耳鸣大鼠耳蜗核5-HTR1B/2C、GABA、GluR1/2表达的研究

目的通过检测耳鸣大鼠耳蜗核5-羟色胺受体1B(5-hydroxytryptamine receptor1B)和5-羟色胺受体2C(5-hydroxytryptamine receptor2C)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)、谷氨酸受体1(glutamate receptor1,GluR1))和谷氨酸受体2(glutamate receptor2,GluR2)表达情况,探讨其在耳鸣产生中所起的作用。方法将24只白色Wistar大鼠随机分为3组:Ⅰ组:空白对照组(8只)、Ⅱ组:生理盐水组(8只)和Ⅲ组:耳鸣模型组(8只)。将耳鸣模型组大鼠腹腔注射水杨酸钠造模并用行为学方法证实动物感受到耳鸣后,利用免疫组化方法检测各组动物耳蜗核5-HTR1B/2C、GABA、GluR1/2表达情况,并进行统计分析。结果8只注射水杨酸钠的耳鸣模型组大鼠全部造模成功。在耳鸣模型组5-HTR1B、γ-氨基丁酸(GABA)的表达显著低于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01);5-HTR2C、谷氨酸受体1和谷氨酸受体2(GluR1/2)表达显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ组5-HTR1B/2C、GABA、GluR1/2表达差异无统计学意义(P<0.05)。结论耳鸣模型大鼠耳蜗核中神经递质及受体发生了改变,其功能失调可能是耳鸣发生的主要机制。

愤怒、郁怒反应模型大鼠海马5-HTR2C的基因表达

目的怒是影响人类健康的重要情志因素,分为愤怒和郁怒两种表达方式,两者诱发病证的机制尚未完全明确。该文主要探索愤怒、郁怒情志反应的微观机制。方法采用居住入侵和社会隔离的方法制备愤怒、郁怒反应大鼠模型,并分别予以调肝方药经前平颗粒、经前舒颗粒干预,以正常大鼠作为对照,分别取愤怒、郁怒模型组以及经前平、经前舒给药组大鼠的海马用以基因芯片检测,初步筛选出与愤怒、郁怒密切相关的基因5-HTR2C、GABABR2和5-HTR3B,运用RT-PCR和Western blot技术仅对海马中基因5-HTR2C进一步进行检测。结果与正常组相比,5-HTR2C mRNA和蛋白表达在愤怒、郁怒反应大鼠海马中均增高(P<0.01),而且愤怒组的改变程度明显大于郁怒组,上述改变在模型用药组均得到不同程度的改善,基本可恢复到正常水平。结论愤怒、郁怒情志刺激可导致海马基因5-HTR2C的表达水平改变,调肝方药在一定程度上可缓解上述情况,说明5-HTR2C与怒密切相关,且与愤怒关系更加密切,以上结果为下一步的研究提供方向和线索。

白香丹胶囊及白芍提取物对过表达5-HTR2C诱导的海马神经元中PKC的影响

目的:根据前期对愤怒模型大鼠基因芯片研究,构建大鼠5-HTR2C过表达海马神经元,研究白香丹胶囊及君药白芍提取物对5-HTR2C及PKCα/β2的影响,为阐明白香丹胶囊调整愤怒情绪的作用机制提供科学依据。方法:采用基因工程技术,构建5-HTR2C真核表达载体,应用电转染技术,使5-HTR2C在大鼠原代神经元中过量表达,建立5-HTR2C体外高表达的细胞模型,结合中药血清药理学,制备白香丹胶囊和白芍提取物的含药血清,以氟西汀为阳性对照药,干预转染后的神经元,提取各组蛋白后,Western-blot技术检测5-HTR2C及PKCα/β2中相应基因的蛋白表达。结果:与正常组相比,5-HTR2C转染组中5-HTR2C的蛋白表达显著升高(P <0. 001),PKCα的蛋白表达显著下降(P <0. 001),P-PKCα的蛋白表达显著升高(P <0. 001),PKCβ2的蛋白表达显著下降(P <0. 001),P-PKCβ2的蛋白表达显著升高(P <0. 001);与5-HTR2C过表达组相比,白香丹、白芍提取物及氟西汀干预组中5-HTR2C的蛋白表达均显著下调(P <0. 01,P <0. 01,P <0. 05),PKCα的蛋白表达均显著上调(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 01),P-PKCα的蛋白表达显著下降(P <0. 001,P <0. 01,P <0. 05),PKCβ2的蛋白表达均显著上调(P <0. 001,P <0. 01,P <0. 05),PPKCβ2的蛋白表达显著下降(P <0. 001,P <0. 001,P <0. 01)。结论:白香丹胶囊能够调整5-HTR2C高表达引起的PKCα/β2及其磷酸化水平的异常变化,且作用比氟西汀稍强,充分显示了整体调节的优势。但是,作为其中主要组分的白芍提取物无显著的调节作用,推测白香丹胶囊其他组分-香附酮及丹皮酚在愤怒致病治疗中也有一定的作用,需进一步研究。

