胃痛消痞方对肝郁脾虚型功能性消化不良大鼠胃肠动力及5-HT3aR表达影响的实验研究

目的探讨胃痛消痞方对肝郁脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃肠动力及5-羟色胺受体(5-HT3aR)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法选用改良郭氏夹尾刺激法联合张氏不规则喂食法复制FD大鼠模型,阳性对照药选用莫沙必利片,中药干预以胃痛消痞方灌胃治疗。实验结束后,观察各组大鼠的一般状态,记录胃内残留率及小肠推进率,WB法观察胃窦及下丘脑组织中5-HT3aR蛋白的变化。结果造模组大鼠一般状态差,胃内残留率增加,小肠推进率降低,胃窦及下丘脑组织中5-HT3aR蛋白表达降低(P<0.05);胃痛消痞方组及西药组大鼠一般状态明显改善,胃内残留率降低,小肠推进率明显升高,胃窦及下丘脑组织中5-HT3aR蛋白表达升高(P<0.05)。结论胃痛消痞方能促进FD大鼠胃肠动力,上调5-HT3aR蛋白表达,可能是其治疗FD的作用机制之一。

白芍提取物对经前期综合征肝气郁证模型大鼠额叶5-HT_(3A/3B)R分布与蛋白表达的影响

目的:本研究就5-羟色胺3受体(5-HT3R)水平探讨白芍提取物(Radix Paeoniae Alba Extract,RPAE)干预经前期综合征(Premenstrual Syndrome,PMS)肝气郁证抑郁情绪的分子作用机制。方法:复制PMS肝气郁证大鼠模型,用白芍提取物进行药物干预,采用免疫荧光技术和蛋白印迹技术(western blot)分别检测5-HT3AR和5-HT_(3B)R在大鼠脑内的分布和蛋白表达情况。结果 :5-HT_(3A)R和5-HT_(3B)R在各组大鼠额叶均有阳性表达;与正常组大鼠相比,模型组大鼠额叶5-HT3AR、5-HT_(3B)R蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组大鼠相比,白芍提取物组大鼠额叶5-HT_(3A)R蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论:白芍提取物能够调控PMS抑郁症大鼠额叶5-HT_(3A) R和5-HT_(3B)R蛋白表达,这可能是其干预PMS肝气郁证抑郁情绪的作用机制之一。

基于5-HT探讨电针刺激天枢、足三里对IBS-D大鼠的影响

目的观察电针刺激天枢、足三里对腹泻型肠易激综合征(diarrheal irritable bowel syndrome,IBS-D)模型大鼠血清5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量及对结肠5-羟色胺受体3A型(5-hydroxytryptamine 3A receptor,5-HT3AR)蛋白表达量的影响,探讨“同经异腑合募配穴”指导下,电针刺激天枢、足三里治疗IBS-D大鼠的作用机制,为电针的临床应用提供实验依据。方法将24只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、阿洛司琼组及电针组,每组6只。除空白组外,其余3组大鼠采用慢性束缚、避水应激及灌服番泻叶煎剂相结合的方法建立IBS-D大鼠模型。造模成功后,对电针组予以电针刺激双侧天枢、足三里,15 min/次;空白组、模型组和电针组均给予1 mL/100 g体质量生理盐水灌胃;阿洛司琼组给予1 mg/mL浓度的阿洛司琼溶液按1 mL/100 g体质量灌胃;4组均治疗1次/d,连续治疗14 d。观察大鼠一般情况;通过腹壁回撤反射(abdominal wall retraction reflex,AWR)实验进行内脏敏感性评估;记录大鼠体质量增长率的变化;计算大鼠粪便含水量;HE染色观察结肠组织形态;ELISA法检测血浆中的5-HT含量;Western blot检测目的蛋白5-HT3AR相对表达量。结果(1)大鼠一般情况:与模型组比较,电针组大鼠精神良好,活动正常,大便干湿适中,为成形粪粒。(2)体质量增长率:与治疗前比较,治疗后空白组、模型组、阿洛司琼组及电针组体质量增长率显著降低(P<0.001);与空白组比较,模型组与阿洛司琼组体质量增长率降低(P<0.01,P<0.05);与模型组、阿洛司琼组比较,电针组体质量增长率升高(P<0.05)。(3)粪便含水量:与治疗前比较,电针组粪便含水量显著降低(P<0.01);与空白组比较,模型组、阿洛司琼组粪便含水量高(P<0.001,P<0.05);与模型组、阿洛司琼组比较,电针组的粪便含水量降低(P<0.01,P<0.05)。(4)肠道容量阈值:与空白组比较,模型组肠道容量阈值显著降低(P<0.001);与模型组比较,阿洛司琼组与电针组肠道容量阈值升高(P<0.05)。(5)组织HE染色:与模型组比较,阿洛司琼组黏膜上皮完整,坏死范围明显减小;电针组黏膜上皮完整,吸收细胞呈柱状,黏膜皱壁中可见淋巴细胞和少量中性粒细胞等炎细胞浸润。与阿洛司琼组比较,电针组上皮完整,无坏死炎性损伤程度轻。(6)5-HT通路检测:与空白组比较,模型组血清中5-HT的含量上升(P<0.05);与模型组比较,电针组血清中5-HT含量下降(P<0.05)。(7)结肠5-HT3AR蛋白表达:与空白组比较,模型组结肠的5-HT3AR蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,阿洛司琼组和电针组结肠的5-HT3AR蛋白表达均显著降低(P<0.001);与阿洛司琼组比较,电针组结肠5-HT3AR蛋白表达显著降低(P<0.001)。结论在“同经异腑合募配穴”指导下,电针刺激天枢、足三里对IBS-D大鼠有显著的治疗效果,其作用机制可能通过降低血清5-HT含量及结肠5-HT3AR蛋白表达,恢复肠道运动和内脏感觉功能,从而缓解IBS-D的临床症状。

