高效液相色谱测定除脂生发片中丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮

建立高效液相色谱波长切换法测定除脂生发片中丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮成分含量。色谱柱为Agilent EclipsePlus C18(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(流动相A)-0.3%磷酸(流动相B)为流动相,梯度洗脱;柱温30℃;柱流量1.0 mL/min;丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮的检测波长分别为274、236、254和252 nm;进样体积:10μL,高效液相色谱-二极管阵列检测器定量检测。丹皮酚、黄柏酮、5-O-甲基维斯阿米醇苷和胡薄荷酮分别在质量浓度0.01996~1.996、0.5868~5.868、0.997~9.97、0.0998~9.98μg/mL内与其色谱峰面积呈线性关系,相关系数分别为0.9996、0.9980、0.9997和0.9999,平均回收率分别为100.92%、100.54%、101.14%、100.93%;测定结果的相对标准偏差均小于5.0%(n=6)。该方法具有样品处理简单、分析时间短、检测结果准确等优点,适用于除脂生发片制剂的质量控制。

HPLC法测定不同防风炮制品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的建立防风不同炮制品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法并进行比较。方法采用高效液相色谱法(HPLC),使用Hitachi Lachrom-C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水溶液(40:60)作为流动相,设定检测波长为254 nm、柱温为30℃、流速为1.0 m L/min,进样量3μL。同时,采用快速水分测定仪测定不同炮制品的水分含量。结果升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在14.75~118.00μg/mL和24.00~192.00μg/mL范围内有良好的线性关系。升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷精密度的相对标准偏差(RSD)分别为0.68%、1.13%,重现性的RSD分别为0.64%、1.74%,平均回收率分别为100.80%,95.65%。防风炮制后升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量均有不同程度的下降,虽然微波炮制炒防风的5-O-甲基维斯阿米醇苷含量要低于传统炮制品,但是微波炮制品含量整体高于传统炮制品,炮制后水分含量明显降低,微波炮制品水分含量整体略高于传统炮制品。结论HPLC法快捷、简便、准确、重复性好,可用于防风不同炮制品的质量控制;防风的微波炮制品有效成分含量较高,水分含量略低。

防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷抗炎作用及机制研究

目的研究防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷的抗炎作用及其机制。方法建立脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠单核巨噬细胞体外炎症模型,采用酶联免疫吸附测定法细胞中的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR4)含量;采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎模型,观察5-O-甲基维斯阿米醇苷对结肠炎小鼠结肠损伤的影响,采用酶联免疫吸附测定法测定小鼠结肠组织上清液中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β蛋白表达。结果与脂多糖组比,5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组能降低RAW264.7炎症细胞中IL-1β、IL-6、TLR4含量(P<0.01),并呈现浓度依赖性;与空白组比,结肠炎模型组小鼠体质量及结肠长度降低,结肠组织有明显的病理改变。与模型组比,5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组能缓解结肠炎小鼠肠炎症状和减轻肠黏膜病理损伤,降低结肠中MDA含量,增加SOD活性(P<0.01),并能下调结肠组织中的TNF-α、IL-1β蛋白表达水平(P<0.01)。结论防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷可抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症,对DSS诱导小鼠结肠炎有一定的治疗作用。

防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用研究

目的 研究中药防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用及其作用机制。方法 建立LPS诱导小鼠RAW264.7细胞体外炎症模型,采用MTT比色法测定不同浓度(160、80、40、20、10μmol/L)5-O-甲基维斯阿米醇苷对小鼠RAW264.7细胞活性的影响;实验分空白组,LPS组,阳性对照组(吲哚美辛,10μmol/L),5-O-甲基维斯阿米醇苷低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量组,空白组、LPS组加入空白培养基,其余给药组加入相应药物,2h后加入LPS(10μg/mL),采用格里斯试剂法检测小鼠RAW264.7细胞上清液的一氧化氮(NO)的分泌,酶联免疫吸附试验法检测小鼠RAW264.7细胞中的前列腺素E_(2)(PGE_(2))、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,RT-qPCR检测小鼠RAW264.7细胞核因子-κB(NF-κB)p65、白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)的mRNA表达,Western blot检测Toll受体4(TLR4)、NF-κB p65蛋白表达。结果5-O-甲基维斯阿米醇苷(10~80μmol/L)对小鼠RAW264.7细胞活性无明显影响。与空白组比较,LPS组小鼠RAW264.7细胞NO、PGE_(2)、TNF-α含量升高(P<0.01),NF-kB p65、IL-1β、INOS、COX-2的mRNA表达及TLR4、NF-κB p65蛋白表达增加(P<0.01);与LPS组比较,5-O甲基维斯阿米醇苷低、中、高剂量组R小鼠AW264.7细胞中NO、PGE_(2)、TNF-α含量均降低(P<0.01),NF-κB p65、IL-1β、INOS、COX-2的mRNA表达和TLR4、NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.01)。结论 防风中5-O甲基维斯阿米醇苷能抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症反应,具有一定的抗炎作用。