5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响

目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为:非转染细胞(NTC)和转染细胞(TC),转染细胞分为:转染组(TC+5-HTR2C质粒)、空质粒组(TC+空质粒)、激动剂组(TC+激动剂);为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western-blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性。结果:海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率最高;体外培养的海马神经元中加入激动剂m CPP后5 min至60 min,MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC+5-HTR2C质粒和TC+激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高。结论:5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞。激动剂组可在m CPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞。通过比较TC+5-HTR2C质粒组及TC+激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强。因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功。

白香丹含药血清对大鼠海马神经元中5-羟色胺2C受体的表达及其下游信号通路中IP_3的影响

目的观察白香丹胶囊含药血清对原代海马神经元中5-羟色胺2C受体(5-HTR2C)蛋白表达水平及下游信号通路中IP3含量的影响,探讨其可能的中枢作用机制。方法采用情志刺激为主多因素造模法制备经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠模型,给予白香丹干预,制备大鼠含药血清,结合中药血清药理学,对体外培养的新生大鼠原代海马神经元进行不同血清干预,运用Western blot方法检测海马神经元中5-HTR2C蛋白表达水平,运用ELISA法检测各组海马神经细胞内IP3的含量。结果与正常血清组相比,PMS肝气逆模型血清组海马神经元的5-HTR2C蛋白表达水平和下游信号通路中IP3含量均明显升高(P<0.01,P<0.01),白香丹含药血清能够明显降低5-HTR2C蛋白表达水平和IP3的含量(P<0.01,P<0.01)。结论 PMS肝气逆证模型大鼠血清使海马神经元中5-HTR2C蛋白表达异常升高,同时,可引起第二信使IP3含量升高;白香丹胶囊可能通过降低5-HTR2C蛋白表达水平,改变其下游信号通路中IP3的含量而发挥疗效。

精神分裂症患者5-羟色胺2C受体基因多态性与2型糖尿病共病的关联研究

目的:探讨中国汉族精神分裂症患者中5-羟色胺2C受体(5-HTR2C)基因多态性(rs498177)与2型糖尿病共病的关联性。方法:选取长期住院服用氯氮平的精神分裂症伴或不伴2型糖尿病患者(共病组257例和单纯精神分裂症组288例)、单纯2型糖尿病患者(单纯2型糖尿病组264例)及正常人群(正常对照组272名)为研究对象,采用Taqman基因分型技术对5-HTR2C基因的单核苷酸多态性(SNP)(rs498177)进行基因分型,比较各组等位基因、基因型分布频率有无差异以及基因型与代谢指标的相关性。结果:共病组体质量指数(BMI)、腰围、空腹血糖(FPG)及高密度脂蛋白(HDL)水平明显高于单纯精神分裂症组,差异有统计学意义(P均<0.05)。与正常对照组比较,共病组、单纯精神分裂症组及单纯2型糖尿病组5-HTR2C基因型分布上差异有统计学意义(χ~2=22.43,χ~2=12.43,χ~2=15.58;P<0.01或P<0.001);共病组与单纯2型糖尿病组比较,等位基因分布上存在显著统计学意义(χ~2=5.66,P=0.02);精神分裂症患者不同基因型之间BMI、腰围、FPG、TG、HDL差异无统计学意义(F=0.432~2.332,P均>0.05)。结论:在中国汉族精神分裂症患者中5-HTR2C基因多态性(rs498177)与2型糖尿病共病存在关联,其可能是精神分裂症患者患2型糖尿病的易感基因。

