黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠海马5-HT1AR/cAMP/PKA信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 SD大鼠60只随机分为6组:正常组、模型组、SRP(100、200、400 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化,放射免疫法测定海马环腺苷酸(cAMP)含量,免疫组化法测定海马5-羟色胺受体(5-HT1AR)、蛋白激酶A(PKA)、反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠自主活动次数减少,体重降低,糖水消耗减少,处于抑郁状态。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组海马5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著降低,SRP组5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著上调(P<0.01)。结论 SRP对慢性应激抑郁大鼠的行为学有改善作用,可能是通过调节5-HT1AR/cAMP/PKA/CREB信号通路发挥抗抑郁作用。

加味四逆散对青少期应激结合成年后诱导抑郁大鼠行为学、海马CA1区5-HT1AR表达的影响

目的：观察青少期应激结合成年后诱导抑郁大鼠行为学、海马CA1区5-HT_（1A）R表达的变化及加味四逆散干预作用。方法：Wistar大鼠随机分成空白组、模型组、加味四逆散组、氟西汀组4组,每组33只;组内随机再分为青少期、成年期、成年后3小组,每小组11只。选取44、56、78 d3个时间点作为青少期、成年期、成年后3个阶段的取材时间点。采取慢性不可预知应激模型,第21-44天、第57-78天造模及给药; 44~55天正常喂养不予造模及给药。观察大鼠的一般情况与旷场实验情况,采用免疫组织化学染色法观察海马CA1区5-HT1A R阳性细胞的分布变化。结果：各时期模型组大鼠一般状况较差,加味四逆散组及氟西汀组有明显改善。旷场实验活跃度上,青少期与成年后模型组显著降低（P 〈0. 05）,加味四逆散组与氟西汀组活跃程度显著升高（P 〈0. 01、P 〈0. 05）。总区路程变化结果中,成年期模型组大鼠有显著降低（P 〈0. 05）,成年期及成年后加味四逆散组有显著提升（P 〈0. 05、P 〈0. 01）;且在成年后与氟西汀组对比有显著差异（P 〈0. 01）。各组大鼠海马CA1区5-HT_（1A）R平均光密度值组内比较,青少期与成年后组模型组有显著降低（P 〈0. 05,P 〈0. 01）;组间比较,成年后模型组、氟西汀组呈显著上升（P 〈0. 01,P 〈0. 05）;加味四逆散组有上升趋势。结论：在青少期受到慢性不可预知应激的大鼠可产生抑郁样行为,成年后继续施加刺激则会进一步加重抑郁状态,海马内5-HT1AR改变可能是加味四逆散改善应激大鼠抑郁样行为的重要通路。

酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺大鼠海马5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响

目的:观察酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺大鼠海马5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组和造模组,造模组用多平台水环境法制造慢性睡眠剥夺模型,造模成功后再将造模组大鼠随机分为模型组、西药组(舒乐安定)和酸枣仁汤组。用自主活动测试仪记录大鼠自主活动时间,用免疫组化和Western blot法检测大鼠海马中5-HT1AR和5-HT2AR的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠tL、tD、tall增加,大鼠活动时间增加(P<0.01);与模型组比较,西药组大鼠tL、tall和酸枣仁汤组大鼠tL、tD、tall减少,大鼠活动时间减少。空白组大鼠海马中5-HT1AR水平较高而5-HT2AR水平较低;造模后模型组大鼠海马中5-HT1AR水平下降而5-HT2AR水平上升;给药后西药组和酸枣仁汤组大鼠海马中5-HT1AR水平上升而5-HT2AR水平下降。结论:酸枣仁汤能调节大鼠海马中5-HT1AR和5-HT2AR的表达,从而改善睡眠剥夺大鼠睡眠状态,效果与舒乐安定相当。

