CYP3A7与MDR1基因多态性与镇痛效应的关系研究

目的 分析CYP3A7、MDR1基因多态性与镇痛效应之间的关系。方法 回顾性分析87例行腹部手术患者的一般临床资料,术后均采用舒芬太尼镇痛,对影响患者术后镇痛效应的相关因素进行分析。结果 87例行腹部手术的患者中,术后轻度疼痛(轻度疼痛组)45例、术后中重度疼痛(中重度疼痛组)42例。两组的年龄、性别、美国麻醉医师协会(ASA)分级以及CYP3A7基因多态性比较差异无统计学意义(P>0.05);两组MDR1 2677G>T/A基因多态性比较差异有统计学意义(P<0.05)。将轻度疼痛组与中重度疼痛组患者具有统计学意义的单因素纳入Logistic回归模型进行多因素分析,结果表明MDR1 2677G>T/A GG、GA、TA、AA为术后镇痛效应的影响因素(OR=0.998、1.078、1.044、1.038,P<0.05)。结论 MDR1基因多态性对患者术后镇痛效应可产生影响,临床在制定镇痛方案时应该综合考虑患者基因型等相关因素制定个体化的镇痛治疗方案。

化石利胆汤对ERCP术后胆总管结石患者CYP7A1和B-UGT影响研究

目的:研究化石利胆汤对经逆行胰胆管造影术(Endoscopic Retrograde Cholangiopancreatography,ERCP)取石后的胆总管结石患者血液及胆汁中胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(bilirubin UDP-glucronosyltransferase,B-UGT)、胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7 alpha-hydroxylase,CYP7A1)的影响。方法:经ERCP证实为胆总管结石并经(Endoscopic sphincterotomy,EST)、机械碎石、网篮球囊取石术等取石后的患者100例,随机分成服药组为常规西医治疗并口服化石利胆汤,对照组为术后只给予常规治疗,每组各50例。服药后第1天、第7天、1个月观察患者血CYP7A1、B-UGT mRNA的表达,及服药后第1天、第7天胆汁中CYP7A1、B-UGT的蛋白表达。结果:实验组服中药后血中CYP7A1、B-UGT mRNA及胆汁中CYP7A1、B-UGT蛋白表达较治疗前明显升高(P<0.05,对照组前后2基因及蛋白表达无变化。结论:化石利胆汤很可能是通过上调CYP7A1、B-UGT的mRNA及蛋白表达,抑制成石性胆汁的形成,从而起到治疗胆结石的作用。

黑米通过上调小鼠肝脏CYP7A1的表达调控胆固醇代谢

目的:研究黑米对小鼠血脂以及肝脏中胆固醇代谢相关基因及蛋白表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,以玉米淀粉为碳水化合物来源的高脂高胆固醇膳食组为对照,实验组分别在高脂饲料中添加白米(精)和黑米(低剂量C+BL和高剂量C+BH)代替玉米淀粉。测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,Real-time PCR(RT-PCR)法检测肝脏中胆固醇代谢调控相关基因HMG-Co A-R、LXR-α、SREBP-2、LDL-R、CYP7A1等的m RNA表达水平,Western blot法检测LDL-R和CYP7A1的蛋白表达水平。结果:白米组血清中TC、TG、HDL-C含量较对照组无统计学差异,但黑米组血清中TC和TG含量较对照组降低,且HDL-C显著升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与高脂组相比,黑米添加组LXR-α、SREBP-2、CYP7A1 m RNA表达水平均上调(P<0.05)。与高脂组相比,C+BH组小鼠CYP7A1蛋白表达显著上调(p<0.05)。结论:黑米调节机体胆固醇代谢平衡可能是通过升高血清中HDL-C含量,上调肝脏中胆固醇向胆汁酸转化酶CYP7A1的表达。

CYP7A1基因-204位点A/C变异对启动子活性的影响(英文)

CYP7A1(cholesterol7α-hydroxylase)在胆固醇向胆汁酸代谢途径中起着至关重要的作用.为研究该基因启动子区-204位点A/C多态性是否影响基因表达,利用荧光素酶作为报告基因,将含有A或C等位基因的启动子区片段分别正向和反向插入不含启动子的pGL3-basic质粒载体中,再以重组体转染4种细胞株,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定酶活性并进行比较.实验结果表明,2种基因型的正向序列启动子活性均高于相应的反向序列,含有A等位基因的启动子片段活性比含有C等位基因的片段低约1/3.TRANSFAC数据库分析显示,当-204位点等位基因为C时,可能存在1个Zic3结合位点.研究结果提示,CYP7A1基因启动子区-204位点A/C变异可减少启动子活性从而影响基因表达,其原因可能为1个潜在的Zic3结合位点的丧失.