5-羟色胺2C受体基因多态性与特发性癫痫关联研究

目的研究5-羟色胺(5-hydroxytryptamin)2C受体基因多态性与特发性癫痫(epilepsy)的关联性。方法采用PCR-SSCP(polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism)结合测序方法检测癫痫患者(病例组,n=220)与正常人(对照组n=200)5-HTR2C基因单核苷酸多态性(SNP),并利用统计学方法分析其多态性与特发性癫痫的相关性。结果 5-HTR2C基因在染色体rs113961355、rs114141491,没有发现单核苷酸多态性位点,rs113817908位发生A/C变异,其多态性位点的基因型频率差异显著(P<0.025),且分布不符合Hardy-Weinberg遗传平衡。结论 5-HTR2C基因rs113817908位点SNP多态性与特发性癫痫具有关联性。

精神分裂症并发2型糖尿病与五羟色胺2C受体基因多态性的关联性

目的探讨在中国汉族人群中精神分裂症(schizophrenia,SCZ)患者中并发2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)与五羟色胺2C受体(serotonin 2C receptor,5-HTR2C)基因多态性(rs2192371、rs5988072)的关联性。方法纳入服用氯氮平伴有T2DM(共病组257例)或不伴有T2DM(单纯SCZ组288例)的长期住院SCZ患者,单纯T2DM患者(单纯T2DM组264例)以及正常人群(对照组625例)为研究对象,采用Taqman基因分型技术对5-HTR2C基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点(rs2192371、rs5988072)进行基因分型,比较各研究组的等位基因、基因型及单体型分布频率有无差异。结果(1)单位点分析显示:共病组与对照组比较,rs2192371(χ^2=19.799,df=2,P<0.001;χ^2=7.437,df=1,P=0.006)和rs5988072(χ^2=28.682,df=2,P<0.001;χ^2=24.127,df=1,P<0.001)基因型频率和等位基因频率分布差异均有统计学意义;单纯T2DM与对照组比较,rs2192371基因型频率分布差异有统计学意义(χ^2=13.715,df=2,P=0.001),而等位基因频率分布差异无统计学意义,rs5988072等位基因和基因型频率分布差异均有统计学意义(χ^2=11.378,df=2,P=0.003;χ^2=7.142,df=1,P=0.007)。单纯SCZ组与对照组相比,rs2192371基因型频率及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05),rs5988072基因型频率分布差异为边缘性(χ^2=6.026,df=2,P=0.049),而等位基因频率分布虽然有差异(χ^2=4.964,df=1,P=0.025),但经过Bonforrnie校正后无差异。而在SCZ患者中,共病组与单纯SCZ组相比,rs2192371(χ^2=11.279,df=2,P=0.003;χ^2=8.061,df=1,P=0.004)和rs5988072(χ^2=7.013,df=2,P=0.030;χ^2=5.931,df=1,P=0.014)基因型频率和等位基因频率分布差异均有统计学意义。(2)单体型分析显示:共病组和单纯SCZ组比较,由rs2192371-rs5988072组成的单体型AC(OR=1.351,χ^2=5.841,P=0.015)和GT(OR=0.692,χ^2=7.592,P=0.004)差异有统计学意义,单体型AT差异无统计学意义。共病组和单纯T2DM组比较,两组间单体型AC、GT和AT差异均无统计学意义。结论在中国汉族人群中,SCZ并发T2DM与5-HTR2C基因多态性(rs2192371、rs5988072)存在关联,其可能是SCZ患者伴发T2DM的易感基因。