无忧汤对抑郁模型大鼠海马5-HT1AR和5-HT2AR表达影响的实验研究

目的通过对大鼠预见性应激大鼠抑郁模型(CUMS)的复制,观察无忧汤对抑郁模型大鼠海马CA1区5-羟色胺受体(5-HTR)的两个亚型5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响。方法随机将60只CL级SD雄性大鼠分为空白对照组,模型组,黛力新组,无忧汤低剂量组、中剂量组、高剂量组6组,每组10只。造模开始前予以适应性饲养1周,造模35 d后,给予相应药物治疗35 d,实验结束后采用HE染色法观察大鼠海马CA1区阳性细胞形态结构和细胞数量的变化;采用免疫组化法,观察无忧汤对大鼠海马CA1区5-HT1AR和5-HT2AR表达的影响。结果经过35 d造模后,药物干预组和模型组大鼠体质量增加量明显低于空白对照组(P<0.05);药物干预组和模型组大鼠的食物消耗量显著低于空白对照组(P<0.05);模型组及药物干预组糖水消耗量明显低于空白对照组(P<0.05);模型组及各给药组大鼠水平得分明显低于空白对照组(P<0.05);模型组及药物干预组大鼠垂直得分明显低于空白对照组(P<0.05)。经过35 d给药治疗后,无忧汤高剂量组与无忧汤低剂量组大鼠相比,体质量增加较明显(P<0.05);无忧汤高剂量组与无忧汤低剂量组大鼠相比,食物消耗量增加显著(P<0.05);无忧汤中、高剂量组与无忧汤低剂量组大鼠相比,糖水消耗显著增加(P<0.05);无忧汤高剂量组大鼠与无忧汤低剂量组大鼠相比较,水平得分增加明显(P<0.05);无忧汤中、高剂量组大鼠与无忧汤低剂量组大鼠相比较,垂直得分显著增加(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组大鼠海马5-HT1AR阳性表达率降低(P<0.05),5-HT2AR阳性表达率升高(P<0.05);与模型组相比较,黛力新组和无忧汤中、高剂量组大鼠海马5-HT1AR阳性表达升高(P<0.05),5-HT2AR阳性表达降低(P<0.05)。结论无忧汤抗抑郁机制可能与提高抑郁模型大鼠海马CA1区5-HT1AR并下调5-HT2AR的表达有关。

滋肾疏肝胶囊对焦虑模型大鼠海马区5-HT1AR表达的影响

目的 :通过建立焦虑大鼠模型,研究中药复方滋肾疏肝胶囊的抗焦虑作用及其机制。方法 :采用不确定性空瓶刺激法制备焦虑大鼠模型,24只大鼠随机分为4组,即空白对照组、模型组、地西泮片给药组、滋肾疏肝胶囊给药组,除空白对照组外,分别以蒸馏水、地西泮片、滋肾疏肝胶囊灌胃给药。运用RT-PCR和Western Blotting方法分别检测5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)m RNA及蛋白表达水平,单因素方差分析相关数据。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠攻击行为和修饰行为频率均显著性升高(P<0.01),高架十字迷宫实验OE%和OT%值均显著性下降(P<0.01),海马区5-HT1AR m RNA及蛋白表达均显著性降低(P<0.01)。与模型组比较,滋肾疏肝胶囊给药组大鼠攻击行为和修饰行为频率均显著性降低(P<0.01),OE%和OT%值均显著性升高(P<0.01),海马区5-HT1AR m RNA及蛋白表达均显著性升高(P<0.01)。结论:滋肾疏肝胶囊对焦虑症大鼠具有明显的治疗效果,5-HT1AR基因可能是该药物的作用靶点。