柴胡提取物对PMS肝气郁证模型大鼠额叶5-HT_(3A/3B)R分布与蛋白表达的影响

经前期综合征肝气郁证（premenstru alsyndrome,PMS）症状表现类似于现代医学中的抑郁样情绪改变,前期研究证明PMS肝气郁证的发生与脑内5-HT系统及其受体密切相关[1],柴胡提取物通过不同分子机制干预PMS肝气郁证的抑郁情绪[2-3].但是柴胡提取物在5-HT3R水平对PMS肝气郁证经前抑郁情绪的干预机制尚未见报道,因此,本实验选取PMS肝气郁证为动物模型初步探讨柴胡提取物调控抑郁情绪的微观作用机制.

5-羟色胺3A受体在成年小鼠海马中间神经元中的分布

目的:利用成年5-HT3AR-BACEGFP转基因小鼠,研究5-羟色胺3A受体(5-HT3AR)在海马中间神经元中的分布情况。方法:成年5-HT3AR-BACEGFP转基因小鼠经心脏灌注固定后,利用免疫荧光双标记方法,并结合激光共焦显微镜扫描技术,观察5-HT3AR在成年5-HT3AR-BACEGFP转基因小鼠海马中不同中间神经元内的表达和分布情况。结果:5-HT3AR在成年小鼠整个海马中都有分布,且主要在CA1区、CA2/CA3区和齿状回有大量5-HT3AR免疫阳性细胞;激光共聚焦显微镜下观察到5-HT3AR阳性产物在细胞核、细胞浆和树突上均有表达;免疫荧光双标实验结果表明5-HT3AR阳性产物在CB(calbindin),CR(calretinin),Reelin,Som(somatostatin),NPY(neuropeptide Y)和VIP(vasoactive intestinal peptide)免疫阳性神经元中表达,但在PV(parvalbumin)免疫阳性神经元中不表达。定量结果显示:几乎所有的VIP阳性神经元均表达5-HT3AR阳性,约3/4的CR阳性神经元表达5-HT3AR,约1/2的CB、Reelin、NPY和Som阳性神经元表达5-HT3AR阳性;约1/4的5-HT3AR阳性神经元中表达Reelin,1/5的表达Som,5-HT3AR/CB和5-HT3AR/CR双标神经元各占5-HT3AR阳性神经元的1/10左右。结论:5-HT3AR-BACEGFP转基因小鼠能够作为研究海马中5-HT3AR功能及其在中间神经元中的作用机制研究的工具鼠。

健脾补血方对Lewis肺癌小鼠化疗后5-HT和SP及其受体的影响

目的观察健脾补血方对Lewis肺癌小鼠化疗后血清中5羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、P物质(Substance P,SP)以及5羟色胺3A受体(5-hydroxytryptamine 3A receptor,5-HT3AR)、速激肽1受体(Neurokinin1 receptor,NK1R)的影响,探讨健脾补血方对化疗后恶心呕吐的改善作用。方法 C57BL/6小鼠腋下接种Lewis肺癌细胞,随机分为肺癌组,模型组,健脾补血方高、中、低剂量组。模型组及健脾补血方各剂量组连续尾静脉注射顺铂3 d(4,3,3 mg·kg^(-1))复制模型。健脾补血方高、中、低剂量组分别给予健脾补血方25,12.5,6.25 g·kg^(-1)生药量,肺癌组和模型组给予生理盐水,连续灌胃给药14 d,末次给药后禁食24 h取血液标本及脑组织,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中5-HT和SP的浓度,并采用蛋白印迹法(Western Blot)检测5-HT3AR和NK1R的蛋白表达。结果与肺癌组比较,模型组血清中5-HT和SP浓度明显升高,5-HT3AR和NK1R的蛋白表达量升高;与模型组比较,健脾补血方各剂量组可降低血清中5-HT及NK1R蛋白表达量,而健脾补血方高剂量组可降低SP浓度及5-HT3AR蛋白表达量。结论健脾补血方能降低Lewis肺癌小鼠化疗后血清中5-HT和SP浓度,并下调其受体5-HT3AR和NK1R的蛋白表达量,可能与抑制化疗后恶心呕吐因子表达有关,从而减轻化疗后恶心呕吐反应。