调肝方药对愤怒、郁怒模型大鼠下丘脑5-HTR2C基因表达的影响

目的:通过研究愤怒和郁怒模型大鼠下丘脑5-HTR2C基因的表达,探讨愤怒和郁怒的微观发生机制及中药经前平颗粒、经前舒颗粒的作用靶点。方法:居住入侵法制备愤怒和郁怒证模型大鼠,经前平颗粒、经前舒颗粒干预,均10 g·kg-1,ig,分别为正常组、模型组、经前舒组、经前平组;运用半定量RT-PCR和Western blot方法检测大鼠下丘脑区5-HTR2C mRNA及其蛋白表达水平。结果:与正常组相比较,愤怒组和郁怒组大鼠下丘脑中5-HTR2C mRNA和蛋白相对水平均极显著性降低(P<0.01);愤怒组大鼠的相对表达水平改变明显强于郁怒组大鼠;用药后,与模型组相比较,5-HTR2C mRNA均得到显著性改善,但与正常组相比仍极显著性下降(P<0.01),而蛋白改变均得到极显著性改善,与正常组相比无统计学差异。结论:模型组大鼠下丘脑与5-HTR2C基因表达极显著降低,调肝方药干预可显著上调模型大鼠下丘脑5-HTR2C mRNA和蛋白表达,说明5-HTR2C基因与愤怒和郁怒证相关,并且可能是经前平颗粒和经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一。

5-HTR2C基因多态性对奥氮平治疗精神分裂症患者糖脂代谢的影响

目的 探讨5-羟色胺2C受体(5-hydroxytryptamine 2C receptor,5-HTR2C)基因-759C/T和-697G/C位点多态性对奥氮平治疗精神分裂症患者糖脂代谢的影响。方法 纳入184例接受奥氮平单一治疗的精神分裂症住院患者为研究对象,于基线及治疗第6周末测定患者空腹血糖(fastingbloodglucose,FBG)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)及高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平,运用多重高温连接酶检测反应技术检测5-HTR2C基因-759C/T和–697G/C基因多态性,采用协方差分析比较不同基因型治疗前后糖脂水平的变化。结果 5-HTR2C基因–759C/T和–697G/C位点各基因型基线糖脂代谢指标差异无统计学意义;治疗6周后,–759C/T位点基因型间FBG和TG净增差异有统计学意义(F=4.862,P=0.009;F=3.397,P=0.036),其中FBG净增野生CC型患者高于CT或TT型患者(P=0.038,P=0.010),TG净增野生CC型患者高于TT型患者(P=0.010);–697G/C位点基因型间FBG净增差异有统计学差异(F=4.385,P=0.014),其中野生GG型患者高于CC型患者(P=0.006);两位点联合分析也发现,野生CC/GG基因型患者FBG净增高于CT+TT/GC+CC基因型患者(P=0.021)。结论 5-HTR2C基因–759C/T和–697G/C位点多态性与奥氮平治疗精神分裂症患者引起糖脂代谢异常具有一定相关性。

电针对移动电话辐射小鼠耳蜗核中5-羟色胺受体基因表达的影响

目的:观察移动电话辐射对小鼠耳蜗核5-羟色胺受体1B(5-HTR 1B)、5-羟色胺受体2C(5-HTR 2C)基因表达的影响,进而探讨针刺治疗耳鸣的可能机制。方法:30只昆明小鼠随机分为2组,6只作为空白对照组,其余24只接受处于上网及通话状态的移动电话辐射复制耳鸣模型。造模结束后,6只小鼠为模型组,其余18只随机分为模型对照组、翳风穴组(电针双侧"翳风"穴)、肾俞穴组(电针双侧"肾俞"穴),翳风穴组、肾俞穴组每次治疗20min,每日1次,连续7d。RT-PCR法检测各组小鼠耳蜗核5-HTR 1B、5-HTR 2C基因表达情况。结果:与空白对照组比较,模型组及模型对照组小鼠耳蜗核5-HTR 1B明显降低(P<0.05),5-HTR 2 C显著升高(P<0.01);而翳风穴组较模型组耳蜗核5-HTR 1 B明显升高(P<0.01),5-HTR 2C显著降低(P<0.01);与翳风穴组相比,肾俞穴组干预效果较弱(P<0.05)。结论:针刺"翳风"穴可以对小鼠耳蜗核5-HTR 1B、5-HTR 2C基因表达实现良性调整作用,针刺"肾俞"穴效果不明显;针刺调节耳蜗核5-HTR 1B、5-HTR 2C基因表达可能是治疗耳鸣等疾患的作用机制之一。