咳喘落协同地塞米松抑制哮喘大鼠白细胞介素4,5mRNA表达

目的 探讨咳喘落协同地塞米松拮抗支气管哮喘气道变应性炎症作用的分子机制。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)半定量地测定了不同剂量的咳喘落对哮喘大鼠肺组织和外周血单个核细胞(PBMC)中IL 4mRNA、IL 5mRNA表达的影响。结果 哮喘时大鼠肺组织和PBMC中IL 4mRNA与IL 5mRNA表达均增强 ,显然高于空白对照组 (P <0 .0 1) ,经大剂量咳喘落治疗后 ,其表达同时显著降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,与地塞米松组无差异 (P >0 .0 5 ) ,小剂量咳喘落治疗对哮喘大鼠肺组织中IL 4mRNA的表达有显著的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,但小剂量咳喘落加地塞米松对哮喘大鼠肺组织和PBMC中IL 4mRNA、IL 5mRNA表达的抑制显著强于大剂量咳喘落和地塞米松 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 咳喘落能够同时降低大鼠肺组织和PBMC中IL 4和IL 5基因转录 ,减少其生物合成 ,进而抑制嗜酸性粒细胞的聚集、活化 ,发挥其抗气道炎症的作用 。

新生兔给予不同喂养对小肠各段刷状缘上SGLT1mRNA、GLUT5mRNA、LPHmRNA和SImRNA表达的调节

目的 了解新生兔出生后给予不同喂养对小肠刷状缘上SGLT1mRNA、GLUT5mRNA、LPHmR NA和SImRNA表达的影响。方法 应用RT PCR方法半定量评价SGLT1、GLUT5、LPH和SI基因在mRNA水平的表达量。结果 与母兔乳喂养组相比 ,5 %果糖、5 %葡萄糖和无乳糖配方乳喂养对SGLT1mRNA的表达没有调节作用 ,但可以使在十二指肠和小肠上段的SImRNA的表达量依次增加 (然各组之间并无统计学意义 )。此外 ,这 3种喂养方式亦可以使整个小肠的GLUT5mRNA表达量增加 ,其中给予 5 %果糖喂养的新生兔小肠上段的GLUT5mRNA表达量明显高于母兔乳喂养组。与此相反 ,以上 3种非母兔乳喂养方式却使小肠下段的LPHmRNA的表达量下降 ,尤其是生后无乳糖配方乳喂养方式可以使小肠下段的LPHmRNA表达量明显低于母兔乳喂养方式。结论 新生兔出生后给予不同喂养可以影响小肠上GLUT5mRNA和LPHmRNA的表达 ,但这种影响具有空间特异性。

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因CcL5mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病肾病(DN)大鼠和中药复方肾消康治疗组大鼠肾脏组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测CcL5mRNA在各组大鼠肾脏组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选:实验大鼠分为空白组、模型组、治疗组。从肾脏组织中抽提mRNA,由纯化的总RNA合成双链cDNA,并将其纯化,以生物素标记cRNA合成,纯化和质控体外转录(IVT)产物,片断化cRNA,然后进行杂交、洗脱、染色、芯片扫描并用软件进行统计分析,筛选出差异表达数据。不同肾脏组织样本用灰度扫描图和杂交信号强度散点图表示。(2)荧光定量RT-PCR的检测: RNA样品反转录,荧光定量PCR反应。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的CcL5mRNA进行报告。糖尿病肾病模型组肾脏组织基因CcL5mRNA表达上调,中药复方肾消康治疗组肾脏组织基因CcL5mRNA表达下调。结论:CcL5mRNA在糖尿病状态下肾脏也有表达,并且表达上调,而中药复方肾消康可使其下调,这也是中药复方对糖尿病性肾组织损伤具有保护作用的机制之一。