兴义鸭CYP7A1基因外显子3多态性与血清生化指标的关联性研究

本研究采用PCR-SSCP和DNA直接测序技术相结合来检测兴义鸭CYP7A1基因外显子3的SNP位点,分析其与血清生化指标的关联性。结果表明,检测到3种基因型AA、AB和BB,2个等位基因A和B,AA和A分别为优势基因型和等位基因,频率分别为0.882和0.921,序列比对发现5个SNP位点G744A、G783A、T858C、C951G和G960A,均为同义突变。关联分析显示,BB基因型个体的血清白蛋白、球蛋白和总蛋白显著高于AA基因型(P<0.05),AA基因型白球比值显著高于AB型(P<0.05),推测CYP7A1基因外显子3的多态可能对兴义鸭血清蛋白有一定影响,BB基因型可能是血清蛋白组成的有利基因型,等位基因B可能是有利等位基因。

鸭CYP7A1基因编码区C129T突变对肉质和脂肪性状的遗传效应分析

采用PCR—SSCP法检测3个鸭群体CYP7A1基凶编码区87～246bp区域多态性．分析其多态性对肉质和脂肪性状的关联性。结果表明：金定鸭和兴义鸭群体中没有检测到多态性，全部为｜厂r基因型；樱桃谷鸭群体中检测到TT和TC2种基因型．TT基因型频率为0．8909，T等位基因频率为0．9454；序列比对发现，c．129C〉T沉默突变，表现为低度多态，处于Hardy—Weinberg平衡状态（P〉O．05），T-检验显示，TT基因型个体的肌内脂肪和血清总胆固醇显著低于TC基因型个体，其他指标在两个基因型问的差异均未达到鼹著水平。揭示等位基因C町能是脂肪沉积的有利等位基因，可作为提高肉鸭肌内脂肪的选择性标记。

养肝利胆颗粒对胆固醇结石小鼠肝脏中PPAR-γ及CYP7A1表达的影响

目的:观察养肝利胆颗粒对胆固醇结石小鼠肝脏PPAR-γ及CYP7A1表达的影响。方法:38只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=15)和养肝利胆颗粒组(n=13)。其中后两组小鼠采用高脂饮食诱发法建立胆固醇结石模型。造模过程中,养肝利胆颗粒组小鼠予养肝利胆颗粒2.1g/(kg.d)灌胃治疗。8周后观察各组小鼠的成石率,并用Western Blotting法检测肝脏中PPAR-γ及CYP7A1的表达。结果:养肝利胆颗粒组成石率显著降低(P<0.01),小鼠肝脏PPARγ及CYP7A1表达增强。结论:养肝利胆颗粒可通过增强肝脏PPARγ及CYP7A1的表达,从而发挥防治胆石病的作用。

家族性胆固醇结石患者肝组织CYP7A1 mRNA的表达

目的:研究家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、散发性胆固醇结石患者和非结石患者肝组织CYP7A1基因mRNA的表达改变及其与胆汁成石性变化的关系。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)技术,研究了28例具有家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、30例散发性结石患者和32例非结石患者肝组织CYP7A1mRNA的表达变化;并采用生物化学技术行胆汁脂质分析,计算成石指数。结果:家族遗传性和散发性胆固醇结石组CYP7A1mRNA表达水平较非胆固醇结石组降低,差异有显著性;在家族遗传性和散发性胆固醇结石组两组间无统计学差别;各组肝组织CYP7A1mRNA表达与胆汁成石指数(LI)呈负相关。结论:胆囊胆固醇结石患者肝组织CYP7A1mRNA水平降低,因而CYP7A1mRNA表达下调可能是胆囊胆固醇结石形成的重要原因之一;CYP7A1是决定胆汁成石性和胆囊胆固醇结石发生的一个重要基因。