高速逆流色谱分离纯化防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷

建立了高速逆流色谱分离制备防风中有效成分升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的方法。防风根的粉末经甲醇浸泡提取和减压蒸馏,得粗提浸膏。以V(乙酸乙酯)∶V(正丁醇)∶V(水)=2∶7∶9为溶剂,上相为固定相,下相为流动相,流速2.0mL/min。从316mg防风粗提物中一步分离得到13.9mg升麻素苷和25mg5-O-甲基维斯阿米醇苷,纯度分别为98.1%和99.2%。采用ESI-MS,1H NMR和13C NMR对目标化合物的结构进行了鉴定。

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法:建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法,将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组,并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导平滑肌细胞增殖的作用,用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果:升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均能明显抑制TNF-α引起的平滑肌细胞增殖,与TNF-α组相比有极显著差异(P<0.01)。升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均使G1/G0期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少,与TNF-α组相比差异极显著(P<0.01)。结论:升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。

HPLC法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(5μm,150 mm×4.6 mm id)柱,甲醇-水流动相体系梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.7 ml/min,柱温25℃,进样量5μl。结果成功建立了防风中4种主要成分的HPLC含量测定方法,且方法学考察结果良好。结论该方法简便可行,定量准确,可用于防风中4种主要成分的质量控制。

5-O-十八酰基-1,2-O-异丙叉基呋喃木糖的合成及卷烟加香效果

以DCC为缩水剂,在4-二甲氨基吡啶(4-DMAP)催化下合成了化合物5-O-十八酰基-1,2-O-异丙叉基呋喃木糖.该化合物结构经IR、1HNMR、MS和元素分析得到确证,并进行了热裂解和卷烟加香试验.评吸结果表明,合成的该化合物可以赋予卷烟烟气以十六酸的特征香气.

HPLC测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总含量

目的:建立测定辛夷鼻炎丸(辛夷、薄荷、紫苏叶、甘草等)中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的高效液相色谱方法。方法:以Sunfire C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相采用甲醇(A)-水(B)梯度洗脱:0～20 min,72%B;20～50 min,72%～50%B。升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的检测波长为254 nm,流速为0.9 mL/min,柱温为35℃,进样量为10μL。结果:用梯度洗脱得到了较好的分离效果,升麻素苷在0.020 16～0.806 4μg之间线性关系良好,r=0.999 9;5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.020 96～0.838 4μg之间线性关系良好,r=0.999 9。结论:该方法专属性强,准确度高,可用于辛夷鼻炎丸中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定。

HPLC测定五虎散中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

由当归、红花、防风、天南星、白芷配伍而成的五虎散是一种具有活血散瘀,消肿止痛等功效的中成药,用于跌打损伤,瘀血肿痛的治疗[1].

肠道菌群法研究黄芪对防风中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷代谢的影响

目的采用肠道菌群法研究黄芪对防风中主要活性成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷代谢的影响,从而探讨防风-黄芪药对的配伍机制。方法采用肠道菌群法,比较不同时间点防风组和防风-黄芪组以及防风单体组和防风单体-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素的质量浓度。结果防风-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量浓度均高于防风组,升麻素的质量浓度均低于防风组。单体-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量浓度均高于单体组,升麻素的质量浓度均低于单体组。结论黄芪能抑制防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的水解反应,减缓其代谢。

HPLC法测定蒺藜防白缓释滴丸中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和欧前胡素

目的采用高效液相梯度洗脱法测定蒺藜防白缓释滴丸（蒺藜、防风、白芷、当归等）中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和欧前胡素的含有量。方法蒺藜防白缓释滴丸甲醇提取液分析在Agilent ZORBAX SB-C_（18）柱（250 mm×4.6 mm,5μm）上实施;体积流量1.0 m L/min;检测波长254 nm。升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的色谱流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸溶液,梯度洗脱（0-10 min,15%A;10-20 min,15%→30%A;20-25 min,30%A）;柱温35℃。欧前胡素的色谱流动相为甲醇-水（68∶32,V/V）;柱温30℃。结果升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在1.602 0-112.14μg/m L（r=0.999 8）、1.396-139.60μg/m L（r=0.999 9）范围内与峰面积成良好的线性关系,平均回收率分别为100.2%（RSD=0.99%）和99.9%（RSD=0.80%）。欧前胡素在0.707 2-70.72μg/m L（r=0.999 9）范围内与峰面积成良好的线性关系,平均回收率为99.4%（RSD=1.0%）。结论本法操作简便,准确可靠,可用于蒺藜防白缓释滴丸的质量评价。

RP-HPLC法测定畅鼻通颗粒中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的:建立测定畅鼻通颗粒中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的反相高效液相色谱法。方法:采用 AgilentEclipse XDB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-水-三乙胺(35:65:0.1)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长254nm。结果:升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的线性范围分别为2.5～100.0 mg·L^(-1)(r=0.9993)和2.1～84.0mg·L^(-1)(r=0.9992);平均回收率(n=9)分别为99.2%和99.8%。结论:该方法简单,结果准确、可靠,可以作为该制剂质量控制的一项重要指标。

