基于5-LOX/LTB4信号通路探讨黄芩苷/栀子苷对PM_(2.5)暴露致血管内皮功能障碍的干预作用及其机制

目的基于5-LOX/LTB4信号通路探究黄芩苷/栀子苷(BC/GD)对PM_(2.5)诱导的血管内皮功能障碍的改善作用及其机制。方法利用离体肌张力描记技术测定BC/GD对不同状态下血管环张力的影响。将32只大鼠随机分为对照组、PM_(2.5)组、30 mg·kg^(-1)BC/GD组和60 mg·kg^(-1)BC/GD组,利用气管滴注法构建PM_(2.5)暴露模型,持续2个月,造模1个月后灌胃给予对应药物,持续1个月,末次给药后,HE染色观察肠系膜动脉血管内皮状态;化学发光法检测肠系膜动脉活性氧(ROS)水平;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)水平;ELISA法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白三烯B4(LTB4)水平;Western blot法检测5-脂氧酶(5-LOX)、内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果BC/GD对基础状态的肠系膜动脉血管环张力无明显影响,但能明显舒张由5-HT预收缩的血管环;一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、环氧合酶抑制剂INDO或L-NAME+INDO均能明显抑制BC/GD的血管舒张作用,但L-NAME的抑制作用更明显;50、100 mg·mL^(-1)PM_(2.5)能降低血管环对乙酰胆碱(ACh)的舒张血管效应,而BC/GD能明显改善PM_(2.5)诱导的舒张效应减弱。与对照组相比,PM_(2.5)组大鼠肠系膜动脉内皮完整性严重受损、内皮皱缩,大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、LTB4水平显著升高、TGF-β1水平显著降低,肠系膜动脉组织中5-LOX、iNOS蛋白表达明显增加,eNOS蛋白表达降低,ROS水平升高,NO水平降低。与PM_(2.5)组相比,BC/GD能改善内皮损伤程度和完整性,可显著降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、LTB4水平,升高TGF-β1水平;明显降低肠系膜动脉5-LOX、iNOS表达,升高eNOS蛋白表达;降低ROS水平,升高NO水平。结论BC/GD可通过抑制5-LOX/LTB4信号通路表达,从而降低ROS水平,抑制炎性损伤,上调eNOS表达,下调iNOS表达,升高血管中NO水平,改善PM_(2.5)诱导的血管内皮功能障碍。

5-LOX及其抑制剂对肿瘤影响的研究进展

脂氧合酶(LOX)家族蛋白在恶性肿瘤演进中发挥重要作用,其亚型5-LOX在多种肿瘤组织和细胞中呈高表达,且与淋巴结转移、患者的生存期有关,可通过诱导Src的磷酸化、选择性抑制p53依赖的促凋亡基因转录、促进肿瘤血管形成、刺激上皮-间质转化、形成转移前微环境等,促进肿瘤细胞增殖和转移、抑制凋亡,参与调控肿瘤的恶性演进过程。基于5-LOX及其激活蛋白ALOX5AP的促癌作用,已开发出直接、间接两类抑制剂及COX-2/5-LOX双重抑制剂,有望通过降低5-LOX活性或阻断5-LOX代谢途径发挥抗肿瘤作用。本文概述5-LOX在肿瘤中的调控作用以及5-LOX和其激活蛋白抑制剂的研究现状,以期为后续抗肿瘤药物的开发及临床应用提供参考及新的理论依据。

芒果苷作用于COX-2和5-LOX双靶点改善良性前列腺增生炎症

目的研究芒果苷对良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)炎症的治疗作用及其潜在的作用机制。方法Western Blot和q-PCR技术检测大鼠前列腺组织中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在蛋白水平上和mRNA水平上的表达,并用计算机分子对接技术加以佐证。此外,对前列腺湿质量(prostate weight,PW)、前列腺指数(prostate index,PI)、前列腺组织学形态进行考察。结果Western Blot和q-PCR结果表明,芒果苷可抑制大鼠前列腺组织中COX-2和5-LOX在蛋白水平和mRNA水平上的表达,分子对接技术结果表明芒果苷与COX-2和5-LOX受体模型均有结合能力。同时,PW、PI及组织病理学切片结果均表明芒果苷可明显改善BPH炎症。结论芒果苷同时作用于COX-2和5-LOX双靶点,通过下调COX-2和5-LOX的表达,从而改善BPH炎症。