α-亚麻酸和花生四烯酸对Nrf 2和Ⅰ相代谢酶CYP7A1表达的影响

为了检测α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)和花生四烯酸(arachidonic acid,AA)对于人肝癌细胞系(HepG2细胞)中核转录因子Nrf 2和Ⅰ相代谢酶胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)的mRNA和蛋白质表达的影响,并探究CYP7A1是否受Nrf 2的调控,试验以不同浓度的ALA和AA诱导HepG2细胞24 h,之后采用Real-time PCR法和Western-blot法分别检测HepG2细胞内Nrf 2和CYP7A1的mRNA和蛋白质的表达量。结果表明:当使ALA浓度为0.25,0.5,1 mmol/L作用于HepG2细胞时,Nrf 2和CYP7A1的mRNA和蛋白质的表达量相比于细胞对照均呈剂量依赖性升高(P<0.01);当使AA浓度为0.25,0.5,1 mmol/L作用于HepG2细胞时,Nrf 2的mRNA和蛋白质的表达量相比于细胞对照呈剂量依赖性升高(P<0.01),但CYP7A1的mRNA和蛋白质的表达量相比于细胞对照则呈剂量依赖性减少(P<0.01)。说明不同剂量的ALA和AA对Nrf 2和CYP7A1的mRNA和蛋白质的表达量影响不同,Nrf 2和CYP7A1呈正相关或负相关。

化石利胆汤对胆总管结石ERCP术后患者CYP7A1和B-UGT的影响

目的:探讨化石利胆汤对逆行胰胆管造影取石(ERCP)术后胆总管结石患者血液以及血脂中的胆固醇7α羟化酶以及二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶的影响。方法:选取90例行ERCP检查且证实胆总管结石并行碎石取石术患者,将其随机分为治疗组及对照组,每组45例,治疗组给予常规治疗结合化石利胆汤,对照组予常规治疗,分别比较治疗前以及治疗后第7天、1个月患者血CYP7A1、B-UGT m RNA以及蛋白的表达情况。结果:治疗组服药后第7天、1个月的CYP7A1、B-UGT m RNA表达水平均明显高于治疗前,且与对照组同时期比较明显升高,治疗组服药治疗后第7天的CYP7A1、B-UGT蛋白表达水平明显较治疗前升高,且与对照组同时期比较明显升高,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:化石利胆汤可上调胆总管结石ERCP术后患者CYP7A1、B-UGT m RNA及其蛋白的表达。

阿托伐他汀诱导肝脏Cyp7a1和时钟基因的表达

他汀类药物是羟甲戊二酰辅酶A（HMGCR）选择性抑制剂,是临床防治冠心病的重要药物[1-2].研究表明,阿托伐他汀能升高肝脏中胆固醇7羟化酶（Cyp7a1）的表达,改变体内胆汁酸代谢[3],并可能与其长期使用所致肝脏不良反应有关[4].

有氧运动对肥胖及肥胖抵抗大鼠肝脏功能以及CYP7A1mRNA表达的影响

目的:观察有氧运动对大鼠肝脏功能以及CYP7A1mRNA的表达。方法:对高脂饮食饲养的肥胖及肥胖抵抗大鼠进行8周的运动干预,用组织学染色及血清生化检测,评价大鼠肝脏脂代谢及功能;用相对定量PCR评价CYP7A1mRNA的表达情况。结果:肥胖对照组大鼠HE染色肝细胞胞质内显现大小不等空泡,肝窦间隙明显变窄,肥胖游泳组肝细胞形态基本正常,细胞核居中,肝细胞脂肪变性明显减轻,肝窦间隙无明显变化;肥胖对照组、肥胖抵抗对照组大鼠血清ALT、AST水平高于普饲对照组并且具有非常显著的差异,肥胖游泳组大鼠血清ALT、AST显著低于肥胖对照组;肥胖对照组大鼠CYP7A1mRNA相对表达量高度显著低于普饲对照组。肥胖游泳组大鼠CYP7A1mRNA相对表达量显著高于肥胖对照组。结论:10周高脂饮食可引肥胖及肥胖抵抗大鼠血脂出现异常,脂质代谢紊乱、肝脏出现脂肪沉积、肝功能异常;有氧运动可能通过增加肥胖大鼠肝脏CYP7A1表达,改善胆固醇转化障碍,从而达到改善10周高脂饮食导致的肝功能异常的现象。

胆固醇和脂肪酸对CYP7A1的调节

胆固醇7α-羟化酶是胆固醇转化为胆酸过程中的关键酶,对维持机体的胆固醇内环境稳定起着重要作用。胆固醇对7α-羟化酶有诱导作用,在种属之间有很大差异。新近发现胆固醇并不单独决定该酶的活性,膳食中的脂肪酸和胆固醇的组合最终决定该酶的活性。这些调节作用主要通过LXRα、RXRα和PPARα对胆固醇的7α-羟化酶在转录水平调节实现。

