中性粒细胞LTB_4及5-HETE测定的反相高效液相色谱法

白三烯B_4(Leukotriene B_4,LTB_4)和5-羟二十碳四烯酸(5-hydroxyeicosatatraeniocacid,5-HETE)是花生四烯酸(AA)5-脂氧酶的代谢产物。LTB_4具有促进白细胞游走、趋化、聚集和脱颗粒等作用,是炎症反应的重要介质。5-HETE在炎症过程中的作用目前还不清楚,已发现它具有刺激嗜碱性粒细胞释放组织胺的作用。因此,测定LTB_4及5-

RP-HPLC法测定白细胞中LTB_4和5-HETE的含量

目的:建立了5-脂氧酶抑制剂筛选模型的RP-HPLC测定方法。方法:采用Brava BDSC_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.02%乙酸水溶液,流速为0.8 mL·min^(-1),5-LOX的主要产物LTB_4和5-HETE的检测波长分别为275nm和235nm。结果:LTB_4和5-HETE分别在2.0～50.0μg·mL^(-1)(r=0.9999)和5.0～125.0μg·mL^(-1)(r=1.0000)范围内呈良好的线性关系;回收率分别为100.0%和97.7%(RSD分别为1.1%和1.5%);日内、日间精密度的RSD分别为0.7%,1.1%和0.3%,1.3%。结论:该法分离效果和重复性均良好,且结果准确可靠,可用于LTB_4和5-HETE的检测,为筛选新的具有抗炎活性的中药成分奠定了基础。

复方银黄微型灌肠剂对腹腔巨噬细胞5-脂氧合酶产物生成的影响

目的:研究复方银黄微型灌肠剂(Yinhuang Micro-enema Compound,YHMCE)对5-脂氧合酶(5-LOX)产物生成的影响,以阐明其抗炎作用的分子机制。方法:体外培养大鼠腹腔巨噬细胞(Peritoneal macrophage,PM),采用高效液相色谱法测定白三烯B4(LTB4)和5-羟二十碳四烯酸(5-HETE)含量变化,以反映5-LOX活性变化。结果:在生药浓度2.24～8.96g/L的范围内,YHMCE呈剂量依赖方式抑制大鼠PM LTB4、5-HETE的生物合成,其IC50分别为含生药2.41g/L与8.43g/L。结论:YHMCE通过抑制5-LOX活性,减少LTB4及5-HETE的产生,可能是其发挥抗炎作用的分子作用机制之一。

麝香的药理研究 Ⅳ.麝香对大鼠炎性渗出液中白细胞花生四烯酸代谢的影响

本实验从花生四烯酸(AA)代谢途径探讨麝香抗炎作用机理,用14_C标记花生四烯酸(14_C-AA)标记白细胞,观察麝香对大鼠角叉菜胶炎性渗出液中白细胞内AA释放及其代谢酶产物——白三烯B_4(LTB_4)和5-羟基廿碳四烯酸(5-HETE)生成的影响。实验表明,麝香水提物(MWF)浓度为6.25～37.5μg/ml时,抑制AA释放,释放量比对照组减少50～70％,但不抑制LTB_4和5-HETE的生成;MWF浓度加大至80μg/ml时,AA释放增加至对照组的1.5倍,但LTB_4和5-HETE生物合成却分别抑制了66.7％和90％。提示MWF具有抑制磷脂酶A_2(PLA_2)活性的作用,大剂量时又进一步阻断了AA代谢酶,如5-脂氧酶(5-LO),从而抑制了AA的过氧化,减少炎症介质,如LTB_4、5-HETE等的生成。