三种针法对对氯苯丙氨酸诱导失眠大鼠海马5-HT_(1A)、5-HT_(2A)基因表达影响研究

目的:观察针刺失眠方、脐内环穴,失眠方和脐内环穴联合应用对对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine,PCPA)失眠大鼠海马5-HT_(1A)、5-HT_(2A)总RNA表达的影响,并对三种针法的效果进行比较研究。方法:随机抽取6只正常大鼠作为正常组,将30只PCPA失眠大鼠随机分为模型组、针刺失眠方组、脐内环针组、失眠方加脐内环针组、非穴组5组,每组6只。正常组、模型组无特殊处理,干预组分别给予针刺失眠方、针刺脐内环穴、针刺失眠方和脐内环穴联合干预,非穴组予针刺非穴处理,治疗6 d后取大鼠海马组织,采用real-time PCR方法检测5-HT_(1A)、5-HT_(2A)的基因表达。结果:PCPA失眠大鼠海马5-HT_(1A)基因表达下降,而5-HT_(2A)基因表达上调;三种针法均显著上调PCPA失眠大鼠海马5-HT_(1A)的基因表达、下调5-HT_(2A)的基因表达;而失眠方和脐内环穴联合应用的效果优于失眠方或者脐内环穴单用。结论:PCPA失眠大鼠可能存在中枢5-HT受体信号机制异常,三种针法可能通过调节海马内5-HT_(1A)、5-HT_(2A)基因表达而改善失眠;实验支持失眠方和脐内环穴针刺联合应用为失眠症的优选干预方法。

慢性应激抑郁模型大鼠脑内5HT_(1A)和5-HT_(2A)受体的变化

为了在 5 羟色胺受体水平研究抑郁症的机制和三环类抗抑郁药物 (TCAs)阿米替林的药理学机理 ,将 2 4只SD雄性大鼠随机均分为三组 ,即对照组、抑郁组、阿米替林治疗组。应用 [3H]8 OH DPAT、[3H]Ketanserin作为标记配基 ,采用放射性配体受体结合法 ,分别测定大鼠海马 5 HT1A受体、大脑皮层 5 HT2A 受体结合。结果显示 :抑郁大鼠海马 [3H]8 OH DPAT特异性结合 (1 8 78± 5 6 2fmol mgprot) ,较正常对照组 (2 6 1 2± 5 5 2fmol mgprot )明显下降(P <0 0 5 )。抑郁大鼠大脑皮层 [3H]Ketanserin特异性结合 (1 1 2 5 8± 4 2 1fmol mgprot) ,较正常对照组 (86 2 8±4 2 4fmol mgprot)明显增加 (P <0 0 5 )。阿米替林治疗 3周后 ,可使抑郁大鼠海马 5 HT1A 受体与大脑皮层 5 HT2A 受体结合恢复正常。提示 :海马 5 HT1A受体结合下降、大脑皮层 5 HT2A 受体结合增加可能与抑郁症病因有关 ;海马 5 HT1A 受体、大脑皮层 5 HT2A 受体是阿米替林发挥抗抑郁作用的环节。

3种针法对PCPA诱导的失眠大鼠海马5-HT_(1A)、5-HT_(2A)蛋白表达的影响

目的观察针刺失眠方、脐内环穴及失眠方加脐内环穴对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠海马5-HT_(1A)、5-HT_(2A)蛋白表达的影响。方法将造模成功的30只PCPA失眠大鼠随机分为5组(每组6只):模型组、针刺失眠方组、针刺脐内环穴组、针刺失眠方加脐内环穴组、针刺非穴组;另设正常组(6只)。治疗6d后取大鼠海马匀浆,采用免疫印迹法检测5-HT_(1A)、5-HT_(2A)蛋白含量。结果 PCPA模型大鼠海马5-HT_(1A)蛋白表达下降,而5-HT_(2A)蛋白表达上调;3种针法均显著上调PCPA失眠大鼠海马5-HT_(1A)蛋白表达、下调5-HT_(2A)蛋白表达;而失眠方加脐内环穴针刺作用更明显,优于单一针刺方法。结论 PCPA失眠大鼠存在中枢5-HT受体信号机制异常,3种针法可能通过调节海马内5-HT_(1A)、5-HT_(2A)蛋白表达而改善失眠;实验支持失眠方加脐内环穴针刺为失眠症的优选干预方法。

黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠大脑皮层5-HT_(1A) R-β-arrestin2-akt信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 60只SD大鼠随机均分为正常组、模型组、SRP(400、200、100 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用7种不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化;免疫组化法测定大脑皮层区5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)的表达;Western blot法分析大脑皮层区5-HT1AR、β-arrestin2、akt蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠体重降低、自主活动次数减少,处于抑郁状态。免疫组化法及Western blot法结果显示,与正常组相比,模型组大脑皮层5-HT1AR表达降低,β-arrestin2、akt表达升高(P<0.05),而SRP组可以逆转这种现象(P<0.05,P<0.01)。结论中药SRP的抗抑郁作用可能与调节5-HT1AR/β-arrestin2/akt信号通路有关。

从5-HT1A、5-HT2A后信号通路探讨针刺治疗PCPA失眠机制

为探明针刺5-HT1A、5-HT2A后信号通路的影响,以及其与改善PCPA失眠中枢5-HT障碍机制的关系,将48只PCPA失眠大鼠随机均分为3组,并与16只正常鼠对照。正常组、模型组无特殊处理,针刺组予针刺脐内环合失眠穴方干预,非穴组针刺非穴处理,治疗6天后,处死动物、分离海马并匀浆,拟ELISA检测5-HT、PLCβ和cAMP含量,WB检测Gαi/o、Gαq/11表达,统计学分析5-HT与cAMP、PLCβ相关性。结果PCPA失眠大鼠海马5-HT、cAMP明显降低,PLCβ明显升高,针刺组5-HT、cAMP含量显著升高,PLCβ含量显著降低;各组内5-HT与cAMP呈正相关性、与PLCβ呈负相关性;模型组Gαq/11显著下降,针刺显示显著上调作用,各组间Gαi/o表达比较无统计意义;实验提示该针法能良性调控5-HT1A/Gαi/o/cAMP、5-HT2A/Gαq/11/PLCβ信号通路起改善PCPA失眠作用,该作用与改善中枢5-HT障碍机制有一定的相关性。

按经选穴针刺对失眠大鼠下丘脑5-HT 1a、5-HT 2a受体mRNA表达的影响

目的:观察按经选穴针刺对失眠大鼠下丘脑5-HT 1a、5-HT 2a受体mRNA表达的影响,探讨针刺治疗失眠症的疗效机制及按经选穴针刺对腧穴配伍效应的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为5组,即:空白组、模型组、百会+神门穴组、百会+三阴交穴组、百会+非经非穴组,每组12只,通过腹腔注射DL-4-氯苯基丙氨酸混悬液建立失眠模型大鼠,各治疗组针刺相应腧穴,每次30min,治疗7d。运用实时荧光定量方法检测大鼠下丘脑5-HT1a、5-HT 2a受体mRNA表达量。结果:与模型组比较,各针刺组大鼠下丘脑5-HT 1a受体mRNA表达量均有一定程度的升高,5-HT 2a受体mRNA表达量均有一定程度的降低,且以百会+神门穴组调节效果最明显,百会+三阴交穴组及百会+非经非穴组次之。结论:针刺治疗可能通过调节失眠大鼠下丘脑5-HT 1a、5-HT 2a受体mRNA的表达发挥治疗作用,且按经选穴针刺可能是影响腧穴配伍效应的影响因素之一。

睡眠剥夺后大鼠大脑5-HT1A和5-HT2A受体的表达

目的 观察大鼠睡眠剥夺后相关脑区 5 HT受体亚型的表达情况 ,探讨大鼠睡眠的 5 HT机制。方法 以大平台作为对照组 ,采用小平台水环境法对大鼠进行睡眠剥夺 ,根据 5 HT1A和 5 HT2A受体互补DNA序列合成相应的特异性引物 ,用PCR法观察大鼠睡眠剥夺后海马、下丘脑和中脑 5 HT1A和 5 HT2A受体表达。结果 大鼠睡眠剥夺后海马和中脑 5 HT1A受体表达增强 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,下丘脑无明显变化。实验组和对照组各脑区 5 HT2A受体无明显变化。结论 5

