血清GDF5 mRNA在慢性牙周炎患者中的水平及其与病变程度的相关性

目的分析血清生长分化因子5(GDF5)mRNA在慢性牙周炎患者中的水平及其与病变程度的相关性。方法选取2019年1月至2021年1月该院口腔科收治的慢性牙周炎患者150例作为研究组,并根据牙周检查情况分为轻度组(53例),中度组(51例),重度组(46例),另选取同期健康体检者50例作为对照组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清GDF5 mRNA水平;采用Pearson相关分析血清GDF5 mRNA水平与牙周袋探诊深度、附着丧失水平和菌斑指数的相关性;采用Spearman相关分析GDF5 mRNA水平与病变程度的相关性;采用多因素Logistic回归分析慢性牙周炎的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GDF5 mRNA水平对重度慢性牙周炎的预测价值。结果对照组与研究组GDF5 mRNA水平分别为1.01±0.30、0.70±0.21,研究组明显低于对照组,差异有统计学意义(t=8.061,P<0.001)。血清GDF5 mRNA水平、牙周袋探诊深度、附着丧失水平和菌斑指数在轻度组、中度组和重度组中依次升高,两两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDF5 mRNA与牙周袋探诊深度、附着丧失水平、菌斑指数、病变程度均呈负相关(r=-0.587、-0.521、-0.628、-0.567,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,GDF5 mRNA水平降低是慢性牙周炎发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清GDF5 mRNA预测重度慢性牙周炎的曲线下面积为0.893,灵敏度为79.23%,特异度为88.31%。结论慢性牙周炎患者血清GDF5 mRNA水平随着病变程度的加重而降低,GDF5 mRNA还可以作为预测重度慢性牙周炎的指标。

超声小探头探查5、6级支气管路径对肺结节诊断的价值

目的 探讨超声小探头诊断5、6级支气管相关肺结节的影响因素。方法 收集2022年1月—2023年10月于临沂市人民医院薄层CT诊断肺外周结节的患者49例。薄层CT判断肺结节相关5级或6级支气管、测量结节的直径,评估实性结节、单纯磨玻璃结节。超声小探头测量5级管口到结节的距离、测量支气管相关结节的长度,判断超声小探头与结节的位置,统计分析以上因素对活检结果的影响。结果 49例患者活检阳性率79.59%,超声小探头测量结节的长度阳性组15.0(10.0,23.0)mm,阴性组11.0(2.0,20.8)mm(z=-11.220 P=0.022)。超声小探头在结节内部阳性率90.33%明显高于超声小探头在结节边缘的阳性率61.11%(χ^(2)=5.982,P=0.014)。CT测量结节的直径阳性组22.0(16.0,29.0)mm阴性组19.5(15.0,30.0)mm(z=-5.261,P=0.017)。性别、年龄、5级管口到结节的距离、实性结节、磨玻璃结节、5级支气管肺相关结节、6级支气管相关肺结节对活检阳性结果影响无统计学差异。结论 CT测量肺结节直径越大,超声小探头经5、6支气管测得肺结节长度越长,超声图像呈同心圆样改变,活检阳性率越高。

微乳液增敏钼(Ⅵ)-3′,5′-二溴水杨基荧光酮络合物光谱探针测定蛋白质

研究了在乳化剂OP微乳液介质中钼 (Ⅵ ) 3′ ,5′ 二溴水杨基荧光酮 (3′ ,5′ DBSF) 蛋白质体系的相互作用和吸收光谱情况。在最佳条件下 ,牛血清蛋白质含量在 0～ 10mg/L范围内服从比尔定律 ;同时测得络合物与蛋白质的结合数n =93。乳化剂OP微乳液引入到蛋白质的测定中提高了体系的灵敏度。结果表明 :该法具有很高的灵敏度、选择性和稳定性 ,可直接用于人尿、奶粉和人血清样品的定量测定。

4-(氮杂-15-冠-5)-1,8-萘酰亚胺荧光探针的合成及性能研究

N-丁基-4-溴-1,8-萘酰亚胺与二乙醇胺反应,合成了N-丁基-4-二(2-羟乙基)氨-1,8-萘酰亚胺,进一步与对甲基苯磺酸二缩三乙二醇双酯反应合成了N-丁基-4-(氮杂-15-冠-5)-1,8-萘酰亚胺.用NMR,IR,MS等表征了产物结构.该化合物在二氯甲烷溶液中识别Li+和Na+,识别后吸收光谱和荧光光谱蓝移.

