟尿苷的影响。结果表明,以30%(体积分数)DMSO为有机溶剂,当其体积比(以反应物总体积计)为30%、反应温度为55℃、反应时间为1 h、装液量为4 mL/50 mL时,5-氟尿嘧啶的转化率达75.7%,5-氟尿苷产量较单水相时提高近5倍。

融合型自杀基因系统Fcy：：Fur／5-FC对人肝癌细胞株HepG2体外杀伤作用的初步研究

目的研究融合型自杀基因Fcy：：Fur联合5-氟胞嘧啶（5-Fc）对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。方法应用脂质体介导法将Fcy：：Fur基因转染人人肝癌细胞株HepG2，经G418筛选2周后行有限稀释法获得稳定表达Fcy：：Fur基因的单克隆细胞。5-Fc处理后，通过MTF法和AnnexinV—FITC＋PI双标记染色法，检测Fcy：：Fur／5～FC自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的细胞增殖及凋亡的影响。结果MqT法检测显示稳定表达Fcy：：Fur基因的HepG2单克隆细胞经5-Fc处理后，在1、2、3、4、5天时对细胞的增殖有明显抑制作用。AnnexinV—FITC＋PI双标记染色法检测细胞凋亡率：1天为5．74％，2天为11．04％，3天为17．56％；PBS处理的细胞凋亡率：1天为3．67％，2天为3．68％，3天为4．42％，凋亡率无明显改变。结论Fcy：：Fur／5-FC自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的增殖有明显的抑制作用，并可促进肿瘤细胞凋亡。

逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗裸鼠体内胶质瘤实验研究

目的:构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究。方法:扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡。结果:PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体,载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106CFU/ml的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制。FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体。结论:AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据。

IL-2靶向脂质体的处方筛选及药物含量的测定

目的：筛选IL-2靶向脂质体的最佳处方,并对5-氟尿苷（5-fluorouridine,5-FUR）前药进行含量测定。方法：应用正交实验设计选择最佳处方配比;采用紫外分光光度法测定5-FUR前药的含量,检测波长为267nm。结果：筛选最佳处方：药脂比为1：10、磷脂与胆固醇的比例为3：1。5-FUP前药对照品浓度在0.002-0.02mg/ml的范围内与吸收度线性关系良好,回归方程为y=16.357x＋0.007,r=0.9997（n=3）,平均加样回收率为97.09%,RSD=2.05%（n=3）。样品中5-FUR前药含量为18.84-18.91μg/ml。结论：该处方设计合理,紫外分光光度法操作简便、稳定性好、结果可靠,可作为IL-2靶向脂质体中5-FUR前药含量测定方法。

5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体中磷脂含量的测定

目的：建立测定5-氟尿嘧啶核苷（5-FUR）前药脂质体中磷脂含量的方法。方法：以乙醇裂解5-FUR前药脂质体，用氯仿萃取后，在488nm波长处用硫氰铁铵显色法测定脂质体中磷脂的含量。结果：磷脂检测浓度的线性范围为0.01-0.10mg·mL^-1（r=0.9996，n=3）；平均回收率为99．66％（RSD=3．17％）。结论：本方法简便、快速、灵敏，可用于5-FUR前药脂质体的质量控制。