莉芙敏对去卵巢大鼠下丘脑视前区5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响

目的:观察去卵巢大鼠应用黑升麻异丙醇提取物——莉芙敏(ICR)治疗1～4周后,免疫组化方法检测5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)和5-HT2AR在大鼠下丘脑视前区表达的变化情况,为莉芙敏缓解围绝经期潮热症状的机制研究提供形态学依据。方法:雌性大鼠分为假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)、OVX后戊酸雌二醇治疗(OVX+E2)组和OVX后ICR治疗(OVX+ICR)组,每组40只。所有大鼠术后恢复2周后,再用相应的药物分别治疗1,2,3,4周,麻醉,心脏灌注,取脑,制作冰冻切片。免疫组化法观察各组大鼠下丘脑视前区5-HT1AR和5-HT2AR的表达。结果:①OVX组1～4周时大鼠下丘脑视前区5-HT1AR阳性细胞数量和吸光度均较同期Sham组增加;ICR和戊酸E2治疗1～4周后,OVX+E2组和OVX+ICR组大鼠下丘脑视前区室周带表达5-HT1AR的阳性细胞数量和吸光度均较同期OVX组减少。②下丘脑视前区中间带和外侧区5-HT2AR阳性细胞数量和吸光度的变化:OVX组大鼠,1～4周均较同期Sham组增加;ICR和戊酸E2治疗1周和2周后,OVX+E组和OVX+ICR组较同期OVX组增加;治疗3周和4周后,OVX+E2组和OVX+ICR组均较同期OVX组减少。结论:5-HT1AR和5-HT2AR在去卵巢大鼠下丘脑视前区的表达量均增加;ICR和戊酸E2治疗后,5-HT1AR在大鼠下丘脑视前区的表达量减少,而5-HT2AR在下丘脑视前区的表达先增多后减少。ICR可能通过调节下丘脑视前区体温调节中枢的5-HT1AR和5-HT2AR的表达,以缓解围绝经期的潮热症状。

束缚应激对大鼠主动脉5-HT_(1D)和5-HT_(2A)受体表达的影响及通心络、薤白提取物的干预作用

目的观察束缚应激对大鼠主动脉5-HT1D和5-HT2A受体表达的影响及通心络和薤白提取物的干预作用。方法健康W istar大鼠60只,随机分为对照组、束缚应激组、薤白组、通心络组。观察大鼠一般状况、主动脉内皮细胞形态和结构,检测血中ET-1和NO水平,采用Real Time PCR和Western印迹检测主动脉5-HT1D和5-HT2A受体基因和蛋白表达。结果束缚应激所致抑郁状态可导致血管内皮结构和分泌功能损伤,同时5-HT1D mRNA和蛋白表达降低,5-HT2A mRNA和蛋白表达升高;通心络和薤白提取物可有效保护血管结构和功能,调节主动脉5-HT1D和5-HT2A受体基因和蛋白表达。结论通心络和薤白提取物可通过增强介导舒血管作用的5-HT1D mRNA和蛋白表达,抑制介导缩血管作用的5-HT2A mRNA和蛋白表达,从而对抑郁状态大鼠血管内皮功能发挥保护作用。

CODEHOP法设计引物克隆中华绒螯蟹5-ht_1和5-ht_2受体基因片段及序列分析

根据已报道的中华绒螯蟹近缘物种的5-ht1r和5-ht2r氨基酸序列保守区,利用CODEHOP设计了两对简并引物,采用RT-PCR法扩增得到了中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r部分片段并克隆到p MD-19T载体。测序结果表明扩增到的中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r片段长分别为366 bp和177 bp,编码121和58个氨基酸。经BLASTp分析显示,中华绒螯蟹5-ht1r与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的5-ht1r同源性高达98%,而中华绒螯蟹5-HT2R与断沟龙虾(Panulirus interruptus)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii)5-ht2r同源性高达95%。