ZSM-5分子筛酸性修饰及探针分子表征

采用柠檬酸、硫醚、苯胺、二苯胺、磷酸二氢铵及硅油作为改性试剂对二甲苯异构化专用HZSM-5分子筛进行液相浸渍改性,结合甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、乙苯及间二异丙苯的脉冲反应表征,对各种改性手段的效果进行评估。各种改性方法对分子筛微孔体积和比表面积的影响很小,均减弱了酸性,对L酸的影响大于B酸。5种探针反应结果表明:柠檬酸改性强化了分子筛酸性,提高了歧化/异构化活性;磷酸二氢铵改性提高了分子筛歧化和脱乙基反应活性;苯胺、二苯胺、硫醚改性手段部分钝化了分子筛酸性,降低了歧化/异构化活性;随着改性剂分子尺寸的增大,钝化外表面酸性越明显,从而改变分子筛孔内外的酸位分布,产生不同程度的择形效果;硅油改性充分地钝化了外表面酸性,形成最明显的择形效应。

1,5-二芳基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-2-吡唑啉的合成及铜离子荧光探针行为

设计合成了4个1,5-二芳基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-2-吡唑啉化合物(4a～4d).其结构由IR,1HNMR,MS和元素分析确认.通过紫外光谱和荧光光谱研究了化合物对铜离子的选择性识别作用,结果发现,化合物4a～4d均可以选择性地识别铜离子,作为铜离子荧光探针,受常见离子干扰较小,选择性较高.

3,5-二溴水杨醛罗丹明B酰肼的合成及其在汞(Ⅱ)检测中的应用

合成了3,5-二溴水杨醛罗丹明B酰肼(RBDBH)荧光探针,并分别采用元素分析、红外光谱(IR)和核磁共振(NMR)进行了表征;系统探讨了汞(Ⅱ)对RBDBH探针的荧光增强效应的条件和应用,建立了测定汞(Ⅱ)的荧光光度新方法。实验表明:于5mL比色管中,依次加入25μL 1.000×10^(-3) mol/L RBDBH溶液、适量Hg^(2+)标准溶液、2.5mL乙腈、2.2mL pH 7.0的Tris-HCl缓冲溶液,用水定容至刻度,固定激发波长和发射波长分别为520、570nm,用1cm比色皿进行测定,汞(Ⅱ)浓度在0.36~4.4μmol/L范围内与其对应的荧光强度呈良好的线性关系,相关系数为0.997 4。方法检出限为0.30μmol/L。将RBDBH荧光探针应用于废水中汞(Ⅱ)的测定,结果与原子吸收光谱法(AAS)基本一致,相对标准偏差(RSD,n=5)为1.9%~2.3%。

1-乙酰基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-5-苯基-2-吡唑啉的合成及锌离子探针的研究

设计合成了1-乙酰基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-5-苯基-2-吡唑啉(4),测试了其紫外光谱和荧光光谱,研究了其对锌离子的选择性识别作用.结果表明,化合物4作为锌离子荧光探针,受常见离子的干扰较小,对于锌离子有着较高的选择性和较低的检出限.

1-乙酰基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-5-芳基-2-吡唑啉的合成及Cu^(2＋)荧光探针行为

设计合成了6个1-乙酰基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-5-芳基-2-吡唑啉化合物4a～4f.测试了它们的紫外光谱和荧光光谱,研究了其对铜离子的选择性识别作用.结果表明,化合物4f作为铜离子荧光探针,受常见离子干扰较小,对于铜离子有着较高的选择性和较低的检出限.

1,5-二芳基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-2-吡唑啉的合成及氟离子荧光探针行为

设计合成了8个1,5-二芳基-3-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-2-吡唑啉化合物4a～4h.它们的结构经由IR、1H NMR、MS和元素分析确认.测定了它们的紫外光谱和荧光光谱,研究了它们对氟离子的选择性识别作用,发现化合物4a,4c和4d均可选择性地识别氟离子,其中4a和4c作为识别氟离子的荧光探针,受常见离子干扰较小,选择性较高.