姜黄素对匹罗卡品致痫大鼠海马COX-2和5-LOX表达的影响

目的:观察氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织环氧酶-2(COX-2)和5-脂氧合酶(5-LOX)表达,探讨姜黄素对癫痫大鼠神经保护作用机制。方法:动物随机分为5组,生理盐水对照组,癫痫组,丙戊酸钠组,姜黄素低剂量组,姜黄素高剂量组。癫痫模型采用氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态(SE),SE后各治疗组分别予丙戊酸钠口服溶液(140 mg/kg)、低剂量姜黄素(100 mg/kg)及高剂量姜黄素(300 mg/kg)腹腔注射,大鼠癫痫造模后24 h和72 h取海马组织,苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理形态学变化,荧光定量PCR检测COX-2和5-LOX mRNA表达,免疫印迹法(Westetn Blot)检测海马组织COX-2和5-LOX蛋白的表达。结果:癫痫组海马神经元脱失和损伤明显,丙戊酸钠组和姜黄素治疗组明显减轻;与对照组相比,癫痫组海马组织COX-2和5-LOX mRNA及蛋白表达增加(癫痫72 h组5-LOX除外),差异显著(P<0.05);与癫痫组比较,姜黄素治疗组海马组织COX-2和5-LOX mRNA及蛋白表达降低,差异显著(P<0.05),且姜黄素高剂量组上述指标下降幅度大于低剂量组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素治疗可降低匹罗卡品致痫大鼠海马神经元COX-2和5-LOX mRNA及蛋白表达,可能通过影响花生四烯酸代谢通路COX-2和5-LOX表达来减轻癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用。

黄芩苷与栀子苷组合物对脑缺血损伤大鼠5-LOX/CysLTs/CysLT通路的影响

目的研究黄芩苷、栀子苷配伍治疗脑缺血损伤中对5-LOX/CysLTs/CysLT通路的影响。方法 SD大鼠分为对照组、模型组、黄芩苷-栀子苷(7∶3)30、45、60 mg/kg组,以模型模拟脑缺血恢复期损伤。持续恢复1周,神经功能学评分及HE染色观察药物的脑保护作用,ELISA测定脑组织Cys LTs水平,Western-blot检测脑部5-LOX、CysLT_1、CysLT_2的表达,免疫荧光双标研究小胶质细胞活化与5-LOX通路相关性。结果黄芩苷、栀子苷持续给药一周后可以降低缺血区炎细胞浸润及组织水肿,与模型组比较能显著降低神经功能学评分,抑制小胶质细胞激活,降低Cys LTs的水平及下调5-LOX、CysLT_1、CysLT_2的表达(P<0.01)。结论黄芩苷与栀子苷组合物可以通过改善炎症损伤来减轻脑缺血损伤,其作用机制与抑制小胶质细胞活化和5-LOX/CysLTs/CysLT信号通路相关。

COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖诱导下巨噬细胞炎症因子表达的影响

研究COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖(LPS)诱导下RAW 264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用LPS(1μg/mL)刺激生长良好的RAW 264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型,在不同浓度的ZLJ-6(3,10,30μmol/L)作用下,用Griess法检测细胞培养液中NO的含量,用ELISA法检测TNF-α、IL-6含量,并用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮激酶(iNOS)的表达。ZLJ-6能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放以及TNF-α、IL-6等炎症因子的生成,同时抑制COX-2和iNOS的表达。结果表明,ZLJ-6具有抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达以及炎症介质NO以及TNF-α、IL-6的产生。