脊髓5-HT3A受体对BmK I诱发的大鼠炎性痛的影响(英文)

通过皮下注射BmK I能够建立新型大鼠疼痛模型。五羟色胺（5-HT）受体参与调控动物疼痛相关行为。本文旨在研究5-HT3受体调控BmK I诱发疼的潜在机制。应用动物行为学、RT-PCR、蛋白印迹等技术手段进行相关研究,得到如下结果：足底注射BmK I（10μg）可诱导脊髓L4~L5段5-HT3A受体蛋白与m RNA表达增多,鞘内注射5-HT3A受体特异性拮抗剂ondansetron减少了自发痛反应,减弱了BmK I诱发的单侧热敏和双侧机械超敏;足底注射BmK I可能诱发了小胶质细胞的激活,且该效应能够被鞘内预注射ondansetron所逆转。脊髓L4~L5段5-HT3A受体主要表达于神经元,而不表达于小胶质细胞;另外,鞘内预注射ondansetron能够降低趋化因子CX3CL1与趋化因子受体CX3CR1在脊髓L4~L5段的表达水平。以上结果提示,5-HT3A受体信号通路与小胶质细胞激活共同参与BmK I诱发疼的起始与维持。神经元5-HT3A受体可能间接地通过CX3CL1参与与小胶质细胞间的＂串话＂,CX3CL1参与调控BmK I诱导的痛觉超敏与敏化。

胆石六号汤剂对豚鼠胆色素结石模型胆囊收缩素A受体及5-羟色胺3a受体表达的影响

目的:探究胆石六号汤剂对胆色素结石豚鼠胆囊收缩素A受体(CCKAR)、5-羟色胺3a受体(5-HT3aR)表达的影响,从而为胆石六号汤剂的临床使用提供实验依据。方法:将40只雌性豚鼠随机分为空白组(n=10)、模型组(n=15)和胆石六号汤剂组(n=15),除空白组外,其余2组采用饮食诱发法建立胆色素结石模型。胆石六号汤剂组给予胆石六号汤剂7.7 g·kg-1灌胃治疗。30 d后观察各组的成石率、胆囊CCKAR、5-HT3aR基因和蛋白的表达情况。结果:模型组成石率为91.67%,显著高于空白组10.00%和胆石六号汤剂组26.67%。RT-PCR检测模型组中CCKAR、5-HT3aR基因的表达明显低于空白组和胆石六号汤剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示模型组5-HT3aR蛋白相对于空白组显著下降,而胆石六号汤剂组阳性表达相对于模型组显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组CCKAR蛋白的表达相对于空白组有所下降,胆石六号汤剂组阳性表达相对于模型组有上升趋势,但是差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:胆石六号汤剂显著影响了胆色素结石豚鼠胆组织CCKAR、5-HT3aR基因及蛋白的表达,其治疗胆色素结石的作用一定程度上是通过增加它们的表达来实现的。

电针“天枢”“大肠俞”穴对肠易激综合征大鼠肠道动力和敏感性影响的比较研究

目的:观察电针"天枢"和"大肠俞"对肠易激综合征(IBS)大鼠的肠道压力值和敏感性的影响,并探讨其效应差异及相关机制。方法:新生Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、天枢组和大肠俞组,每组10只。采用新生期母子分离、醋酸灌肠和结直肠扩张联合制备IBS模型。9周鼠龄时,天枢组和大肠俞组分别对双侧"天枢"和"大肠俞"进行电针干预,隔日1次,每次20min,共5次。通过改良的腹部回撤反射法评估肠道敏感性和动力,即记录肠道起始收缩波潜伏期、90s内收缩波个数、90s内收缩波峰峰值;采用免疫组化法检测结肠肌层M3受体及黏膜层5-羟色胺(HT)3A受体的阳性表达。结果:与空白对照组相比,模型对照组肠道起始波潜伏期缩短,90s内收缩波个数增多,90s内收缩波峰峰值增大(P<0.01),M3和5-HT3A受体阳性表达增强(P<0.01)。与模型对照组相比,天枢组和大肠俞组潜伏期延长、峰峰值变小(P<0.01),天枢组收缩波个数减少(P<0.01),天枢组和大肠俞组M3和5-HT3A受体阳性表达减少(P<0.01)。与天枢组相比,大肠俞组潜伏期明显缩短(P<0.01),收缩波个数增多(P<0.05),M3和5-HT3A受体阳性表达增强(P<0.05,P<0.01)。结论:电针"天枢""大肠俞"穴均能调整IBS大鼠肠道动力和敏感性,且电针"天枢"穴的调节效应优于"大肠俞",其机制可能与调整结肠内M3受体和5-HT3A受体表达有关。