人5-羟色胺2c受体基因实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立5-羟色胺2c受体（5-HTR2c）基因mRNA表达水平的TaqMan real—time PcR检测方法。方法以β-actin为内参基因，根据GenBank中人5-HTR2c及β-actin基因序列，分别设计了2套特异性引物和TaqMan探针，接着对反应的退火温度、引物浓度、探针浓度、Mg^2＋浓度进行优化，然后以优化的条件建立相对定量标准曲线，并对该方法的稳定性进行了分析。结果5-HTR2c及β-actin基因的real—time PCR扩增效率分别为99.9％和100.0％；相对定量标准曲线的CT值线性范围分别为12．2～35．1和11．5～31．5，相关系数分别为0．999及1．000；批内及批问变异系数（8．0％。结论本研究所建立的针对5-HTR2c mRNA表达水平的Taqman real-time PCR检测方法具有扩增效率高、稳定性好等特点，为进一步探索5-HTR2c的功能及其mRNA表达水平的变化和各种疾病发生、发展的相关性提供了有用的方法学基础。

吡咯并[2,1,5-cd]中氮茚酰腙衍生物的合成及Cu^(2+)荧光探针行为

设计合成了吡咯并[2,1,5-cd]中氮茚酰腙衍生物6.测试了其紫外光谱和荧光光谱,研究了其对铜离子的选择性识别作用.结果表明,化合物6作为铜离子荧光探针,受常见离子干扰较小,对于铜离子有着较高的选择性和较低的检出限.

2,5-二溴甲基对苯二甲腈及其衍生物的合成方法研究

目的:对制备双苯乙烯类衍生物为荧光团的双光子荧光探针的中间产物2,5-二溴甲基对苯二甲腈及其衍生物的合成条件进行研究。方法:以对二甲苯为原料,通过芳环上的溴代、亲核取代和自由基反应等过程合成2,5-二溴甲基对苯二甲腈及其衍生物,然后通过柱层析方法进行纯化并用1HNMR确认其结构。结果:对合成工艺进行适当调整得到较好的效果。在2,5-二氰基对二甲苯的合成过程中,Cu CN与2,5-二溴对二甲苯的物质的量配比换成2.1:1、反应时间调整为48h时其产率提高。在2,5-二溴甲基对苯二甲腈的合成过程中未采用火焰枪辅助加热方法,而采用较温和的紫外灯照射方法。结论:通过反应物配比、加热温度和加热方法等的适当调节,摸索到简单易行的2,5-二溴甲基对苯二甲腈及其衍生物的合成方法。

新型5-氟尿嘧啶-吲哚菁染料偶合物的合成

以抗癌药5-氟尿嘧啶和近红外荧光探针IR780和IR783为原料,经取代、乙酸化和酰胺化反应合成了两种新型的双效抗肿瘤药物5-FU-780和5-FU-783,其结构经~1H NMR,^(13)C NMR,IR和HR-MS表征。

HZSM-5沸石分子筛孔容与孔径的分子探针测定

对于ZSM - 5沸石晶胞结构参数 ,目前只有静态的借助X光衍射法获得 ,本文着重用二甲苯的异构物等作分子探针 ,动态地估算了ZSM - 5沸石分子筛的孔径和孔容 ,在实际应用中 ,更加具有实际意义。

LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能力[(7.62±0.17)%]及Bax蛋白表达量(0.94±0.08),均高于MTB+pcDNA组[0.23±0.01、(3.82±0.21)%、0.23±0.01];miR-144-3p表达量(1.35±0.10)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(96.63±4.17)pg/ml;IL-6:(41.93±2.19)pg/ml;TNF-α:(118.85±6.03)pg/ml]、细胞增殖能力(0.96±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.81±0.07),均明显低于MTB+pcDNA组[2.48±0.14、(210.63±9.78)pg/ml、(125.52±4.86)pg/ml、(327.73±10.15)pg/ml、1.44±0.13、1.54±0.14],差异均有统计学意义(q值分别为33.281、47.247、26.107、24.671、57.204、61.448、62.087、10.970、17.266,P值均<0.001)。MTB+miR-144-3p inhibitor组细胞凋亡能力[(7.51±0.19)%]及Bax蛋白表达量(0.89±0.08),均高于MTB+inhibitor NC组[(3.86±0.22)%、0.24±0.02];miR-144-3p表达量(1.21±0.09)、炎性细胞因子水平[IFN-γ:(103.36±5.11)pg/ml;IL-6:(39.95±1.62)pg/ml;TNF-α:(120.26±6.67)pg/ml]、细胞增殖能力(0.92±0.08)及Bcl-2蛋白表达量(0.78±0.07),均低于MTB+inhibitor NC组[2.47±0.12、(214.45±10.03)pg/ml、(126.05±4.77)pg/ml、(326.69±8.33)pg/ml、1.46±0.12、1.54±0.12],差异均有统计学意义(q值分别为45.382、23.901、27.509、58.921、61.029、61.359、12.341、17.976,P值均<0.001)。结论:过表达LncRNA GAS5可能通过靶向下调miR-144-3p抑制MTB感染的巨噬细胞炎性反应,并诱导细胞凋亡。

