体外研究人细胞色素P450 3A4等位基因多态性对药物代谢和药物相互作用的影响

目的体外研究药物对人细胞色素P4503A4(CYP3A4)(野生型,WT)及其4个突变等位基因重组酶CYP3A4*3(M445T)、CYP3A4*4(I118V)、CYP3A4*17(F189S)和CYP3A4*18(L293P)的抑制程度。方法采用荧光高通量法和HPLC法分别测定WT及其4个突变等位基因重组酶催化荧光底物——二甲基荧光素(DBF)脱烷基化和探针底物——硝苯地平氧化反应时的酶动力学参数;且通过测定大扶康、万络、西乐葆、酮康唑、地尔硫卓和维拉帕米的半数抑制浓度(IC50)值,确定6种药物对酶的抑制程度。结果除F189S外,其余4种重组酶均能催化DBF和硝苯地平反应生成相应的产物。各突变等位基因重组酶催化DBF反应的Km值(亲和力)与WT相当,M445T和L293P的内在清除率分别是WT的3.1和3.8倍(P<0.05),I118V是WT的1.3倍(P=0.1010)。各重组酶催化硝苯地平氧化反应的Km值均比WT小,I118V和L293P的内在清除率分别是WT的0.7和2.6倍(P<0.05),M445T与WT相当(P=0.7676)。6种药物对各重组酶的抑制程度强弱均为:酮康唑>地尔硫卓>维拉帕米>大扶康>西乐葆>万络;药物对各重组酶的IC50值大小为:WT<L293P<M445T<I118V。结论等位基因突变导致了酶动力学特征的改变和药物对酶抑制程度的不同,为进一步研究临床联合用药安全性奠定基础。

体外重组人细胞色素P450 2C9酿酒酵母表达体系的构建及其基因多态性对药物相互作用影响的初探

目的体外构建重组人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系,且利用该体系研究药物对CYP2C9基因多态性酶抑制程度的差异性。方法将CYP2C9*1(野生型)和通过定点突变PCR法获得的等位基因突变克隆CYP2C9*2(R144C突变体)和CYP2C9*3(I359L突变体)电穿孔转化酿酒酵母后,差速离心法制备酿酒酵母微粒体,蛋白免疫印迹法检测3种CYP2C9微粒体蛋白的表达;HPLC法检测CYP2C9*1与特异性底物双氯芬酸的反应,记录产物峰面积值,利用Prism Demo软件计算米氏常数(Km)值;利用荧光底物BOMCC对3个等位基因进行酶活性分析,分别计算Km、最大酶促反应速度(Vmax)和内在清除率。采用荧光高通量方法测定5种药物(甲苯磺丁脲、磺胺苯比唑、酮康唑、氟西汀和泰洛平)对酶的抑制程度。结果蛋白免疫印迹结果表明,3个等位基因均表达目的蛋白。CYP2C9*1代谢双氯芬酸的Km值为5.34±0.96μmol/L;以BOMCC为底物时,CYP2C9*1和CYP2C9*2的Km值分别为16.94±4.78、34.73±5.51μmol/L,Vmax分别为0.21±0.10、0.12±0.01pmol/(min·pmolP450),内在清除率分别为0.012±0.003、0.003±0.0001μl/(min·pmolP450);CYP2C9*3无催化活性。5种药物对CYP2C9*1的抑制程度:磺胺苯比唑>酮康唑>氟西汀>甲苯磺丁脲>泰洛平;对CYP2C9*2的抑制程度:磺胺苯比唑>甲苯磺丁脲>酮康唑>氟西汀>泰洛平。结论成功构建了重组人细胞色素CYP2C9及其多态性等位基因(CYP2C9*2、CYP2C9*3)酿酒酵母表达系统;初步建立了药物对CYP2C9基因多态性酶的抑制作用体外检测体系,为指导临床联合用药奠定了基础。