约束应激对大鼠5-HT_(1A)和5-HT_(2A)受体表达的影响

Objective:To explore the 5-HT mechanism of stress . Methods:The method of polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the presence of 5-HT receptor subtypes in the hippocampus,hypothalamic and midbrain of the rat after 30days of movement restrict compared with normal cage control groups (CC) . The specific oligonucleotide primers were synthesized based on the complementary DNA sequence for each of the rat 5-HT 1A and 5-HT 2A receptor subtypes . Results : The expression of 5-HT 1A receptor subtypes in each regions of the rat brain after movement restrict were signifcantly lower than that of the CC groups, and the expression of 5-HT 2A receptor subtype were signifcantly higher( P <0.01-0.05).Conclusions : 5-HT 1A and 5-HT 2A receptors may be invovled in the stress of the rat and may have opposite effects with respect to certain functions.

地黄饮子对卒中后抑郁大鼠海马5-HT_(1A)R与5-HT_(2A)R mRNA水平表达的影响

目的:通过观察地黄饮子对PSD大鼠5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)与5-羟色胺2A受体(5-HT2 AR)mRNA水平表达的影响,进一步探讨地黄饮子治疗脑卒中后抑郁的可能作用机理。方法:在脑卒中后抑郁大鼠模型上,采用实时荧光定量RT-PCR方法,对PSD大鼠5-HT1AR与5-HT2 AR mRNA水平进行观察。结果:地黄饮子高、中剂量和百优解均能明显提高PSD大鼠海马5-HT1AR mRNA表达水平、降低5-HT2 AR mRNA表达水平(P<0.05);地黄饮子高、中剂量与百优解无显著差异(P>0.05);地黄饮子低剂量作用不明显。结论:地黄饮子可能是通过上调5-HT1AR mRNA、下调5-HT2 ARmRNA在海马区的表达,达到治疗PSD的目的。

脑5-HT_(1A/1B)、α_2受体及腺苷酸环化酶参与了胍丁胺的抗抑郁作用

为了在单胺受体及受体后腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）水平探讨胍丁胺（agmatine,AGM）抗抑郁作用的精细机制,采用小鼠悬尾实验和强迫游泳实验观察AGM抗抑郁行为改变。采用放射免疫方法测定大鼠前额皮层突触膜蛋白AC活性。结果表明,AGM（5~40 mg.kg-1,ig）在小鼠悬尾实验和强迫游泳实验模型上均有显著抗抑郁活性。同时伍用β受体/5-HT1A/1B受体阻断剂吲哚洛尔（pindolol,PIN,20 mg.kg-1,ip）、α2肾上腺素受体拮抗剂育亨宾（yohimbine,YOH,5~10 mg.kg-1,ip）或咪唑克生（idazoxan,IDA,4 mg.kg-1,ip）对AGM（40mg.kg-1,ig）的抗抑郁活性具有显著拮抗效应;而β受体阻断剂普萘洛尔（propranolol,PRO,5~20 mg.kg-1,ip）或5-HT3受体拮抗剂曲匹西隆（tropisetron,TRO,5~40 mg.kg-1,ip）对AGM（40 mg.kg-1,ig）的抗抑郁活性无显著影响。AGM（0.1~6.4μmol.L-1）与大鼠前额皮层提取的突触膜共孵可剂量依赖地激活AC活性,而PIN（1μmol.L-1）或YOH（0.25~1μmol.L-1）均显著拮抗AGM（6.4μmol.L-1）对AC的激活作用;慢性给予大鼠AGM（10 mg.kg-1,ig,bid）或氟西汀（fluoxetine,FLU,10 mg.kg-1,ig,bid）2 w也显著增强大鼠前额皮层基础及Gpp（NH）p预激活的AC活性。本研究表明,调节脑内5-HT1A/1B和α2等受体功能,并激活前额皮层AC可能是AGM抗抑郁活性的重要机制之一。