5-O-三苯硅基-4"-O-酰基阿维菌素B_(1a)的合成和生物活性

5-O-三苯硅基阿维菌素 B1 a与羧酸在 4-二甲氨基吡啶 (DMAP) /二环己基碳二亚胺 (DCC)体系中直接酯化 ,得到 1 0种 5 -O-三苯硅基 -4" -O-酰基阿维菌素 B1 a衍生物 ,产率 5 5 %～ 76% .生测结果表明 ,4"位不同的取代基团对化合物的杀虫活性有不同的影响 ,其中部分化合物具有较好的杀虫。

Avermectin C5-O-甲基转移酶基因的克隆、序列分析及其基因置换

C5 O 甲基转移酶基因 (aveD)位于阿维链霉菌 (Streptomycesavermitilis)染色体 3 4kbBamHI的片段上 ,通过构建avermectin基因组约 3 4kbBamHI片段的亚基因文库 ,用PCR的方法获得该基因的连锁基因C5 酮基还原酶基因 (aveF) ,并作为探针筛出aveD的克隆子。测序后和GenBank做同源比较 ,结果一致。构建基因置换穿梭载体 pHJ5 80 3 (pHZ13 5 8∷aveD&Amr) ,通过ET12 5 67::pUZ80 0 2属间接合转移导入S .avermitilis。放松培养后筛选出双交换重组菌株 ,并用PCR验证重组菌株的aveD已经破坏 ,将重组菌株摇瓶发酵液提取avermectin进行色谱质谱联机分析 ,发现重组菌株仅产生 4个组分 ,与出发菌株的 4个B组分完全一致。

辛防通窍片中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定

目的建立同时测定辛防通窍片中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的高效液相色谱法。方法采用资生堂MG C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(16∶84)为流动相,检测波长为254 nm,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL,柱温为25℃。结果升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷进样量分别在0.151 2～6.048 0μg(r=0.999 99,n=8)和0.060 0～2.400 0μg(r=1.000 00,n=8)范围内与相应峰面积有良好线性关系,平均回收率分别为101.79%(RSD=1.44%)和101.32%(RSD=1.40%)。结论该法操作简便、结果准确、专属性强,可用于辛防通窍片的质量控制。

HPLC法同时测定辛芩颗粒中细辛脂素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定辛芩颗粒中细辛脂素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的方法。方法：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流速为1.0 ml·min^-1;柱温：30℃;流动相：甲醇-水梯度洗脱;检测波长：0-30 min为254 nm,30-55 min为287 nm;进样量：10μl。结果：升麻素苷在浓度为10.210-163.400μg·ml^-1时线性关系良好,r=0.999 7,平均回收率为100.30%,RSD为1.6%（n=6）;5-O-甲基维斯阿米醇苷在浓度为10.160-162.600μg·ml^-1时线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为101.53%,RSD为1.1%（n=6）;细辛脂素在浓度为5.015-80.240μg·ml^-1时线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为101.12%,RSD为1.2%（n=6）。结论：该方法简单、准确,同时测定3种有效成分的含量,可用于辛芩颗粒的质量控制。

关节熏洗汤剂中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定

目的:测定关节熏洗汤剂中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱:Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-水(12:10:78);检测波长:254 nm;流速:1 ml·min^(-1);柱温:30℃。结果:升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的线性范围分别为0.035~0.350μg和0.037~0.370μg(r分别为0.999 9和0.999 8),平均回收率分别为101.49%(RSD=2.5%)、98.77%(RSD=2.2%)。结论:升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定为关节熏洗汤剂的疗效提供了初步依据。

玉屏风方饮片及汤剂中毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量相关性研究

目的:建立玉屏风汤剂中毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法,研究黄芪、防风饮片及玉屏风汤剂中此3种成分的含量相关性。方法:采用HPLC法,色谱柱为Hypersil ODS;流动相为乙腈-水(梯度洗脱);检测波长为254nm;流速为1mL·min-1;柱温为30℃。结果:黄芪中的毛蕊异黄酮苷、防风中的升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷的提取率分别为45.58%~63.35%,45.01%~65.09%,53.62%~87.75%。结论:饮片与汤剂中的含量呈现一定相关性,但不同批次饮片的提取率差异性较大;为玉屏风汤剂物质基础的研究提供了一定的参考。

HPLC同时测定藿香清胃颗粒中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、栀子苷含量

目的：建立藿香清胃颗粒（广藿香、栀子、防风等）中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和栀子苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法在同一色谱条件（色谱柱：Shimadzu VP-ODS 250 mm×4.60 mm,5μm;流动相：乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱;流速：1.0 mL/min;柱温：30℃）下对制剂中3种成分进行定量测定。结果：升麻素苷在26.0-390 ng范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为101.7%,RSD=0.7%;5-O-甲基维斯阿米醇苷在21.5-322.2 ng范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为101.9%,RSD=1.1%;栀子苷在105.4-1 580.4 ng范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为101.6%,RSD=1.1%。结论：所建立的方法可在同一色谱条件下检测出3个成分,可用于该制剂的质量控制。