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合肥首例恙虫病病人血中东方体56kDa外膜蛋白部分基因的扩增及进化分析 被引量:5
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作者 操敏 耿美玲 +5 位作者 陈乐如 毛应华 谭伟龙 王长军 朱进 王忠灿 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2013年第1期31-34,共4页
采用恙虫病胶体金快速诊断试剂对安徽省合肥市一例不明原因发热病人血清进行检测,从该病人血块中提取DNA为模板,用恙虫病东方体特异性引物,PCR扩增出56kDa外膜蛋白部分基因,将扩增目的片段克隆至T载体进行测序并进行基因进化分析。... 采用恙虫病胶体金快速诊断试剂对安徽省合肥市一例不明原因发热病人血清进行检测,从该病人血块中提取DNA为模板,用恙虫病东方体特异性引物,PCR扩增出56kDa外膜蛋白部分基因,将扩增目的片段克隆至T载体进行测序并进行基因进化分析。结果显示,该病人血清中抗恙虫病东方体总抗体、抗东方体IgG及抗东方体IgM阳性;患者给予强力霉素治疗后迅速退热。采用PCR从病人血标本中扩增出1320bp东方体56kDa外膜蛋白基因片段,将基因片段测序结果在NCBI上做BLAST比对,显示该基因序列与昆明株和内蒙古株同源基因序列完全一致;进化树分析显示该序列与标准株Kuroki位于同一个分支。研究确认该发热病例为合肥市报告的首例恙虫病,其感染的恙虫病东方体为Kuroki型,推测合肥市可能为恙虫病新疫区。 展开更多
关键词 恙虫病东方体 56 kda外膜蛋白 序列分析 进化树
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恙虫病东方体Karp株56-kDa外膜抗原基因片段的原核表达及免疫原性研究 被引量:1
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作者 王园园 陈强 +1 位作者 于强 张丽娟 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期45-48,共4页
目的探讨恙虫病东方体56-kDa蛋白在大肠埃希菌中的表达及作为诊断性抗原的可行性。方法用PCR扩增恙虫病东方体Karp菌株编码56-kDa蛋白长约1 100bp的DNA,克隆至表达载体pET30a(+)。表达产物经SDS-PAGE、质谱分析及western blot鉴定分析... 目的探讨恙虫病东方体56-kDa蛋白在大肠埃希菌中的表达及作为诊断性抗原的可行性。方法用PCR扩增恙虫病东方体Karp菌株编码56-kDa蛋白长约1 100bp的DNA,克隆至表达载体pET30a(+)。表达产物经SDS-PAGE、质谱分析及western blot鉴定分析。重组蛋白质纯化后作为包被抗原,用方阵实验确定最佳浓度包被,ELISA法检测其与立克次体目16种成员及10种致病菌阳性血清的反应性。用此重组蛋白质免疫小鼠后制备抗血清,分别用ELISA及间接免疫荧光法(IFA)检测抗血清的效价。结果重组质粒经PCR及测序分析证明,56-kDa外膜抗原的基因片段以正确的读码框连入到pET30a(+)质粒载体中,SDS-PAGE结果表明重组蛋白质在约46-kDa处有表达的目的条带,western blot分析显示该条带可与1∶1 600稀释的兔抗Karp血清反应,证实其具有免疫活性。质谱分析鉴定该蛋白质为恙虫病东方体56-kDa蛋白;方阵滴定确定选择抗原的最佳稀释度为1∶1 600,特异性分析结果表明,重组蛋白质除与查菲埃立克体、嗜吞噬细胞无形体及五日热巴尔通体存在弱交叉反应外,与其他细菌均无交叉反应。IFA及ELISA检测表明抗血清效价可达1∶1 600。结论构建的重组蛋白质可以作为恙虫病东方体快速诊断的抗原。 展开更多
关键词 恙虫病东方体 Karp株 56-kda外膜蛋白 原核表达 免疫原性
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恙虫病立克次体Giliam株56-kDa蛋白基因的克隆及其5'-和3'-端序列分析 被引量:1
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作者 牛华 陈香蕊 +3 位作者 于强 张永国 张雪颖 程聪 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期6-8,共3页
目的克隆恙虫病立克次体Giliam株56-kDa蛋白基因,作为优化PCR反应时的标准模板和为Giliam株56-kDa蛋白基因的表达作准备。方法利用PCR反应和T载体分别扩增和克隆目的基因片段,并用序列分析方法鉴定克... 目的克隆恙虫病立克次体Giliam株56-kDa蛋白基因,作为优化PCR反应时的标准模板和为Giliam株56-kDa蛋白基因的表达作准备。方法利用PCR反应和T载体分别扩增和克隆目的基因片段,并用序列分析方法鉴定克隆基因的正确性。结果克隆的基因为恙虫病立克次体Giliam株56-kDa蛋白基因。结论利用PCR反应和T载体可以从少量的标本中,高效获得高纯度的目的基因。 展开更多
关键词 恙虫病 立克次体 56-kda蛋白 克隆 Gilliam株
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恙虫病东方体56 kDa抗原基因片段在不同载体的表达 被引量:4
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作者 邓艳琴 严延生 +2 位作者 何似 翁育伟 陈亮 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期973-977,共5页
目的 构建恙虫病东方体56kDa表面抗原基因(sta56)片段在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达sta56重组抗原并比较不同表达系统对sta56的表达效果。方法 从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组克隆,扩增出不同长度的截短的sta56片... 目的 构建恙虫病东方体56kDa表面抗原基因(sta56)片段在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达sta56重组抗原并比较不同表达系统对sta56的表达效果。方法 从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组克隆,扩增出不同长度的截短的sta56片段,定向插入pPROEX HTb及pET30a载体,转化大肠埃希菌DH5a或BL21(DE3),IPTG诱导表达,应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白表达情况,应用蛋白印迹(WB)方法分析重组抗原的活性。结果 成功构建含sta56不同长度片段的重组表达质粒pHTbOt957、pHTbOt498、pHTbOt342和pETOt957、pETOt498、pETOt342,各重组子均可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,SDS-PAGE显示各表达重组子表达不同分子量的重组蛋白,WB证实各重组蛋白均能被恙虫病患者阳性血清所识别。结论 恙虫病东方体Karp株sta56基因可在大肠埃希菌获得高效表达,pET30a对sta56的表达效果优于pPROEX HTb;重组蛋白具有免疫反应性,纯化后可用作免疫诊断抗原。 展开更多
关键词 恙虫病东方体 HT 表达 重组抗原 Karp株 ET 重组蛋白 原基 重组子 A抗原
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