鸭CYP7α1基因原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

本研究旨在构建鸭重组表达载体pET32a-CYP7α1,获取其融合蛋白,为开展鸭CYP7α1蛋白在脂类代谢中作用的深入研究提供基础。试验以樱桃谷鸭为材料,通过克隆获得CYP7α1基因的ORF序列,并连接至原核表达载体pET32a中,构建了重组表达载体pET32a-CYP7α1,转入表达宿主Rossetta-gam(iDE3)进行诱导表达。结果表明CYP7α1基因ORF区共编码512个氨基酸,SDS-PAGE电泳分析表明,重组蛋白大小约为59 ku,其主要以包涵体的形式存在,其最佳诱导条件为温度37℃,时间4 h,IPTG浓度0.6 mmol/L。

SLE患者血清EB病毒诱导基因2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平变化及临床意义

目的探讨EB病毒诱导基因2(EBI2)和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的作用。方法选取SLE患者20例(观察组),体检健康者20例(对照组),采用ELISA法检测两组血清EBI2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分,比较观察组SLEDAI<10分者和≥10分者血清EBI2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平。结果观察组血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平分别为(2.82±0.60)×10^(-1)、(158.8±22.62)×10^(-1)ng/m L,均高于对照组的(1.89±0.68)×10^(-1)、(89.92±23.78)×10^(-1)ng/m L(P均<0.01)。观察组SLEDAI≥10分13例,SLEDAI<10分7例;SLEDAI≥10分者血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平分别为(3.26±0.35)×10^(-1)、(183.78±17.41)×10^(-1)ng/m L,均高于SLEDAI<10分者的(2.20±0.25)×10^(-1)、(130.57±16.19)×10^(-1)ng/m L(P均<0.01)。结论 SLE患者血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平均升高,二者可能共同参与了SLE的发生、发展。

CYP7B1与ER在胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达

目的探讨雌激素受体（ERα、ERβ）与胆固醇7d羟化酶（CYP781）mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积（ICP）孕鼠、胎鼠肝脏中的表达及其意义。方法对照组孕鼠30只注射精制植物油；研究组孕鼠30只注射17－α－乙炔雌二醇。两组孕鼠分别于妊娠第13天、17天、21天断尾采母鼠血检测，于妊娠第21天抽取母鼠、胎鼠血并提取肝脏组织。应用酶联免疫吸附试验检测两组孕鼠及胎鼠血清中胆酸水平；应用实时定量PCR技术检测两组胎鼠肝脏ERa、ERl3、CYP781mRNA的表达。结果①在妊娠第17天、21天研究组母鼠胆汁酸水平明显高于对照组（55．7±3．2μmol／Lvs23．4±1．2μmol／L。t=2．541，P〈0．05；61．4±2．4μmol／Lvs25．5±2．1μmol／L，t=2．621，P〈0．05）；研究组胎鼠胆汁酸水平明显高于对照组（27．4±2．3μmol／Lvs11．54-2．6μmol／L，t=2．631，P〈0．05）；②研究组胎鼠肝脏CYP781mRNA水平明显高于对照组（2．15±0．01vs0．25±0．02，t=2．563，P〈0．05）；⑧研究组ER仅mRNA水平明显高于对照组（0．81±0．02vs0．35±0．01，t=2．534，P〈0．01）。结论ICP孕鼠胎鼠肝细胞ER旺、CYP781的表达升高，胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍，可能是导致ICP胎儿围生儿死亡发生的原因之一。

GdCl_3对小鼠肝脏再生早期Cyp7A1基因转录的影响

目的:探讨小鼠肝脏再生早期氯化钆(GdCl3)通过作用于枯否细胞影响胆酸介导的Cyp7A1基因转录的抑制.方法:运用GdCl3(10mg/kg,iv.)或PBS(0.2mL,iv.)处理C57BL/6小鼠24h后,切除小鼠70%的肝脏,于术后第1日处死小鼠,收集肝脏,采用实时定量RT-PCR方法检测肝脏中Cyp7A1,TNFα和IL-6基因的表达.结果:肝脏再生的第1日,与PBS对照组相比,GdCl3处理组中Cyp7A1mRNA的表达降低(P<0.01),而细胞因子TNFα和IL-6mRNA的表达升高(P<0.01).结论:在肝脏再生的早期,GdCl3可增进胆酸介导Cyp7A1基因转录的抑制,这种作用是通过促使枯否细胞产生细胞因子TNFα和IL-6来实现.

