MBL突变体在CHO细胞中表达及其产物分析

采用PCR技术,从质粒pMBLm54中获得含GGC54GAC点突变的甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因,将其插入真核表达载体构建重组表达载体pcDNA4/HisMax C-MBLm54,DNA测序验证序列正确后将其电转染入CHO细胞。以Zeocin筛选并维持培养转染后CHO细胞,获得2株稳定高效表达目的蛋白的单克隆细胞株。采用Ni^(2+)-NTA agarose层析柱纯化表达产物,获得54Asp突变MBL蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,54Asp突变MBL蛋白主要为相对分子质量为60000的成分,而重组野生型MBL蛋白则主要是相对分子质量为200000和>200000的分子。配体结合试验发现,天然MBL和重组野生型MBL能与甘露聚糖结合,而54Asp则否。结果表明,54Asp突变MBL蛋白不能形成正常的MBL结构单位和寡聚体,并进而影响其配体结合活性。