雷公藤对哮喘的治疗作用及对痰液中嗜酸细胞IL-4和IL-5mRNA表达的影响

目的探讨雷公藤对哮喘的治疗作用及对痰液中嗜酸细胞(EOS)IL-4和IL-5mRNA表达的影响。方法12例哮喘患者的诱导痰标本,与雷公藤内酯醇(10-7mol/L)共同培养48小时设为雷公藤组(12例),单独培养48小时设为空白组(12例),健康自愿者痰液为正常对照组。采用斑点分子杂交检测EOS IL-4、IL-5mRNA表达。结果哮喘患者痰液中EOS浸润密度与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01);雷公藤组与空白组EOS IL-4、IL-5mRNA表达水平比较,差异有显著性意义(P<0.01),空白组与正常对照组EOS IL-4、IL-5mRNA表达水平比较,差异有显著性意义(P<0.01);雷公藤组与正常对照组EOS IL-4、IL-5mRNA表达水平比较,差异无显著性意义(P>0.01)。结论IL-4、IL-5mRNA表达增加可能是导致哮喘嗜酸气道炎症的原因,雷公藤内酯醇能抑制IL-4、IL-5mRNA表达,可能为哮喘抗炎治疗的机制之一。

局灶脑缺血大鼠代谢型谷氨酸受体5mRNA表达及意义

目的观察局灶脑缺血大鼠脑组织中代谢型谷氨酸受体5mRNA(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5 mRNA)在脑缺血不同时段的表达及其动态变化的规律,探讨其在急性脑缺血中变化的意义。方法55只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血1、3、6、12及24h组(手术组)及其相对应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠MCAO模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术判断神经元阳性表达的强弱,用计算机图像分析系统检测各组mGluR5 mRNA表达的灰度值及阳性细胞数。结果各手术组mGluR5 mRNA表达均高于假手术对照组及正常对照组,与正常对照组相比,缺血1h其表达即有升高,至6h达高峰。而假手术对照组与正常对照组相比无统计学意义。结论急性脑缺血可引起mGluR5 mRNA表达上调,提示mGluR5参与了局灶性脑缺血损伤,可能促进了缺血性脑血管病的发展。

哮喘患者诱导痰中嗜酸细胞IL-4和IL-5mRNA表达

目的 :探讨IL - 4、IL - 5在哮喘诱导中痰嗜酸细胞 (EOS)炎症的作用。方法 :斑点分子杂交检测哮喘患者诱导痰中嗜酸细胞IL - 4、IL - 5mRNA表达。结果 :哮喘患者痰液中EOS细胞浸润密度增加 ,IL - 4、IL - 5mRNA表达比正常人明显升高 (p<0 .0 1) ,而正常对照组无明显变化 (p >0 .0 5 )。结论 :IL - 4、IL - 5mRNA表达增加可能在导致哮喘EOS气道炎症的过程中起信号途径作用。

苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CCL5、CCR5及CCR5mRNA表达的影响

目的:观察苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血清中趋化因子CCL5和脊髓中趋化因子CCL5相应的受体(CCR5)及CCR5mRNA表达的影响,探讨苦参素对EAE大鼠的防治机制。方法:用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂混合制成抗原乳剂,诱导EAE模型,将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、苦参素低剂量组(150mg·kg^(-1))、苦参素高剂量组(250mg·kg^(-1)),苦参素高、低剂量组均连续腹腔给药16d,同期正常组和模型组腹腔注射等量生理盐水,观察大鼠体质量变化,神经功能学评分,进行HE及C-2R-BG病理染色,用ELISA法测定大鼠血清中CCL5的含量、免疫组化法检测大鼠脊髓组织中CCR5的阳性表达、RT-PCR法检测脊髓中CCR5mRNA的表达。结果:苦参素高、低剂量组大鼠的体质量均高于模型组(P<0.05),神经功能学评分,炎症浸润和髓鞘脱失评分,血清中CCL5的水平,脊髓中CCR5、CCR5mRNA的表达均低于模型组(P<0.05),且高低剂量组有组间差异(P<0.05)。结论:苦参素对EAE大鼠具有一定的防治作用,其作用机制可能与下调大鼠CCL5、CCR5及CCR5mRNA的表达有关。