人细胞色素P4502D64个单核苷酸突变株活性及其与药物相互作用的体外研究

目的探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450CYP2D6酶活性及其与药物相互作用的影响。方法体外构建CYP2D6野生株(WT)和G169R、P34S、E410K、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒酵母中诱导表达,裂解并提取各酶的蛋白微粒体,用蛋白质印迹法验证其表达,再分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和3-[2-(N,N二乙基-N-甲铵)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)的米氏常数(Km)和最大酶促反应速度(Vmax)。以AMMC为底物对CYP2D6WT和V7M、G169R进行高通量药物抑制实验,所选药物包括已知的2D6抑制剂(奎尼丁、舍曲林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、阿米替林)和既非抑制剂又非底物的化合物(酮康唑、曲格列酮),求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度(IC50)。结果蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好。CYP2D6WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19.22、2.06μmol·L-1,Vmax值分别为154.53、21.60pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km值分别为8.04、11.49μl·min-1·mg-1。与CYP2D6WT比较,V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多(P<0.05),G169R和E410K均稍低,而P34S都要低很多(P<0.05);各突变株的Km值也发生了或多或少的改变。药物对CYP2D6WT和V7M和G169R的抑制程度排序均为奎尼丁>氯丙嗪>氟西汀>阿米替林>舍曲林>酮康唑/曲格列酮;药物对V7M和G169R的IC50值与CYP2D6WT的IC50值比值,奎尼丁分别为0.88和0.80,氯丙嗪0.54和0.80,氟西汀0.65和1.02,阿米替林0.85和0.71,舍曲林0.43和0.74。结论CYP2D6部分单核苷酸突变株的酶动力学特征与野生株有明显差异,单核苷酸替换可导致酶对药物抑制的敏感性发生变化。

不同产地生姜中姜酚类含量及最佳配比研究

目的确定姜酚提取物抗肿瘤活性的最佳配比。方法运用优选的生姜中姜酚类有效部位的制备工艺,研究不同产地的30个批次生姜中6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚的配比。通过体外宫颈癌Hela细胞抑制率IC_(50)试验,确定生姜中6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚的最佳配比关系。结果不同产地的30个批次生姜中6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚的含量差异较大,且体外宫颈癌Hela细胞抑制率试验的IC_(50)值相差较大。根据IC_(50)值确定6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚的比例范围为(76.5%~77.5%)∶(11.0%~12.0%)∶(11.0%~12.0%)时,抗肿瘤活性最强,为最佳配比关系。结论浙江磐安生姜的姜酚提取物对宫颈癌Hela细胞的IC_(50)值最低,可将该产地的姜酚提取物作为治疗宫颈癌的参考标准。

肿瘤抑素相关肽T42肽的纯化及抗肝癌细胞Hepg2活性的测定

目的:利用已成功构建的肿瘤抑素相关活性肽T42肽高效表达基因工程重组菌pTYB2-T42,提取纯化T42肽,检测其抗肿瘤活性,为研究T42肽抗肿瘤作用机制及新型抗肿瘤药物研发提供实验基础。方法:将pTYB2-T42大肠杆菌进行培养,IPTG诱导其产生融合蛋白,经几丁质柱亲和层析得到目的蛋白,葡聚糖凝胶G15去除DTT干扰,TricineSDS-PAGE鉴定T42肽,紫外分光光度法检测其浓度。MTT检测T42肽对细胞的生长增殖抑制作用,AO/EB荧光染色检测细胞凋亡形态学变化。结果:提取的T42肽其相对分子质量在5000左右,与理论值4600一致。MTT实验结果显示:T42肽作用下Hepg2细胞生长增殖受到抑制,且随着T42肽浓度的增加,Hepg2细胞存活率逐渐下降,其半数抑制浓度(IC50)为30mmol.L-1;AO/EB荧光染色结果表明:经过30mmol.L-1T42肽作用24h后的Hepg2细胞表现出细胞皱缩呈圆形或卵圆形,核皱缩变形且胞膜受损等一系列细胞凋亡特征性的形态变化。结论:T42肽具有显著的抗肿瘤细胞活性,可明显抑制人肝癌细胞Hepg2的生长增殖,并促进其凋亡。

黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus,TFA)在体外实验条件下对人肝癌细胞(BEL-7402)生长、繁殖的影响。方法:以BEL-7402细胞为实验对象,5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照,比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后,TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响。结果:数据表明TFA处理48h半数抑制浓度(IC50)为40μg/m l,5-FU为0.3μg/m l;TFA浓度达80μg/m l时可使BEL-7402细胞生长明显受挫(P<0.05),有丝分裂指数下降;与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多,胞浆出现大量空泡,核固缩。结论:TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用。

