小干扰RNA对人乳头状瘤病毒6bE7基因表达的沉默作用

目的研究靶向人乳头状瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚体小干扰RNA（siRNA-HPV-66E7）对靶基因表达的沉默作用。方法建立并筛选稳定表达HPV-6bE7基因的B16和293T转染细胞株，用脂质体转染法将体外合成的siRNA-HPV-6bE7转染上述细胞株，采用实时荧光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA表达情况。结果用不同浓度的siRNA-HPV-6bE7转染细胞48h，50nmol／L浓度对B16细胞中靶基因表达的抑制作用最强（抑制率87．05％），1nmol／L抑制作用较低（9．14％）；而在293T细胞，10nmol／L的siRNA对靶基因表达的抑制效应最大（78．87％），1nmol／L仍有一定抑制作用（46．92％）。50nmol／LsiRNA-HPV-6bE7转染B16细胞后，靶基因的mRNA表达在24h内开始受抑制（32．47％），48h作用最强（74．72％），96h作用很低（8．91％）；25nmol／L和10nmol／L的siRNA转染293T细胞后，均在24h内起效（26．66％、20．31％），抑制作用至少能维持72h（65．93％、35．23％）。结论siRNA-HPV-6bE7对B16和293T细胞外源性靶基因表达均有较强的特异性沉默作用，在不同细胞株达到最大抑制效应的siRNA浓度不同，但时效曲线的变化趋势基本一致，siRNA均在24h内起效，48—72h达到高峰，抑制作用至少能维持72h。本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据。