失眠穴方合脐内环穴针刺对PCPA模型大鼠海马5-HT1AR、5-HT2AR表达的影响

目的:观察针刺失眠穴方加脐内环穴对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine,PCPA)诱导下失眠大鼠治疗后海马5-HT_(1A)R、5-HT_(2A)R表达的影响,探讨针刺改善失眠症的机制。方法:取46只健康SPF级雄性SD大鼠,随机抽取10只为正常组,余36只腹腔注射PCPA造模,筛选出30只造模成功大鼠分为模型组、针刺组、非穴组,每组各10只。各组大鼠经相应干预处理6天后,采取灌注分离法取海马组织。采用免疫组化法观察各组5-HT_(1A)R、5-HT_(2A)R的形态学变化,统计5-HT_(1A)R、5-HT_(2A)R平均光密度值。结果:模型组大鼠海马5-HT_(1A)R阳性表达数目下降,5-HT_(2A)R阳性表达数目升高;与模型组比较,针刺组5-HT_(1A)R阳性表达数目增加(P<0.05),5-HT_(2A)R阳性表达数目降低(P<0.05)。与模型组比较,针刺组5-HT_(1A)R平均光密度值升高(P<0.05),5-HT_(2A)R平均光密度值降低(P<0.05)。结论:针刺失眠穴方加脐内环穴针法可良性调节PCPA模型大鼠5-HT_(1A)R、5-HT_(2A)R在海马区的表达,进而起到改善失眠的作用。

二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠行为学及5-HT1AR的调节作用探析

目的:探究藏药二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠行为和5-HT1AR的调节作用。方法:将48只大鼠随机分为假手术组、模型组、二十味沉香丸组、帕罗西汀组。每组各12只。造模后未达到观察时点死亡的大鼠排除本研究,筛选出符合条件的大鼠并通过随机抽样原则补齐动物。造模后每天分别给予相应的药物或生理盐水进行灌胃,灌胃2周后采用旷场实验检测各组剩余大鼠行为学变化。每组各取6只,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测海马组织中5-HT1AR基因和蛋白水平的变化。结果:与假手术组相比较,模型组运动总距离(P<0.01)、单次最大运动距离(P<0.05)、穿格次数(P<0.01)、直立次数(P<0.01)、直立时间(P<0.01)、修饰时间(P<0.01)、修饰次数(P<0.05)减少差异有统计学意义,5-HT1AR基因(P<0.05)及蛋白表达水平下降;与模型组相比较,二十味沉香丸组运动总距离(P<0.05)、穿格次数(P<0.05)、直立时间(P<0.05)、直立次数(P<0.01)增加差异具有统计学意义,且5-HT1AR的基因(P<0.05)及蛋白水平表达升高;与模型组相比较,帕罗西汀组穿格次数(P<0.05)、运动总距离(P<0.05)、直立时间(P<0.05)增加差异具有统计学意义,5-HT1AR的基因(P<0.01)及蛋白表达水平升高。结论:本实验成功复制了卒中后PTSD模型,所选取的中药二十味沉香丸能在一定程度上改善卒中后PTSD模型大鼠的焦虑样行为,其效用与西药帕罗西汀类似,且作用机制可能与调节5-HT1AR有关。

经前期综合征肝气郁证大鼠血清对海马神经元5-HT1AR信号转导通路的影响

目的:研究经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠血清对大鼠原代海马神经元的5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)信号转导通路相关基因5-羟色胺转运蛋白(SERT)、单胺氧化酶(MAO)-A、MAO-B表达的影响。方法:采用慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证大鼠模型;高效液相色谱(HPLC)法检测血清中5-HT的含量;运用RT-PCR半定量和Westernblot法检测正常、模型、经前舒干预大鼠的血清对海马神经元中5-HT1AR、SERT、MAO-A、MAO-B表达的影响。结果:加入模型大鼠血清的大鼠海马原代神经细胞中MAO-A表达较正常大鼠显著升高(P<0.05),5-HT1AR、SERT表达显著降低(P<0.05),MAO-B表达无显著性差异。而加入经前舒干预大鼠血清后,5-HT1AR、SERT、MAO-A表达均趋于正常。结论:PMS肝气郁证的发生与海马神经元中MAO-A、SERT、5-HT1AR表达异常相关,可能是PMS肝气郁证发病的微观机制。