背侧海马CA_1区5-HT_(2A)受体超微分布以及对神经元电活动影响

目的探讨背侧海马CA1(dCA1)区5-HT2A受体的亚细胞定位及与谷氨酸NMDA受体空间关系,观测系统性激活5-HT2A受体对dCA1区主神经元和中间神经元放电频率的影响。方法采用包埋后免疫电镜技术,观测dCA1区神经元内5-HT2A受体和NMDA受体的分布,采用多通道记录技术,记录腹腔注射TCB-2激活5-HT2A受体后主神经元和中间神经元放电频率的变化。结果 5-HT2A受体在海马dCA1区神经元的粗面内质网、线粒体等处广泛分布,并在突触、突触小泡和神经丝等处与NMDA受体共区域表达;激活5-HT2A受体可致dCA1区主神经元的放电频率明显升高,而对中间神经元的放电频率无明显影响。结论 dCA1区5-HT2A受体可能通过与NMDA受体的协同作用,以增加谷氨酸能神经元的兴奋性,从而达到促进学习和记忆的作用。

抗抑郁剂对慢性应激抑郁大鼠脑内5-HT_(1A)受体和5-HT_(2A)受体的影响

目的 以慢性不可预见性应激抑郁模型为基础,探讨三环类抗抑郁剂 (TCAs)和 5 羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)在 5 羟色胺受体水平的药理学机理。方法 将 24只SD雄性大鼠随机分对照组、抑郁模型组、阿米替林治疗组、氟西汀治疗组。应用 [3H]8 OH DPAT、[3H]Ketanserin作为标记配基,采用放射性配体受体结合法,分别测定大鼠海马 5 HT1A受体、大脑皮层 5 HT2A受体的特异性结合。结果 与正常对照组比较,抑郁大鼠海马 [3H] 8 OH DPAT特异性结合明显下降 ( 18. 78±5. 62vs26. 12±5. 52, P<0. 05),抑郁大鼠大脑皮层[3H]Ketanserin特异性结合显著增加(86. 28±4. 24vs112. 58±4. 21,P<0. 05)。阿米替林治疗 3周后,抑郁大鼠海马 [3H] 8 OH DPAT特异性结合回升到正常水平,大脑皮层 [3H]Ketan serin特异性结合下降至正常水平(P<0. 05)。氟西汀治疗 3周后,抑郁大鼠海马 [3H]8 OH DPAT特异性结合(26. 63±5. 50)、大脑皮层[3H]Ketanserin特异性结合 (83. 16±2. 54)与抑郁组比较差异无显著性 (P>0. 05)。结论 1.阿米替林通过增强海马 5 HT1A受体功能、抑制大脑皮层 5 HT2A受体功能发挥抗抑郁作用。2.氟西汀可能不通过影响海马 5 HT1A受体和大脑皮层 5 HT2A受体功能发挥抗抑郁作用。

一种潜在5-HT_(1A)脑受体显像剂^(99)Tc^m-Bicine/HYNIC-MPP2的制备及其生物性能

优化合成了含有1-(2-甲氧基苯基)哌嗪(MPP)结构的配体2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基)乙胺-6-叔丁基氧羰基肼基吡啶-3-甲酸(HYNIC-MPP2)。在室温下以N,N-二(2-羟基乙基)氨基乙酸(Bicine)为共配体制备得到配合物99Tcm-Bicine/HYNIC-MPP2,其放射化学纯度大于95%,并且在6 h内保持稳定。脂水分配系数和电泳实验结果表明,该放射性标记配合物是水溶性和电中性的。正常小鼠体内生物分布实验结果表明,99Tcm-Bicine/HYNIC-MPP2有一定的脑摄取(注射后2 min时为0.31%ID/g)。脑区域分布及抑制实验显示,该配合物在5-HT1A受体含量丰富的海马组织有较高摄取(注射后2 min时为1.00%ID/g),而在受体含量低的小脑组织中摄取也低(注射后2 min时为0.63%ID/g)。抑制后,海马摄取降低较多(注射后2 min时为0.42%ID/g),而小脑摄取则无明显变化。抑制前后海马/小脑比值分别为1.59和0.89。由此可见该标记配合物与5-HT1A受体具有一定特异性结合,是一种新的潜在5-HT1A受体显像剂。