长期游泳运动对高脂饲料喂养大鼠肝脏中CYP7A1及D-双功能蛋白表达的影响

探讨长期耐力运动对高脂饲料喂养的大鼠胆汁酸生成关键酶CYP7A1和D-双功能蛋白(DBP)表达的影响.30只大鼠随机分为高脂组(HC)、高脂运动组(HE)、正常组(C).高脂组和高脂运动组采用高脂饲料喂养.高脂运动组喂养4周后,进行16周的游泳运动.20周后,测定三组大鼠肝脏中CYP7A1和DBP的表达,血清中生化指标的变化以及粪便中的胆汁酸,并取肝脏作病理切片分析.测定结果显示,高脂运动组较高脂组肝脏的脂肪变性明显好转,血清中chol、TG、LDL、CP均趋向正常;高脂运动组肝脏中CYP7A1、DBP的表达明显增加.长期耐力运动能够使高脂喂养大鼠肝脏中CYP7A1、DBP表达显著增加,增加大鼠胆汁酸的产生和排泄,减轻高脂饲料喂养导致的脂类代谢失调.

苦豆子总碱对溃疡性结肠炎小鼠结肠及肝组织中FXR、TGR5、CYP7A1蛋白表达的影响

基于法尼醇X受体和G蛋白偶联胆汁酸受体5(farnesoid X receptor/G protein-coupled bile acid receptor 5,FXR/TGR5)通路探讨苦豆子总碱对小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型的治疗作用及其作用机制。将60只健康雄性BALB/c小鼠分空白对照组(Con)、葡聚糖硫酸钠模型组(DSS)、柳氮磺胺嘧啶阳性对照组(SASP)和苦豆子总碱治疗组(TASA)。给予BALB/c小鼠3.5%DSS饮水使其连续自由饮用7天以建立小鼠急性UC模型,造模的同时每天灌胃苦豆子总碱(75 mg/kg)进行治疗,并以柳氮磺胺嘧啶(450 mg/kg)为阳性对照药物。试验期间对各组小鼠临床症状进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分。第8天观察结肠HE染色病理切片,糖原PAS染色以及阿利新蓝染色观察结肠组织杯状细胞。酶联免疫吸附法(ELISA)检测结肠组织匀浆上清液IL-10、IL-23、IL-1β及IL-17的表达。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠结肠和肝组织FXR、TGR5、CYP7A1的表达。结果显示,经苦豆子总碱治疗后,小鼠疾病活动指数、结肠组织病理学损伤及结肠长度明显改善(P<0.01),结肠组织杯状细胞数量显著增加(P<0.01),细胞因子IL-10显著升高(P<0.01);IL-23、IL-17、IL-1β显著降低(P<0.01),血清胆汁酸含量显著升高(P<0.01),结肠和肝脏组织FXR、TGR5、CYP7A1均不同程度上调。结果表明苦豆子总碱对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用,其主要通过抑制相关炎症因子来抑制结肠炎症的发展,以及上调FXR/TGR5信号通路的相关蛋白的表达发挥其治疗作用。

FXR-CYP7A1轴在胆汁淤积性肝病中的调控研究进展

胆汁淤积性肝病是由不同原因引起胆汁的生成、分泌以及排泄障碍,导致胆汁不能正常排泄到肠道而在肝脏中蓄积,从而出现肠道胆汁缺乏并伴血液中出现胆汁成分的一种疾病 [1,2] 。根据发病部位可分为肝内胆汁淤积和肝外胆汁淤积两大类,临床大多数胆汁淤积性疾病属于肝内胆汁淤积,胆汁淤积本身也会进一步加重肝脏的损害,严重的可导致肝硬化、肝癌、肝衰竭,甚至死亡 [3] 。胆汁酸在肝内合成及分泌,其血清升高是胆汁淤积敏感和早期特异性指标 [1] 。胆汁酸在肝内的过量累积是介导胆汁淤积性肝损伤的关键因素,而法尼醇衍生物X受体(FXR)则是介导胆汁酸合成的负反馈调节中的关键因子 [4] 。当发生胆汁淤积时,肝脏内高浓度的胆汁酸激活FXR反应元件,反馈调节胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)的活性表达,抑制胆汁酸的合成以及在肝脏中的重吸收,防止胆汁酸在肝脏内过度累积,使胆汁酸浓度维持在正常的范围内,缓解胆汁淤积造成的肝胆系统损伤。本文仅对FXR-CYP7A1轴在胆汁淤积性肝病中的调控进行综述,旨在从FXR-CYP7A1轴调控通路入手为胆汁淤积性肝病进行试验研究及新药研究时提供参考。