沉默H2AX食管癌ECA109中MDC1和53BP1斑点的变化

目的探讨沉默H2AX后在食管高分化鳞状细胞癌ECA109细胞中应答电离辐射时对MDC1和53BP1的影响。方法构建沉默H2AX的慢病毒载体,将慢病毒转染食管癌ECA109细胞并检测转染后的沉默效用;免疫荧光检测r-H2AX、MDC1和53BP1核内斑点的情况以及用Western blot检测这几种蛋白的表达。结果 1)成功构建了沉默H2AX的ECA109细胞。2)电离辐射可引起r-H2AX表达量的增加,不引起MDC1和53BP1表达的增加,同时电离辐射诱导产生的r-H2AX、MDC1和53BP1核内斑点变化的规律一致。3)沉默H2AX后的ECA109细胞核内r-H2AX、MDC1和53BP1斑点的数量明显减少,尽管MDC1和53BP1蛋白表达无变化。结论在ECA109细胞中H2AX是电离辐射后比较早的反应蛋白,可以调节下游MDC1和53BP1斑点的位置。

一种用于细胞实验的新型α粒子照射装置的建造和验证

整个装置由α粒子源、源支架和盖玻片盘等构成。根据理论推导可计算出样品中每个细胞接受到的α粒子数。利用Geant4程序包作为构建模型和模拟粒子输运的工具,还计算了盖玻片上细胞的剂量率分布,得出了盖玻片上离圆心不同距离处的剂量率分布图。最后,本研究还利用正常人皮肤成纤维细胞WS1,检测了用本照射仪照射细胞后30 min时的DNA双链断裂标记物-53BP1 foci的形成和照射后细胞的克隆生存曲线。结果显示,在盖玻片上不同位置处的细胞受照剂量存在差异,α粒子的剂量率与细胞与盖玻片圆心处的距离成反相关。与X-射线相比,α粒子造成的细胞死亡更严重,在SF为0.5时,其相对生物学效应RBE等于1.71。综合以上结果,本研究设计并建造的α粒子照射仪是一个制作成本较低、使用方便、剂量精确的照射装置,满足放射生物学中在细胞及分子水平上研究α粒子的生物学效应的需要。