发育调控基因Pax5 mRNA在膀胱癌中的表达及意义

了解发育调控基因Ｐａｘ５在膀胱肿瘤中的表达，探讨其在膀胱肿瘤发生发展中的作用．采用逆转录ｍ（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交方法检测１３例膀胱移行细胞癌（ＴＣＣ）组织、４例癌旁组织、３例正常组织和３种癌细胞系（膀胱移行细胞癌。结肠腺癌、肺癌）中 Ｐａｘ５ ｍＲＮＡ的表达．结果显示，３种癌细胞系中均有Ｐａｘ５ｍＲＮＡ表达； １３例膀胱肿瘤组织和４例癌旁组织中Ｐａｘ ５ｍＢＮＡ阳性表达分别为１０例和３例，阳性率为７７％和７５％．３例正常组织中仅有 １例检出 Ｐａｘ５ ｍＲＮＡ表达．Ｐａｘ５基因在膀胱肿瘤组织中的表达提示Ｐａｘ５调控通路可能在膀胱肿瘤发生发展中具有重要作用．

RCC5基因在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的明确RCC5在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达水平及其对肾癌患者预后的影响。方法通过荧光定量PCR方法对54对ccRCC患者标本(包括癌组织和癌旁正常组织)的RCC5mRNA进行分析;并运用免疫组化对82对配对的癌组织和癌旁正常组织切片及161例癌组织切片进行染色;运用统计学方法分析RCC5的表达量和患者的临床特点之间关系。结果荧光定量PCR结果显示92.59%(50/54))的肾癌组织中RCC5表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.001);82对癌组织及癌旁正常组织切片免疫组化显示,92.68%(76/82)的癌组织RCC5表达水平高于癌旁正常组织(P<0.001);同时发现RCC5的表达水平与性别、肿瘤直径、病理分期、分级、TNM分期和复发率相关;RCC5高表达的患者预后一般较低表达者差,多元分析显示RCC5表达上调是ccRCC的独立预后因素。结论 RCC5的表达水平和ccRCC预后之间存在明显相关性;研究发现RCC5表达上调的患者预后较差,RCC5可能是一个新颖并且有临床价值的预后标志物。

生长抑素受体亚型mRNA在胃癌组织中的表达

目的检测生长抑素受体（Somatostatin receptor, SSTR）各亚型在人胃癌组织及其癌旁组织中分布和表达,并探讨其表达与胃癌的临床及病理学特点之间的关系及其意义.方法：随机收取经病理确诊的50 例人胃癌组织及其癌旁组织,并收集其相关临床病理资料,采用RT-PCR 法检测SSTR1～5 各 mRNA 亚型在胃癌组织及其癌旁组织中表达,采用捷达810 分析软件对结果进行相对定量分析.结果：50 例胃癌患者组织中均有SSTR 基因的表达,SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4 和SSTR5mRNA 亚型表达阳性率在胃癌组织中分别为：32%（16/50）、100%（50/50）、70%（35/50）、68%（34/50）和68%（34/50）;在癌旁组织中分别为：40%（20/50）、 92%（46/50）、 84%（42/50） 、46%（23/50）、 38%（19/50）;SSTR4 和SSTR5 mRNA 亚型在胃癌组织中的表达高于癌旁组织的表达（P〈0.05）;采用相对定量分析, SSTR2、SSTR4 和SSTR5 mRNA 亚型在胃癌组织中的表达高于癌旁组织中的表达（P〈0.05）.SSTR3 mRNA 在高/中分化胃癌组织中的表达高于低分化胃癌组织中的表达（P〈0.05）.结论：胃癌组织中均有一种以上生长抑素受体亚型基因的表达,其中以SSTR2 mRNA 表达率为最高,为临床选择应用SSTR 高特异性和高亲和性SSTA 治疗胃癌提供依据.SSTR3 mRNA 的表达与临床病理特征有关,其可能在胃癌的发生、发展过程中发挥一定的作用.