泰妙菌素的体外抑菌活性与一般毒性研究

采用二倍稀释法、改良寇式法和蓄积系数法测定了泰妙菌素的体外抑菌活性、急性毒性和蓄积毒性。体外抑菌试验结果显示,泰妙菌素对猪、鸡支原体、猪链球菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为0 015、0 125、0 5ug/mL,呈现较好的杀菌效果,且较磷酸泰乐菌素效果好;而对大肠杆菌、禽巴氏杆菌效果较差。一般毒性试验结果显示,泰妙菌素对小鼠、鸡的经口LD50分别为1 58g/kg和2 19g/kg。按国际急性毒性分级标准可判断为实际无毒,蓄积系数K>5,为弱蓄积性,且小鼠对其不具有耐受性。

不同尺寸三氧化二铁(Fe_2O_3)纳米粒子的细胞毒性及氧化作用的实验研究(英文)

目的从细胞半数抑制浓度IC50和氧化作用的角度探讨不同粒径大小纳米Fe2O3粒子细胞毒性的差异。方法将8、13和37nm3个不同尺寸的纳米Fe2O3粒子以不同剂量、作用时间作用于CHL细胞。用活细胞计数法求得各尺寸粒子的IC50,并绘制细胞生长抑制曲线。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化歧化酶(SOD)活性。结果3种尺寸的纳米粒子在一定浓度范围内,剂量与细胞抑制率呈现“剂量-反应”关系,超过这一范围后,量效关系消失;在量效相关的浓度范围内,三个尺寸纳米粒子的IC50分别为:IC50(8nm)=279.8585μg/mL,IC50(13nm)=254.739μg/mL,IC50(37nm)=561.237μg/mL;纳米Fe2O3粒子可引起CHL细胞的氧化应激反应。且与作用时间有关。但MDA、SOD值变化与纳米粒子尺寸、作用剂量之间无明显的量效关系。结论不同粒径的纳米Fe2O3粒子在细胞毒性上表现出一定的差异。同时,纳米Fe2O3粒子可引起CHL细胞的氧化应激反应。从时效性分析推论其细胞毒性与氧化性存在一定的关联。

丁香酚胚胎毒性评价:应用胚胎干细胞的实验模型

背景:丁香酚在医学及食品领域的应用越来越广泛,其药理学作用也不断被研究和发现。但是,对其毒性的研究尚未建立完整的数据库,特别是发育毒性及致畸性的安全性评价亟需完善。目的:建立胚胎干细胞实验模型的基础上,应用胚胎干细胞实验模型初步评价丁香酚的胚胎毒性。方法:体外培养小鼠成纤维细胞3T3和小鼠胚胎干细胞E14TG2a,MTT法检测阳性对照5-氟尿嘧啶、阴性对照青霉素G和受试物丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的细胞毒性,计算3种化合物对E14TG2a细胞和3T3细胞的半数生长抑制浓度值;采用悬滴-悬浮-贴壁法体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化,根据浓度-反应曲线计算3种化合物对E14TG2a细胞的半数分化抑制浓度值。利用胚胎毒性预测模型预测丁香酚的胚胎毒性。结果与结论:丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的增殖均有抑制作用,其半数生长抑制浓度值分别为(3.613±0.192)和(1.799±0.131)mg/L。丁香酚对E14TG2a细胞的心肌分化亦有抑制作用,其半数分化抑制浓度值为(3.501±0.158)mg/L。根据胚胎干细胞实验模型预测模型计算得出丁香酚为强胚胎毒性化合物。这为进一步评价丁香酚的安全性提供了研究数据。

罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1的影响

目的 CYP2E1是肝脏中主要的药物代谢酶,在肝脏疾病发生及发展中发挥重要的作用。本实验分别通过体内、体外实验,研究罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1活性和表达的影响,为评价罗布麻茶对肝脏的保护作用和药物的联合使用提供理论依据。方法将30只昆明小鼠随机分为空白对照组、黄酮提取物低剂量组和高剂量组(50和100 mg/kg),连续灌胃给药10天。采用探针药物法测定小鼠肝脏微粒体中CYP2E1催化对硝基苯酚代谢的活力。采用Western Blot法检测肝脏微粒体中CYP2E1蛋白的表达情况。体外抑制实验中,考察不同浓度的黄酮提取物对CYP2E1的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC_(50))值。结果灌服高剂量黄酮提取物(100 mg/kg)后,小鼠体内CYP2E1酶活性和表达量均显著降低,黄酮提取物对CYP2E1的IC_(50)值为128.4μg/mL。结论罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1有抑制作用。