地黄饮子对卒中后抑郁大鼠海马5-HT_(1A)R与5-HT_(2A)R mRNA水平表达的影响

目的:通过观察地黄饮子对PSD大鼠5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)与5-羟色胺2A受体(5-HT2 AR)mRNA水平表达的影响,进一步探讨地黄饮子治疗脑卒中后抑郁的可能作用机理。方法:在脑卒中后抑郁大鼠模型上,采用实时荧光定量RT-PCR方法,对PSD大鼠5-HT1AR与5-HT2 AR mRNA水平进行观察。结果:地黄饮子高、中剂量和百优解均能明显提高PSD大鼠海马5-HT1AR mRNA表达水平、降低5-HT2 AR mRNA表达水平(P<0.05);地黄饮子高、中剂量与百优解无显著差异(P>0.05);地黄饮子低剂量作用不明显。结论:地黄饮子可能是通过上调5-HT1AR mRNA、下调5-HT2 ARmRNA在海马区的表达,达到治疗PSD的目的。

慢性噪声暴露对大鼠行为学及海马区5-HT1A受体表达的影响

目的观察慢性噪声暴露对大鼠行为学及其海马区5-HT1A受体(5-HT1AR)表达的影响,探讨噪声暴露对精神行为的影响及听觉系统与边缘系统的关系。方法将18只健康成年大鼠随机分为对照组和噪声组,每组9只。对照组不予任何处理;噪声组于每天同一时间给予中心频率为4kHz、声强为100dB SPL的宽带白噪声持续暴露4小时,共28天。分别于实验前1天和第28天对两组大鼠行ABR检测、糖水偏爱实验、体重和摄食量的检测,于实验前1天、第14天和第28天观察大鼠的旷场行为变化,并于第28天完成ABR测试后,快速分离大鼠海马组织,采用Western-Blot和免疫组化方法检测大鼠海马区5-HT1AR的表达。结果实验前1天两组ABR反应阈、体重及摄食量、糖水偏爱及旷场行为均无差异(P>0.05);实验第28天,噪声组大鼠的ABR反应阈(69.44±4.97dB SPL)较对照组(32.22±2.48dB SPL)明显升高(P<0.05);噪声组大鼠糖水偏爱程度、体重和摄食量较对照组明显降低,差异有统计学意义(均为P<0.05);实验第14、28天噪声组的旷场行为较对照组明显减少(均为P<0.05);噪声组大鼠海马5-HT1AR的表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论慢性噪声暴露会导致大鼠海马区5-HT1AR表达下降,出现抑郁样行为学表现,提示了听觉系统与边缘系统的相关性。

经前舒颗粒对海马神经元5-HT_(1A)受体蛋白和mRNA表达水平的影响

目的:观察经前舒颗粒含药血清对体外培养的新生大鼠原代海马神经元细胞活力及其5-HT1A受体基因表达水平的影响。方法:采用束缚法制备经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠模型,以调肝方药经前舒颗粒进行药物干预,制备大鼠含药血清、体外培养新生大鼠原代海马神经元细胞,MTT法测定神经元细胞活力;用蛋白质印迹技术检测神经元中5-HT1A受体蛋白水平表达量,半定量RT-PCR技术检测细胞5-HT1A受体mRNA的表达。结果:与正常组相比,经前舒颗粒含药血清能够显著提高体外培养的新生大鼠海马神经元细胞活力(P<0.05),显著提高异常降低的5-HT1A受体蛋白和mRNA的表达水平(P<0.05)。结论:PMS肝气郁证模型大鼠血清下调海马神经元细胞5-HT1A受体蛋白和mRNA表达水平,经前舒颗粒可能通过提高海马神经元细胞活力并上调其5-HT1A受体蛋白和mRNA表达水平发挥疗效。