基于“肺与大肠相表里”研究清半夏多糖对哮喘模型大鼠结肠水液代谢的影响

目的观察清半夏多糖对哮喘模型大鼠结肠水通道蛋白5(Aquaporin 5,AQP5)mRNA表达的影响,探讨清半夏多糖作为"大分子"多糖类成分,基于"肺与大肠相表里",对哮喘大鼠结肠水液代谢调节的作用机制。方法 48只SPF级Wistar大鼠,随机分至正常对照组、哮喘模型组、清半夏多糖高、中、低剂量组。采用鸡卵清蛋白(OVA)诱导致敏、激发,建立哮喘大鼠模型。PowerLab数据采集分析系统收集各组大鼠血氧饱和度,记录造模前后体质量变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清、肠黏液中核因子κB(NF-κB)的含量;苏木素-伊红(HE)、高碘酸-雪夫(PAS)染色观察结肠组织病理改变和杯状细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测结肠AQP5 mRNA变化。结果哮喘模型组大鼠的血氧饱和度显著降低(P<0.01);阳性药组和清半夏多糖中剂量组大鼠血氧饱和度均有显著升高(P<0.01);哮喘模型组大鼠体质量变化不大,而正常对照组和阳性药组体质量持续显著上升(P<0.01),清半夏多糖各组大鼠体质量有上升趋势。ELISA结果显示,哮喘模型组大鼠血清和肠黏液NF-κB含量显著升高(P<0.01);而阳性药组、清半夏多糖高剂量组能显著降低哮喘模型大鼠血清、肠黏液的NF-κB的含量(P<0.01,P<0.05),清半夏多糖中剂量能显著降低哮喘大鼠肠黏液中NF-κB的含量(P<0.01)。HE染色结果发现,与正常对照组比较,哮喘模型组大鼠结肠组织出现明显病理改变,阳性药组、清半夏多糖各组与哮喘模型组比较具有缓解作用;PAS染色结果发现与哮喘模型组比较,阳性药组、清半夏多糖各组结肠杯状数量明显增多、染色加深。qPCR结果显示,阳性药组,清半夏多糖各组与哮喘模型组比较,AQP5 mRNA均有明显降低(P<0.01)。结论基于"肺与大肠相表里"理论,研究发现清半夏多糖可能通过对哮喘模型大鼠结肠AQP5 mRNA的表达从而影响结肠黏液生成,进而干预哮喘进程,说明清半夏多糖可能是原药材发挥"燥湿化痰"的物质作用基础。

小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

目的 观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法 采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果 ①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上皮的套层细胞内 ;②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5mRNA阳性信号 ,主要定位于神经元的胞浆与核周 ,于新生期前后表达达高峰 ;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团。在老年期上述区域CDK5表达均有减弱 ,部分区域呈阴性。结论 表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段 ,且主要参与了神经系统的早期发育 ;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节。