克林沙星在体内外的抗菌活性

目的 :对克林沙星的抗菌活性进行研究。方法 :克林沙星的最小抑菌浓度 (MIC)检测采用试管肉汤稀释法 ,其半数有效量 (ED50 )的检测通过对感染小鼠的试验性治疗来实现。结果 :克林沙星对嗜麦芽窄食单胞菌以外的全部实验菌的MIC90 为0 .0 3～ 2 .0mg·L-1,低于单次口服克林沙星 2 0 0mg在血浆中的峰浓度 (2 .5mg·L-1) ;克林沙星的MIC值为环丙沙星的 1/ 8～ 1/ 2 ,ED50 为环丙沙星的 1/ 3～ 1。结论 :克林沙星体内体外的抗菌活性较环丙沙星为优 ,是一个广谱高效的新喹诺酮类抗菌药。

蒜头果蛋白对HeLa细胞体外抗肿瘤活性及稳定性研究

蒜头果是一种单种属稀有植物,仅分布在云南、广西部分地区.将蒜头果种仁捣碎,采用离心、(NH 4)2SO 4沉淀及色谱层析等方法得到蒜头果蛋白(Malanin).MTT法测定Malanin对人宫颈癌HeLa细胞体外抗肿瘤活性并测定其与广谱抗癌药物顺铂(DDP)联合用药的效果,再测定Malanin的稳定性及贮存方式.结果表明,Malanin对HeLa细胞具有明显的抑制作用,其IC 50值非常小,仅为9.55×10^(-6)g/L,明显比DDP(IC_(50)值为4.76×10^(-4)g/L)的抗肿瘤活性强,且Malanin和DDP联合应用具有协同抑制效应,二者联合应用药效会相加;Malanin的稳定性很好,不易失活,便于贮存在冰箱中.此研究为Malanin在肿瘤治疗方面的开发利用打下基础,也对云南植物资源的开发利用具有重要意义.

黄癸素对人口腔上皮样癌KB细胞株及化学诱导性仓鼠颊癌作用的研究

目的研究黄癸素对体外培养人口腔上皮样癌KB细胞及化学诱导仓鼠的口腔癌变抑制作用。方法 MTT法检测黄癸素对KB肿瘤细胞株的影响,计算24,48,72h的IC50。采用8周龄仓鼠,建立二甲基苯丙蒽(DMBA)诱发的颊囊癌模型,用黄癸素进行干预。结果黄癸素对KB细胞有抑制作用,24,48,72h的IC50分别为(12.74±0.13),(4.56±0.22),(2.88±0.11)mg/L;对KB细胞生长呈浓度、时间依赖性抑制作用。DMBA诱导的仓鼠在36,54,72mg/kg的黄癸素作用下,颊黏膜不典型增生与癌变的发生率有不同程度的降低,其中54,72mg/kg剂量组的病变总发生率分别为66.6%和53.3%,比模型组(86.6%)分别降低了20.0%和33.3%(P<0.01)。结论黄癸素能显著的抑制KB细胞生长,对化学物诱导的仓鼠口腔癌变也有抑制作用。