肝细胞肝癌中5-LOX的表达及其与bcl-2和bax表达的关系

目的研究肝细胞癌(HCC)中5-脂氧合酶(5-LOX)的表达与bcl-2和bax表达的关系及其可能机制。方法检测48例HCC癌组织及其癌旁组织,应用RT-PCR和免疫组织化学S-P法检测5-LOX、bcl-2和bax的表达情况。结果在癌、癌旁组织中5-LOX、bcl-2和bax基因mRNA表达分别是30/48、33/48、24/48和12/48、9/48、36/48,与癌旁组织比较,差异有显著性(P<0.05)。HCC中5-LOX蛋白阳性率为56.3%,与bcl-2蛋白的表达呈显著正相关(r=0.447,P<0.01),但与bax蛋白表达呈显著负相关(r=-0.567,P<0.01)。结论5-LOX与肝细胞肝癌的发生、发展关系密切;其机制可能是通过上调bcl-2及同时下调bax等凋亡相关调节因子表达水平有关。

5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响

目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响。方法将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制。再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型。裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2)。接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积。Westernblot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖。

5-LOX siRNA人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤模型的建立及意义

目的建立5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)5-LOX siRNA转染人肝癌细胞HepG2裸鼠瘤动物模型,探讨iR-NA干扰技术在裸鼠瘤模型中应用的可行性,为肿瘤的实验研究提供平台。方法分别用pRNAT-U6.1-5-LOX siRNA转染的HepG2细胞、空白质粒pRNAT-U6.1转染的HepG2细胞和未转染的HepG2细胞接种裸鼠建立移植瘤模型,分为转染组、转染空载体组和未转染组。建模前,用免疫荧光定量PCR检测转染HepG2细胞5-LOX mRNA表达,成瘤后测量种植瘤体积,并用Western-blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX的蛋白和mRNA表达。结果 5-LOX siRNA转染的细胞5-LOX mRNA表达量下降(P<0.01),转染组肿瘤平均体积与转染空载体组及未转染组比较明显减小(P<0.01),而且瘤体5-LOX蛋白及mRNA表达量亦明显下降(P<0.01)。结论 5-LOX siRNA转染肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤瘤实验模型建立成功。将干扰技术和裸鼠移植瘤相结合,为肿瘤的实验研究提供一种更可靠有效的研究方法。

白花蛇舌草提取物体外抗5-LOX活性研究

研究白花蛇舌草的抗炎活性部位以及提取方法对其的影响。采用70%乙醇回流和石油醚脱色两种不同的提取方法,按照溶剂极性由低到高萃取得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取物,所得样品用比色法检测其抗5-LOX活性。最终发现脱色后的白花蛇舌草抗5-LOX活性较好,抗炎主要活性在乙酸乙酯部位,其抑制率为66.98%。脱色后白花蛇舌草的提取物可减少杂质对其抗炎活性的影响,乙酸乙酯部位可作为抗炎药物筛选部位。

人胰腺癌细胞中5-LOX基因的表达及其抑制剂的作用

目的 :探讨人胰腺癌细胞中 5 LOX的表达及其抑制剂的作用。方法 :应用RT PCR、免疫细胞化学技术和图像分析检测 5 LOX在人胰腺癌细胞Capan 2中的表达水平及抑制剂MK886对 5 LOX基因表达水平的影响。结果 :MK886能有效降低 5 LOXmRNA的表达 ,MK886作用组 5 LOX蛋白低表达或不表达 ,对照组均呈高表达。结论 :5 LOX抑制剂能有效阻止 5 LOXmRNA的翻译功能 。