鸡传染性支气管炎病毒LX4株mRNA_5和mRNA_6 cDNA的分子特征

本研究参照已发表的IBV基因序列设计合成了一对引物,经反转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chin Reaction,RT-PCR)技术扩增得到我国地方分离株LX4 mRNA_5和mRNA_6的全部cDNA大小约1.7kb的片段。将该片段克隆并进行序列测定,与国内外部分参考毒株的相应序列比较分析发现:LX4 5a基因与已发表的国内外IBV毒株之间同源性很低,而这些参考毒株间5a基因同源性却很高(推导的氨基酸同源性在90％以上)。5b基因与国内分离株D971同源性最高。在所选的12株参考毒株中,LX4 N基因推导氨基酸同源性与国内分离株SD/97/02最高(94％),与HB次之(93％),与其他毒株核苷酸和推导氨基酸同源性在89％和92％以下。对已报道的N基因所编码蛋白的三个保守碱性区同源性比较发现,LX4在第66-88位与Beau、M41、H52及FIB同源性均为100％。在第181-234位,推导氨基酸同源性与SD/97/02最高(94％)。在第334-373位推导氨基酸同源性与H120和ZJ971推导氨基酸同源性均为93％,与其他毒株在82％以下。同时还发现在c末端350-409位,LX4与H120推导氨基酸的同源性为100％,与HB次之(98％),与其他毒株在95％以下。以上研究结果提示:我国地方分离毒株LX4 mRNA_5和mRNA_6 cDNA序列与国内其他分离株最高,表明与国内其他分离株具有较近的?

CDK5基因修饰神经干细胞体系的建立和分化特性的研究

目的建立携带CDK5与绿色荧光蛋白(GFP)的神经干细胞体系并观察CDK5对神经干细胞的作用。方法采用PCR、分子克隆与测序等技术成功构建CDK5-pEGFP表达质粒;并通过基因转染等技术将其转染入体外培养的神经干细胞中。结果(1)CDK5-pEGFP表达质粒经酶切、测序鉴定重组成功。(2)转染后神经干细胞分化24h后观察到表达CDK5的GFP荧光细胞已显示清楚的短突起,而对照组细胞的突起不明显;72h后表达CDK5的GFP细胞突起增长尤为明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);GFP阳性细胞体积也增大,突起明显增多、加粗。结论CDK5的表达可促进分化后神经细胞突起的生长和延长,并能加快神经细胞的形态成熟。

艾灸对多因素致慢性疲劳大鼠海马5-HT1A受体mRNA表达干预的实验研究

目的:观察艾灸方法治疗慢性疲劳综合征模型大鼠的效果,并从对大鼠单胺类神经递质含量的影响探讨其机理。方法:通过联合捆绑束缚、昼夜颠倒、疲劳游泳、空瓶刺激等方式建立慢性疲劳综合征模型,设立正常对照组、模型组和艾灸组,艾灸组每日予艾灸治疗,其余两组只作常规抓取捆绑,治疗28天。分别采用行为学指标检测大鼠慢性疲劳指征,并检测大鼠海马组织5-羟色胺含量及其受体1A亚型mRNA表达的情况。结果:艾灸组在行为学各项指标观察成绩都明显好于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),而5-羟色胺含量以其受体mRNA的表达都比模型组有明显地提高(P<0.05)。结论:艾灸可以有效地改善模型大鼠慢性疲劳症状,并且很可能是通过提高海马中5-羟色胺含量的途径来达到治疗效果。

5α还原酶抑制剂对老年大鼠5α还原酶mRNA表达的影响

目的 探讨5α还原酶抑制剂对老年大鼠5α还原酶mRNA表达的影响.方法 取50只健康的20周龄雄性SPF级SD大鼠,分为依立雄胺组（20只,喂饲依立雄胺3mg·kg^-1·d^-1）、非那雄胺组（20只,喂饲1 mg·kg^-1·d^-1）、正常对照组（10只,喂饲0.9%氯化钠溶液）.检测所有大鼠前列腺组织中Srd5a1、Srd5a2基因及bcl-2的表达情况,并作组间比较分析.结果 依立雄胺组、非那雄胺组、正常对照组Srd5a1的表达相对量分别为1.46±1.98、2.18±2.53、1.97±2.43,Srd5a2的表达相对量分别为1.31±0.37、1.29±0.47、1.05±0.36,bcl-2的表达分别为148±42、152±59、216±52;3组间Srd5a1、Srd5a2基因的表达并无明显差异（P〉0.05）,而依立雄胺组及非那雄胺组bcl-2的表达均明显低于正常对照组（均P〈0.05）,但依立雄胺组与非那雄胺组并无明显差异（P〉0.05）.结论 5α还原酶抑制剂可以减少凋亡抑制因子bcl-2的表达,从而促进前列腺增生组织细胞凋亡的发生,但可能并不能影响5α还原酶mRNA的表达.