吉西他滨与厄洛替尼联合治疗胰腺癌的试验研究

目的探究吉西他滨与厄洛替尼联合使用对体外胰腺癌细胞的影响。方法2018年4月至2019年4月,在航天中心医院肝胆外科选用人胰腺癌细胞PANC-1对数生长期细胞。实验分组:厄洛替尼组、吉西他滨组、联合作用组(1∶2、1∶1、2∶1、3∶1),每组设12个培养皿。用八肽胆囊收缩素-8(Cholecystokinin octapeptide-8,CCK-8)法检测吉西他滨及厄洛替尼分别对PANC-1细胞的细胞毒性试验,并计算出两种药物分别对PANC-1细胞的半抑制浓度(50%Inhibiting Concentration,IC50)。根据两种药物对PANC-1的IC50值的影响,按照不同比例重复观察两种药物联合使用对细胞的细胞毒性情况,以中位药效法(Chou-Talalay法)分析两种药物的联合作用效果。用细胞平板克隆形成实验观察吉西他滨,厄洛替尼及两种药物联合作用对胰腺癌细胞PANC-1的细胞克隆形成的影响。结果在给予系列浓度的厄洛替尼和吉西他滨培养液培养胰腺癌PANC-1细胞后,在一定时间内,不同浓度的吉西他滨和厄洛替尼均能抑制PANC-1细胞增殖,并且抑制作用随浓度增加而增强,且一定浓度下,药物处理时间越长,抑制作用越强(128 n M厄洛替尼浓度72 h细胞抑制率为(76.72±5.51)%;320 nM吉西他滨浓度72 h细胞抑制率为(75.43±0.97)%。吉西他滨和厄洛替尼对胰腺癌PANC-1细胞生长的影响具有时间-浓度依赖性。通过IC50计算软件计算药物处理48 h时的IC50值,结果显示厄洛替尼对PANC-1的IC50值为12 nM,吉西他滨对PANC-1的IC50值为80 nM。厄洛替尼和吉西他滨联合使用可以增大细胞抑制率,减少单独使用吉西他滨的起效时间[厄洛替尼∶吉西他滨为3∶1时,72h细胞抑制率为(89.89±1.56)%,IC50值为(3.89±1.65)nmol/L]。随着细胞生长抑制率的增加,CI值逐渐下降。当细胞生长抑制率达到35%时,联合效应开始出现协同作用(小于0.9)。当细胞生长抑制率为40%时,CI下降(均小于0.5),具有的协同作用。同时,2∶1组曲线低于3∶1组曲线,说明厄洛替尼和吉西他滨浓度比为2∶1的协同效应优于浓度比3∶1。对照组细胞数为361;单独加厄洛替尼组细胞数为128;单独加吉西他滨组细胞数为114,联合作用组细胞数为118、98、76、80。结论吉西他滨和厄洛替尼单独使用均能在体外抑制人胰腺癌细胞的生长,发挥抑制胰腺癌肿瘤细胞增殖的作用。两种药物联合使用可以降低两种药物的使用剂量并起到药物的协同作用,达到并提高抑制胰腺癌肿瘤细胞增殖的效果。

高浓度有机氰废水的厌氧生化特性

在 30℃条件下 ,模拟厌氧消化反应设备条件 ,测定了丙烯腈、腈纶生产过程废水等各种高浓度有机氰废水的厌氧生物可降解性 (BD % )及废水中丙烯腈、乙腈、聚合物和氰化物这些主要污染物质的产甲烷毒性。结果表明 ,丙烯腈生产一段、二段急冷废水和腈纶生产工艺废水的厌氧生物可降解性能比一般石油化工工业废水的性能差得多。废水中主要污染物对产甲烷活性抑制较强 ,它们对厌氧菌产甲烷活性的 5 0 %抑制浓度 ( 5 0 %IC)及其毒素类型分别为 :丙烯腈 85mg/L ,代谢、生理性毒素 ;乙腈 32 0mg/L ,代谢毒素 ;聚合物 130 0mg/L ,代谢毒素 ;氰化物 5 0mg/L ,生理。

进口头孢替安酯体内外抗菌作用的实验研究

目的:评价进口头孢替安酯体内外抗菌作用。方法:进口头孢替安酯为试验药,头孢克洛、头孢氨苄、头孢克肟为对照药,测试它们对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肺炎克伯杆菌的体外抗菌活性,即最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);以小鼠为实验动物,用体内保护试验来测量各个药物的半数有效量(50%effective dose,ED_(50))。结果:对所选的三类细菌而言,较其它3种对照药(头孢克洛、头孢克肟和头孢氨苄),进口头孢替安酯有更高的MIC;体内抗菌实验中,进口头孢替安酯对大肠埃希菌ED_(50)低于其他3种对照药,对肺炎克雷伯菌及金黄色葡萄球菌的ED_(50)也仅高于头孢克肟,表现出较强的抗菌能力。结论:进口头孢替安酯对三类细菌的MIC高于其他3种对照药,对大肠埃希菌的体内抗菌活性高于其他3种对照药,对肺炎克雷伯菌及金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性仅次于头孢克肟。