跑台运动对攻击行为大鼠内侧下丘脑和中脑导水管周围灰质5-HT1A受体、5-HT2A受体蛋白表达的影响

目的:探讨跑台运动对攻击行为大鼠内侧下丘脑(MH)和中脑导水管周围灰质(PAG)5-HT1A受体、5-HT2A受体蛋白表达的影响,为研究运动对攻击行为改善的神经生物学机制提供实验基础。方法:3月龄雄性SD大鼠40只,体重160~180 g,随机分为4组:安静组(A)、攻击模型组(G)、攻击跑台组(GP)、入侵组(R)。A组和R组分别群居饲养,其中R组在建造攻击模型时作为外来入侵鼠,从开始造模到实验结束,入侵G组和GP组诱导攻击行为发生,在结果中不作处理。G组和GP组单笼饲养一周后,采用单笼喂养+入侵鼠入侵建造攻击模型,大鼠攻击模型建立后,GP组进行跑台训练干预8周,每周5 d,每天30 min,17:00~20:00进行训练,训练负荷按照适应性低强度(15 m/min×10 min)→大强度(20 m/min×10 min)→恢复性低强度(15 m/min×10 min)这三个阶段连续完成,训练中的大强度每两周增加一次,每次增加5 m/min,直到强度达到30 m/min不再增加。免疫组化检测MH和PAG中5-HT1A受体、5-HT2A受体蛋白表达的变化。结果:与A组相比,G组MH和PAG中5-HT1A受体蛋白表达均明显降低(P<0.05),5-HT2A受体蛋白表达在MH和PAG中均明显增加(P<0.05)。与G组相比,GP组MH中5-HT1A受体蛋白表达明显增加(P<0.05),PAG中5-HT1A受体蛋白表达差异无显著性(P>0.05),5-HT2A受体蛋白表达在MH和PAG中均明显降低(P<0.05)。结论:跑台运动使攻击行为大鼠MH中5-HT1A受体蛋白表达增高,MH和PAG中5-HT2A受体蛋白表达降低。

多巴胺D2受体和5-HT1B受体在RLS大鼠模型PAG中的共定位

目的探索多巴胺D2受体与5HT1B受体是否共同参与不安腿综合征(RLS)的调控.方法建立RLS大鼠模型,取脑组织对中脑导水管周围灰质(PAG)部位进行切片,用免疫荧光双染检测多巴胺D2受体、5-HT1B受体.结果荧光染色显示多巴胺D2受体、5-HT1B受体共存于PAG同一细胞上.结论 PAG共同表达多巴胺D2受体与5HT1B受体,两种受体可能共同参与了RLS的调控.

芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT_(1,2)受体的结合实验

目的:研究芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT1和5-HT2受体体外是否有结合作用。方法:5-HT1受体取材于大鼠大脑皮质,5-HT2受体取材于大鼠海马。采用受体-配体结合测定法测定10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2对5-HT1,5-HT2受体的最大结合率、半数抑制浓度(IC50)和Hill系数。结果:10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2与5-HT1受体的最大结合率分别为75％和63％。SCP-1和SCP-2与5-HT1受体结合的IC50分别为1．584和5．495μmol·L-1,二者与5-HT1受体结合的Hill系数分别为0．98和1．02。10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2与5-HT2受体的最大结合率分别为92％和87％。SCP-1和SCP-2与5-HT2受体结合的IC50分别为1．0和2．512μmol·L-1,二者与5-HT2受体结合的Hill系数分别为0．86和0．88。结论:SCP-1和SCP-2与5-HT1受体的结合方式是与单一受体位点结合,并且这种结合服从质量作用定律(Hill系数接近于1)。SCP-1和SCP-2与5-HT2受体呈现不规则性结合,也可能有负相互作用或多种结合位点(Hill系数偏离1)。