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流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较 被引量:5
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作者 郭继强 韩亚萍 +4 位作者 李芳 赵晴 贾原 靳保利 张俊萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1691-1697,共7页
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染... 目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。 展开更多
关键词 流式细胞技术 细胞毒作用 NK细胞 CFSE Annexin-V/7-AAD
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流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨 被引量:4
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作者 蔡辉 姜丽娜 李柏青 《蚌埠医学院学报》 CAS 2010年第6期541-544,547,共5页
目的:建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(polymorphonuclear cells,PMN)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的方法。方法:健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123(DHR123)或2′,7′-二氯荧光... 目的:建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(polymorphonuclear cells,PMN)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的方法。方法:健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123(DHR123)或2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用15 min,再加佛波醇酯(phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA)于37℃作用5-90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123(rhodamine 123,RHO)或氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin,DCF)的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平。结果:以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37℃作用5-60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60-90 min时渐下降。以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5-30 min逐渐增高并在60-90 min达平台期。实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度。结论:采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法。 展开更多
关键词 中性粒细胞 流式细胞术 活性氧 双氢罗丹明123 2′ 7′-二氯荧光素二乙酸酯
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荧光探针法测定活性氧的研究进展 被引量:3
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作者 刘佳琳 杜春梅 《中国农学通报》 2018年第33期160-164,共5页
旨在为相关领域的研究人员选择适合的活性氧(ROS)荧光探针、进一步提高ROS检出的特异性和灵敏度提供理论依据。本研究介绍了荧光探针法的原理;归纳了3种常用的荧光探针,包括二氯荧光素(DCDHF-DA)、二氢罗丹明(DHR123)和氢化乙锭(HE);总... 旨在为相关领域的研究人员选择适合的活性氧(ROS)荧光探针、进一步提高ROS检出的特异性和灵敏度提供理论依据。本研究介绍了荧光探针法的原理;归纳了3种常用的荧光探针,包括二氯荧光素(DCDHF-DA)、二氢罗丹明(DHR123)和氢化乙锭(HE);总结了荧光探针的特点及影响因素。最后指出荧光探针在应用中存在的问题及可能的解决对策。 展开更多
关键词 荧光探针 活性氧 二氯荧光素 二氢罗丹明 氢化乙锭
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头孢尼西钠的合成 被引量:5
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作者 李凤侠 赵振华 +1 位作者 范美菊 王勇进 《山东化工》 CAS 2008年第10期10-11,14,共3页
7-氨基头孢烷酸(7-ACA)与5-巯基-1,2,3,4-四氮唑-1-甲基磺酸双钠盐(SMT-DS)在BF3作用下缩合,生成7-氨基-3-[甲磺酸基-1-H-四唑-5-基-巯甲基]-3-头孢烯4-羧酸(3)。3与D-(-)-甲酰基扁桃酸酰氯在pH6.5-7.0下酰化、盐酸作用下去甲酰基成头... 7-氨基头孢烷酸(7-ACA)与5-巯基-1,2,3,4-四氮唑-1-甲基磺酸双钠盐(SMT-DS)在BF3作用下缩合,生成7-氨基-3-[甲磺酸基-1-H-四唑-5-基-巯甲基]-3-头孢烯4-羧酸(3)。3与D-(-)-甲酰基扁桃酸酰氯在pH6.5-7.0下酰化、盐酸作用下去甲酰基成头孢尼西酸,再与N,N-二苄基乙二胺二醋酸盐(DBED)结合生成头孢尼西胺盐(5)。5经酸化,成盐反应得头孢尼西钠。反应总收率为60.7%,所得产品纯度为98.7%(HPLC)。 展开更多
关键词 7-ACA SMT—DS D-(-)-甲酰基扁桃酸酰氯 N N-二苄基乙二胺二醋酸盐 头孢尼西钠
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Oxidative effects of glyphosate on the lipophobic intracellular environment in the microalgae Chlorella vulgaris
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作者 JUAN MANUEL OSTERA SUSANA PUNTARULO GABRIELA MALANGA 《BIOCELL》 SCIE 2022年第3期795-802,共8页
The studied hypothesis is that the herbicide glyphosate(GLY)can affect the oxidative balance in the hydrophobic intracellular medium in non-target Chlorella vulgaris cells.Analytical GLY and RoundUp(RUP)supplementatio... The studied hypothesis is that the herbicide glyphosate(GLY)can affect the oxidative balance in the hydrophobic intracellular medium in non-target Chlorella vulgaris cells.Analytical GLY and RoundUp(RUP)supplementation,affected the growth profile.A significant 42%decrease in the cellular biomass in stationary(St)phase was observed in cultures supplemented with either 5μM of GLY or RUP,as compared to control cultures.The treatment with 0.3μM of GLY generated non-significant effects on the oxidation rate of 2’,7’dichlorofluorescein