米曲霉CPA毒素的5-氟色氨酸分子探针研究

米曲霉中往往含有完整的环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid,CPA)毒素生物合成基因簇。鉴于CPAs对食品安全的潜在威胁和其不同的存在形式,依据CPA的生物合成机制推测可将外源氟代前体探针化合物嵌入CPA生物合成途径,从而形成氟代物用于靶向检测。结果显示,米曲霉CPA合成途径可以接受5-F-L-Trp为底物并经CpaS酶合成5-F-cAATrp。由于该化合物并不是其下游催化酶CpaD的合适底物,因而无法启动下游后修饰步骤,造成了5-F-cAATrp在菌株中富集。利用CPA生物合成途径对代谢产物的富集效应实现对CPA毒素更加方便和特异性的检测,这对于建立新型CPA毒素检测方法,保障食品安全具有积极意义。

5'核酸外切酶特异性荧光探针的设计和应用

根据5'核酸外切酶与底物间相互作用的特点,设计开发了对其具有高选择性、高灵敏度的DNA荧光探针。该探针对5'外切酶的线性响应范围为0.005~0.1 U/m L,检测限为0.005 U/m L。方法可用于人血清样品中5'外切酶的一步快速测定,测得正常人血清中5'外切酶的含量为0.09±0.01 U/m L,回收率为100%±5%(n=3)。该研究为实时监测生物样品中5'核酸外切酶的含量变化提供了有力的工具,也将有助于深入研究核酸损伤的修复途径。

5-取代胞苷的合成与性质研究

本研究以3-丁炔-1-醇和苄溴为原料,合成3-炔-丁基苯甲醚,通过Sonogashira反应与5-碘胞苷合成得到(4-苄氧基)丁炔基-5-胞苷,其结构经核磁共振(1 H NMR和13 C NMR)以及质谱(MS)确证。最后通过研究极性、pH值以及粘度对其光谱性质的影响,考察其是否具有成为极性、pH值以及粘度荧光探针的潜在价值。结果表明,在不同溶剂中(4-苄氧基)丁炔基-5-胞苷均有很强发射性。随着极性增加,荧光强度出现减小趋势;荧光强度随着粘度的变化而呈上升趋势;并且插入寡聚核酸中能够保持荧光性,不对周围环境产生影响。说明其该化合物在一定程度上有成为荧光探针的价值。

5-氯水杨醛-罗丹明B荧光探针的合成及其识别性能研究

以水合肼、5-氯水杨醛和罗丹明B为原料,合成了5-氯水杨醛-罗丹明类衍生物探针L,目标化合物5-氯水杨醛罗丹明B联肼经核磁、红外光谱和质谱进行了表征,采用紫外光谱法和荧光光谱法研究了其与金属离子的识别性能。结果表明,该探针可选择性紫外识别Cu^(2+)和荧光识别Hg^(2+),在1.0~12.0μmol·L^(-1)范围定量检测Cu^(2+),R=0.9986,检出限为0.53μmol·L^(-1);在3.0~7.0μmol·L^(-1)范围定量检测Hg^(2+),580 nm处的荧光强度与Hg^(2+)浓度呈良好的线性关系,相关系数(R)=0.9974,检出限为0.56μmol·L^(-1)。Job’s曲线表明,探针L与Cu^(2+)、探针L与Hg^(2+)的结合物质的量的比均为1∶1,并对其响应机理进行了探讨。