靶向5-LOX中药黄酮类化合物的活性筛选及其作用方式和共性规律研究

筛选靶向结合炎症相关蛋白5-LOX(5-lipoxygenase,5-脂氧合酶)的中药黄酮类天然产物,分析与5-LOX结合的黄酮类成分及其来源中药的共性规律。本研究借助Discovery Studio 2017 R2分子对接和药效团构建模块,结合SPR分子筛选实验,以及关联网络构建的方法进行研究。研究结果显示,来源于17种中药的18个黄酮类小分子中有11个能够与5-LOX结合,并从分子对接以及药效团构建研究中发现其作用的3种方式和共性特征:(1)部分中药黄酮成分(如木犀草素等)通过结构中的B环与5-LOX在活性位点ASP243形成静电中心相结合;(2)部分中药黄酮成分(如芹菜素等)是通过结构中的A环与活性位点VAL520形成疏水键、与活性位点ASP243形成氢键与5-LOX结合;(3)杨梅苷等黄酮类成分由于极性较强,在没有形成疏水键的情况下,也是通过形成静电中心与5-LOX在活性位点ASP243产生相互作用。此外还发现靶向5-LOX的活性中药黄酮类化合物,大多来源于具有利湿、退黄等功效,性味甘苦寒的景天科中药中。本研究发现了部分靶向5-LOX的中药黄酮类成分及其作用方式和共性规律,为开发靶向5-LOX抗肿瘤新药提供思路和方法。

基于从头设计及ADMET的木姜子属中木脂素类化合物5-LOX抑制剂筛选研究(Ⅱ)

5-脂氧合酶(5-LOX)作为白三烯生物合成的关键酶之一,是炎症反应研究中的重要靶点.目前其相关上市药物存在肝毒性、半衰期短等不足,因此肝毒性较小且抑制活性较高的5-LOX抑制剂具有开发研究的必要.文章在前期研究基础上,发现传统药物资源木姜子属植物中的木脂素类化合物可能具有一定的5-LOX抑制活性,因此采用从头设计、类药规则和ADMET筛选等计算机辅助药物设计技术,对其进行深入研究.研究发现从头设计碎片生长分子均有较好的筛选结果,且其中有11个小分子,分子对接打分值较高,残基结合模式与齐留通较为类似,特别是其具有肝毒性较小、血浆蛋白结合率较低的优势特性.研究结果显示木姜子属植物中木脂素类化合物的11个从头设计衍生小分子具有一定的潜在5-LOX抑制活性,且具有肝毒性较小、血浆蛋白结合率较低的优势,具有一定深入研究价值,并且通过对残基相互作用模式的分析,为后续研究提供了一定的参考.

5-LOX和12/15-LOX在炎症中的功能研究进展

脂氧合酶（Lipoxygenase,LOX）,又名脂肪氧化酶、脂肪加氧酶或类胡萝卜素氧化酶,最早发现于高等植物中,与植物的生长密切相关,随后,在真菌、细菌与动物组织中均发现了脂氧合酶[1,2],它们不仅能参与细胞代谢调节,调控基因的表达与细胞的增殖、分化和衰老,还能影响氧化还原平衡进而影响细胞的功能[3,4]。目前,哺乳动物LOXs的研究多侧重于分析其与细胞功能、肿瘤及癌症的关系等[4-6].

基于分子对接及药效团模型的木姜子属木脂素类化合物5-LOX抑制剂筛选研究(Ⅰ)

脂氧合酶-5(5-LOX)是炎症反应中的关键酶之一,其中目前以其作为炎症治疗靶点的上市药物大多有肝毒性、半衰期短等不足之处,因此新型的5-LOX抑制剂的开发十分有必要性.在前期研究基础上,发现传统药物资源木姜子属植物中的木脂素类化合物可能具有一定的抗炎活性,于是进一步采用分子对接与药效团模型的虚拟筛选方式,对其进行研究.研究发现35个木脂素类分子均有较好的匹配度,其中32号、33号化合物在两种筛选方式中都有较高的打分结果,且靶点蛋白结合模式与阳性对照齐留通(zileuton)有较高的相似度.研究结果显示,木姜子属植物中的木脂素类化合物可能具有潜在5-LOX抑制活性,且其中的32号、33号分子具有较高的潜在研究价值,值得进一步深入研究.