急性心肌缺血期大鼠丘脑束旁核神经元5-HT_(1A)受体mRNA表达的变化

目的:观察急性心肌缺血期大鼠丘脑束旁核(para fascicularnucleus,Pf)神经元5-HT1A受体mRNA不同时点表达的变化,探讨5-HT1A受体在Pf痛觉整合和调制中的作用。方法:体重260～280g的健康成年雄性SD大鼠24只,随机分为4组,即非冠状动脉扎闭组(C组)、扎闭冠脉(coronaryarteryocclusion,CAO)1h组(CAO1h组)、扎闭冠脉3h组(CAO3h组)和扎闭冠脉6h组(CAO6h组)。C组仅在开胸后冠状动脉左前降支下穿线不予结扎,CAO各组则给予扎闭。在预定的时点处死动物,取含有Pf的脑片行原位杂交。杂交结果检测采用IDA-2000数码显微图像分析系统进行半定量分析。结果:CAO后1、3、6h大鼠Pf神经元5-HT1A受体mRNA的表达均较C组明显增强(P<0.05),随缺血时间延长其表达有逐渐增加的趋势,在CAO后6h表达最强(P<0.05)。结论:急性心肌缺血可诱发大鼠Pf神经元5-HT1A受体mRNA表达增强,5-HT1A受体参与急性心肌缺血伤害性刺激在Pf的调制。

吗啡对急性心肌缺血期大鼠丘脑束旁核神经元5-HT_(1A)受体mRNA表达的影响

目的:观察吗啡对急性心肌缺血期大鼠丘脑束旁核神经元5-HT1A受体mRNA表达的影响,探讨吗啡对急性心肌缺血伤害性刺激的作用及其机制。方法:将体重260g^280g的健康成年雄性SD大鼠18只,随机分为三组:对照组,即非冠状动脉扎闭组(C组),开胸后冠状动脉左前降支下穿线,不结扎;扎闭冠脉组(CAO组),扎闭冠脉6h;吗啡+CAO组(MCAO组),CAO前15min静脉注射吗啡1.25mg/kg,然后CAO6h。CAO6h处死动物,取含有大鼠丘脑束旁核的脑片行原位杂交。5-HT1A受体mRNA杂交结果检测采用IDA-2000数码显微图像分析系统进行半定量分析。结果:与C组比较,CAO组大鼠丘脑束旁核5-HT1A受体mRNA的表达增强(P<0.05),与CAO组比较,MCAO组5-HT1A受体mRNA表达降低(P<0.05)。结论:急性心肌缺血可诱发大鼠丘脑束旁核5-HT1A受体mRNA表达增强,5-HT1A受体参与急性心肌缺血伤害性刺激在丘脑束旁核的调制,吗啡可抑制急性心肌缺血诱发的大鼠丘脑束旁核5-HT1A受体mRNA的表达增强。

慢性应激对大鼠海马区5-HT2AR及其mRNA表达的影响

目的:探讨慢性应激对大鼠海马区5-HT2A受体及其mRNA表达的影响。方法:选择open-feild法评分相近的20只成年SD大鼠随机分为对照组和模型组。应用分养和长期不可预见的中等强度应激造成大鼠抑郁模型,以免疫组化法和原位杂交法检测大鼠海马5-HT2AR及其mRNA的表达。结果:(1)模型组体重增长14d时明显低于对照组。(2)模型组水平活动和垂直活动于第7天后明显降低;糖水消耗量于第14天后明显减少。(3)模型组海马5-HT2AR及其mRNA表达均低于对照组(均P<0.01)。结论:慢性应激能诱发大鼠轻度抑郁,其机制与海马5-HT2AR及其mRNA的低表达有关。