PMS肝气逆证模型大鼠中枢5-HT_(1A)R结合活性分析及其药物干预

目的:检测PMS肝气逆证模型大鼠大脑皮层和海马5-HT1AR(5-羟色胺1A受体)结合活性的变化,探讨中药经前平颗粒治疗PMS肝气逆证的作用机制。方法:电刺激复制PMS肝气逆证大鼠模型。放射性配体受体结合实验测定大鼠皮层和海马5-HT1AR结合活性变化。结果:与正常组比较,肝气逆证造模组大鼠大脑皮层5-HT1AR结合活性显著上调(P<0.01),海马5-HT1AR结合活性上调但不显著(P>0.05),经前平颗粒可显著下调肝气逆证模型大鼠上述脑组织内5-HT1AR结合活性。结论:PMS肝气逆证模型大鼠的大脑皮层和海马5-HT1AR结合活性上调。中药经前平颗粒可能通过调节5-HT1AR结合活性发挥治疗PMS肝气逆证的作用。

5-羟色胺1A受体基因C(-1019)G(rs6295)单核苷酸多态性与中国汉族人群焦虑障碍的关联分析

目的探究5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)基因C(-1019)G(rs6295)单核苷酸多态性(SNP)是否与中国汉族人群焦虑障碍[广泛焦虑障碍(GAD)和惊恐障碍(PD)]相关。方法采用连接酶反应技术(LDR)检测5-HT1AR基因C(-1019)G(rs6295)SNP在319例焦虑障碍患者(210例GAD患者和109例PD患者)及300例健康者(对照组)中的分布,根据精神障碍诊断与统计手册(DSM-IV)诊断系统诊断GAD和PD。另外,比较5-HT1AR基因C(-1019)G(rs6295)SNP在GAD+PD组、对照组之间的性别差异。结果 GAD+PD组与对照组5-HT1AR基因C(-1019)G(rs6295)SNP的基因型和等位基因频度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论由于缺少相关联的证据,5-HT1AR基因C(-1019)G(rs6295)可能不是汉族人群焦虑障碍有标志性意义的位点。

逍遥解郁方对卒中后抑郁大鼠5-HT含量及其受体表达影响的研究

目的:探讨逍遥解郁方对卒中后抑郁大鼠5-羟色胺(5-HT)及其受体表达水平的影响和作用机制。方法:SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、氟西汀组、中药低、高剂量组,每组10只。首先采用大脑中动脉结扎(MCAO)术建立卒中模型,在此基础上采用慢性温和不可预知应激(CMUS)结合孤养建立抑郁模型。卒中后抑郁模型建立后,药物连续灌胃28 d后检测各组大鼠血清中5-HT及其脑组织中受体表达。结果:与空白组比较,各组大鼠血清5-HT含量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,各组大鼠血清5-HT浓度明显增加伴海马5-HT_(1A)R表达增加(P<0.05),中药低剂量组5-HT_(2A)R表达无统计学差异(P>0.05),但中药高剂量组和氟西汀组5-HT_(2A)R表达明显减少(P<0.05);与中药低剂量组比较,中药高剂量组和氟西汀组5-HT_(2A)R表达亦明显减少(P<0.01),且两组间比较有统计学差异。结论:逍遥解郁方可显著增加PSD大鼠5-HT含量,其作用机制可能是通过上调5-HT_(1A)RmRNA,下调5-HT_(2A)R mRNA表达来实现的。

白香丹胶囊对体外培养大鼠皮层神经元5-羟色胺1A受体表达的影响

目的:研究调肝方药白香丹对体外培养的胚胎大鼠皮层神经元细胞活力及其5羟色胺1A受体(5-HT1AR)蛋白表达水平的影响。方法:制备白香丹大鼠含药血清,体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元细胞,MTT法测定神经元细胞活力;免疫荧光标记+激光共聚焦检测法测定神经元中5-HT1AR蛋白水平表达量及定位分布。结果:白香丹含药血清能够显著提高体外培养的胚胎大鼠皮层神经元细胞活力,上调其5-HT1AR蛋白表达水平。结论:大鼠脑皮层神经元中5-HT1AR是调肝方药白香丹的作用靶位之一,白香丹可能通过提高神经元细胞活力并上调其5-HT1AR蛋白表达水平发挥疗效。