5-LOX代谢途径与牙周炎相关性的研究进展

花生四烯酸的代谢产物在炎症性骨破坏疾病的病理过程中发挥着重要的作用,其主要病理机制为破骨细胞的形成和活化,近年来发现花生四烯酸经脂氧酶(1ipoxygenase,LOX)途径代谢的产物LTB4在牙周炎患者龈沟液中的含量高于正常者,给予5-LOX抑制剂的炎症模型中破骨细胞的数量和骨破坏的程度均低于对照组,因而探讨花生四烯酸经5-LOX途径代谢对牙周炎的影响及其机制将有利于进一步阐明牙周炎的发病机理,为牙周炎的防治提出新的思路,本文就有关花生四烯酸脂氧酶代谢途径与牙周炎关系的研究做一综述。

大鼠闭合性脑损伤后5-LOX、c-fos蛋白、NSE的表达及表达时相的研究

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、c-fos蛋白及神经元特异性烯醇化酶(NSE)在闭合性脑损伤后不同时间点的表达情况及其意义。方法 Wistar大鼠55只随机分成正常对照组、假损伤组及损伤后0.5h组、1h组、2h组、4h组、8h组、12h组、24h组、48h组、72h组。用免疫组化(SP)法检测5-LOX、c-fos蛋白和ELISA检测NSE在闭合性脑损伤后不同时间点的表达情况。结果 5-LOX免疫阳性细胞在损伤后8h明显增高,24h达到高峰,然后逐渐降低,损伤72h后仍高于正常值;c-fos蛋白于损伤0.5h后表达明显增高,8h达到高峰,24h降至正常值;血清中的NSE于损伤2h候表达增高,24小时达到高峰,损伤72h后仍高于正常值。结论大鼠闭合性脑损伤后5-LOX、c-fos蛋白及血清中的NSE表达均上调,且各自具有时间规律,有希望为法医学中的颅脑损伤时间的推断提供参考。

5-LOX-CysLTs-CysLTsR表达规律及黄芩苷-栀子苷配伍对大鼠脑缺血抗炎作用机制研究

目的动态观察脑卒中大鼠脑组织半胱氨酰白三烯(CysLTs)活性及其5-脂氧酶(5-LOX)、半胱氨酰白三烯受体1(CysLTs1)、半胱氨酰白三烯受体2(CysLTs2)表达水平变化规律,探讨黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍抗脑缺血炎性损伤机制.方法线栓法制备大脑中动脉堵塞模拟脑缺血模型,模型成功后随机分为空白对照组(Control)、模型组(pMCAO)、黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组、齐留通45mg/kg组、孟鲁司特0.5mg/kg组,持续35d给药治疗,每隔7d,神经功能评分观察神经保护作用,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测脑组织CysLTs含量;蛋白质印迹(WesternBlot)法检测脑组织5-LOX、CysLTs1、CysLTs2蛋白表达水平.结果与模型组相比,黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组在脑缺血28d内可显著降低了CysLTs水平;WesternBlot结果显示,5-LOX、CysLTs1和CysLTs2蛋白表达明显降低;至恢复期35d,各蛋白表达水平已无显著性差异.结论黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍可减轻MCAO大鼠的神经功能障碍,其作用机制可能与抑制5-LOX活性、降低CysLTs1和CysLTs2蛋白表达有关.

5-LOXmRNA和VEGFmRNA在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的研究5脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌中的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法用RT-PCR检测5-LOX mRNA和VEGFmRNA在3 5例胰腺癌新鲜组织中的表达。结果5-LOX mRNA和VEGFmRNA在胰腺癌组织中的表达率分别为7 4.3%及6 0%,均与胰腺癌的临床分期有关;VEGF还与胰腺癌的分化程度有关。5-LOX mRNA和VEGF有协同作用(P<0.0 5),呈密切正相关(r(0.5 3 5,P<0.0 1)。III^IV期5-LOX mRNA表达明显高于I^II期(P<0.0 5)。结论5-LOX mRNA和VEGFmRNA在胰腺癌中表达增高,与临床分期有关。5-LOX mRNA和VEGF mRNA表达呈正相关。