抗心律失常药RP62 71 9对哺乳动物心室肌K^+ 电流的抑制

使用全细胞膜片箝技术 ,研究RP6 2 719对内向整流钾电流 (IK1)、瞬时外向钾电流 (Ito)和延迟外向整流钾电流 (IK)的作用 ,并探讨其抗心律失常作用的机制。实验结果表明 ,在指令电压为 - 10 0mV时 ,RP6 2 719可显著抑制豚鼠心室肌细胞IK1,半数抑制浓度 (IC50 )为 5 0± 1 0 μmol/L。RP6 2 71910 μmol/L在 + 40mV时对犬心室肌细胞Ito抑制率为 84 0± 4 4% ,IC50 为 1 2± 0 5 1μmol/L。在 + 40mV时 ,5 0 μmol/LRP6 2 719还可使豚鼠心室肌细胞IKstep减少 5 0 0± 8 3% ,IKtail减少 5 6 0± 4 9% ,IC50 分别为 4 2± 0 8μmol/L和 3 3± 0 75 μmol/L。提示RP6 2 719抗心律失常的离子机制与其对IK1、Ito及IK

表没食子儿茶素没食子酸酯联合叶酸杀伤胃癌细胞的实验研究

背景:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有抗肿瘤作用,对不同胃肠道肿瘤细胞系具有不同程度的、呈剂量依赖的杀伤作用。叶酸是一种水溶性维生素,叶酸缺乏可增加肿瘤的发生率,影响肿瘤细胞凋亡。目的:研究EGCG联合叶酸对胃癌细胞杀伤作用的影响。方法:以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测EGCG联合叶酸对胃癌细胞系MKN45、SGC7901、MKN28的杀伤作用。流式细胞仪测定两者对MKN45细胞周期的影响。结果:EGCG联合叶酸较EGCG单独作用对MKN45、SGC7901、MKN28细胞的杀伤作用增强,EGCG半数抑制浓度(IC50)分别降低28.4%、51.9%和40.0%。3种浓度的EGCG联合叶酸作用48h后,MKN45细胞的细胞周期分布与对照组和EGCG组相比无明显变化(P>0.05)。结论:EGCG联合叶酸较EGCG单独作用对胃癌细胞的杀伤作用增强,但对MKN45的细胞周期分布无明显影响。

人促黄体激素释放素-血管生成素重组毒素的表达及其体外抗肿瘤效应的实验

目的构建表达人促黄体激素释放素-血管生成素(luteinizing hormone releasing hormone-angiogenin,LHRH-PⅡ-ANG)重组毒素并研究体外抗肿瘤活性。方法利用分子生物学技术构建并在大肠杆菌中表达LHRH-PⅡ-ANG重组毒素,对以包涵体形式表达的重组毒素进行了复性。利用结晶紫法检测了复性重组毒素对人喉癌细胞系Hep2和CNE-2生长的影响并计算IC50值。结果利用基因工程技术,成功构建并在大肠杆菌中表达了LHRH-PⅡ-ANG重组毒素。重组毒素以包涵体的形式表达获得了表达。用梯度透析法对变性重组毒素进行了复性。复性后的重组毒素对正常细胞系没有毒性,而对人喉癌细胞系Hep2和CNE-2具有特异性杀伤作用,IC50值分别为21.37μg/ml和28.61μg/ml。结论成功构建了LHRH-PⅡ-ANG重组毒素,复性后的重组毒素对人喉表皮样细胞癌细胞Hep2和鼻咽癌细胞CNE-2-2的生长有明显的抑制作用。

聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P_(388)的抑制作用

目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,rL ASP PEG)利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (sodi umdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis ,SDS PAGE)观察其分子大小变化 ,四甲基偶氮唑盐(3 (4 ,4 dimcthylthioazol 2 yl) 2 ,5 diphenyl tetrazoliumbromide ,MTT)法和流式细胞仪 (flowcytometer,FCM )检测rL ASP PEG对体外培养的小鼠白血病细胞P3 3 8增殖作用的抑制作用 ,腹腔给药考察rL ASP PEG对小鼠移植性实体瘤P3 3 8抑瘤效果 ,透射电镜(transmissionelectronmicroscopy ,TEM )观察rL ASP PEG引起的肿瘤组织超微病理变化。结果 :SDS PAGE显示 ,rL ASP PEG的分子量大于rL ASP ;MTT实验表明 ,rL ASP PEG能抑制体外培养的小鼠P3 88白血病细胞的增殖 ,半数有效浓度 (inhibitoryconcen tration 5 0 % ,IC50 )为 2 .0 5 6IU·ml-1。FCM结果表明 ,rL ASP PEG主要将肿瘤细胞P3 88抑制在G0 +G1期 ,S期细胞减少。DBA 2荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL ASP PEG对移植性实体瘤P3 3 8有显著抑制作用 。