针刺对卒中后抑郁大鼠5-HTT、5-HT_(1A)R、NEα_2R蛋白表达的影响

目的观察针刺干预卒中后抑郁(PSD)大鼠神经递质及受体的调节和影响,从分子生物水平,阐述针刺干预卒中后抑郁的分子机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、针刺组,其中空白组10只,模型组30只,药物组和针刺组各40只,采用大脑中动脉闭塞和慢性不可预见性温和性应激法复合制备卒中后抑郁模型。药物组予以氟西汀2 mg/kg溶入生理盐水灌胃,针刺组选取百会、风府、神门、太冲穴20 min,期间行针1次,以上治疗每日1次,共27d,每7 d之间休息1 d,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测卒中后抑郁大鼠海马、中缝核、蓝斑核去甲肾上腺素α2受体(NEα_2R)、5-羟色胺1A受体(5-HT_(1A)R)和5-羟色胺转运体(5-HTT)蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组海马、中缝核、蓝斑核5-HTT蛋白表达非常显著减少(P<0.01),NEα_2R蛋白表达非常显著增加(P<0.01);海马、中缝核中5-HT_(1A)R蛋白表达非常显著增加(P<0.01),蓝斑核5-HT_(1A)R蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,针刺组与药物组海马、中缝核、蓝斑核5-HTT蛋白表达显著增加(P<0.01),NEα_2R蛋白表达非常显著减少(P<0.01);海马中5-HT_(1A)R蛋白表达非常显著减少(P<0.01),中缝核、蓝斑核5-HT_(1A)R蛋白表达显著减少(P<0.05)。与药物组比较,针刺组海马、中缝核以及蓝斑核5-HTT蛋白、5-HT_(1A)R蛋白、NEα_2R蛋白表达无显著增加(P﹥0.05)。结论针刺能降低PSD大鼠脑内单胺神经递质5-HT_(1A)R和NEα_2R的表达量,提高5-HTT的含量,进一步提示针刺能调节大鼠脑内单胺类神经递质5-HT和去甲肾上腺(NE)的含量或转运率。从而发挥针刺抗抑郁作用。

5-HT_(1A)受体细胞膜色谱模型的构建

目的:构建5-羟色胺1A(5-HT_(1A))受体细胞膜色谱模型并对其药物筛选能力进行考察。方法:用体外培养的T淋巴细胞,以硅胶为载体制备5-HT_(1A)受体细胞膜固定相,构建5-HT_(1A)受体细胞膜色谱模型,以5-羟色胺(5-HT)、丁螺环酮和8-羟基-丙胺-四氢萘(8-OH-DPAT)3种5-HT_(1A)受体激动剂验证该色谱模型的有效性,并以分别含有上述3种激动剂的枸杞提取液考察该模型的药物筛选能力。结果:3种激动剂在硅胶柱与细胞膜色谱模型上的色谱行为存在显著差异,利用制备的细胞膜色谱模型可以快速准确地将每种激动剂从混合溶液中筛选出来。结论:5-HT_(1A)受体细胞膜色谱模型建立成功,且具备较强的药物筛选能力,可用于特异性地筛选具有5-HT_(1A)受体结合能力的药物。

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠海马和下丘脑5-HT_(1A)受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠海马下丘脑5-羟色胺1A受体(serotonin receptor-1A,5-HT1AR)表达水平的影响。方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验评价模型,RT-PCR和Western blot方法分别检测大鼠海马和下丘脑5-HT1A R的mRNA及蛋白的表达。结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,海马、下丘脑5-HT1AR mRNA和蛋白表达均显著升高。结论:经前舒颗粒可上调海马和下丘脑中5-HT1AR的表达,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一。