diacetate(DCFH-DA),neither in exponential(Exp)nor in St phase of development,as compared to control cultures.However,the treatment with either 5μM GLY or 0.3 and 5μM RUP lead to a significant decrease in the DCFH-DA oxidation rate,as compared to control cultures.The lipid radical(LR●)generation rate,detected by Paramagnetic Resonance Spectroscopy(EPR),was significantly increased in the presence of RUP,in Lag and Exp phase of growth.The non-enzymatic antioxidants,α-Tocopherol(α-T)andβ-Carotene(β-C),are aimed to protect membranes against the damage produced by the radical reactions.The content ofβ-C was not significantly affected,as compared to control cultures,by any of the treatments,in both growth phases of cellular development.The content ofα-T was significantly decreased by the supplementation with either 0.3 or 5μM of RUP or 5μM GLY.The LR●/α-T ratio,used as indicator of the oxidative balance in the hydrophobic cellular media,was significantly different between samples obtained from control and RUP-exposed microalgae in both,Exp and St phase of development,with either 0.3 or 5μM RUP.The data presented here showed evidence that suggested that oxidative balance in the hydrophobic environment was affected by either GLY or RUP. 展开更多
关键词 2’ 7’dichlorofluorescein diacetate oxidation rate Lipid soluble antioxidants Round up Redox balance
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基于H2DCFDA荧光探针的植物活性氧检测方法 被引量:5
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作者 胡海涛 钱婷婷 杨玲 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期320-326,共7页
活性氧(reactive oxygen species,ROS)是植物体内的一把“双刃剑”。ROS作为信号分子在植物生命活动中发挥关键作用,但ROS过量积累会对生物大分子造成氧化损伤。准确测定ROS含量对于评估植物细胞内的氧化还原状态至关重要。由于植物体内... 活性氧(reactive oxygen species,ROS)是植物体内的一把“双刃剑”。ROS作为信号分子在植物生命活动中发挥关键作用,但ROS过量积累会对生物大分子造成氧化损伤。准确测定ROS含量对于评估植物细胞内的氧化还原状态至关重要。由于植物体内ROS各组分半衰期短且反应活性强,定性定量检测较为困难。因此,选择合适的检测方法以提高检测的时空准确性非常重要。目前,荧光分析法因其具有灵敏度高、选择性好、检出限低和直观性强等优点,受到研究人员的广泛关注。该文详细描述基于流式细胞仪和激光共聚焦显微镜,利用2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)荧光探针检测水稻(Oryzasativa)体内ROS水平和时空分布的操作流程及注意事项。该技术也可用于直接检测拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米(Zea mays)和大豆(Glycine max)等模式植物组织中ROS的水平和分布。 展开更多
关键词 活性氧 荧光探针 H2DCFDA 植物
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胃肠舒对胃肠平滑肌细胞一氧化氮释放的影响 被引量:7
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作者 郭金秀 刘孟安 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2011年第2期121-124,共4页
目的:探讨胃肠舒促胃肠动力的作用机制。方法:组织块法原代培养胃肠平滑肌细胞,实验分胃肠舒低、中、高剂量组、西沙必利组和正常对照组,各组分别用受试药物(正常对照组用DMEM干粉培养基)干扰细胞24 h,采用一氧化氮荧光探针(DAF-FMDA)反... 目的:探讨胃肠舒促胃肠动力的作用机制。方法:组织块法原代培养胃肠平滑肌细胞,实验分胃肠舒低、中、高剂量组、西沙必利组和正常对照组,各组分别用受试药物(正常对照组用DMEM干粉培养基)干扰细胞24 h,采用一氧化氮荧光探针(DAF-FMDA)反应30 min,流式细胞仪检测一氧化氮(NO)释放。结果:胃肠舒大、中剂量组与正常对照组比较,胃肠平滑肌细胞NO释放的荧光强度明显减弱(P<0.01,P<0.05),与西沙必利组相似。结论:胃肠舒促胃肠动力的作用机制可能是通过抑制胃肠平滑肌细胞内NO的生成,进而抑制相关酶的活化,拮抗环磷酸鸟苷(cGMP)的作用,从而使胞内Ca2+增多,Ca2+信号系统引发一系列生理功能而促进胃肠平滑肌收缩效应。 展开更多
关键词 胃肠舒片 胃肠平滑肌细胞 一氧化氮荧光探针 流式细胞仪
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Using laser confocal scanning microscope to study ischemia-hypoxia injury in rat brain slice
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作者 WANG Xiaoying XING Hong +2 位作者 HE Qihua XU Jialing WU Benjie 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2000年第1期49-51,共3页
The level of lipid peroxidation and cellular necrosis in rat living brain slices during brain ischemia-hypoxia injury have been observed using a laser confocal scanning microscope (LCSM) with double labeling of fluore... The level of lipid peroxidation and cellular necrosis in rat living brain slices during brain ischemia-hypoxia injury have been observed using a laser confocal scanning microscope (LCSM) with double labeling of fluorescent probes D-399 (2, 7-dichlorofluorescin diacetate) and propidium iodide (Pl). The hypoxia and/or reoxygenation injury in rat brain slices is markedly decreased by pretreatment with L-NG-nitro-arginine (L-NNA) and N-acetylcysteine (NAC), showing that the nitric oxide (NO) and other free radicals play an important role in brain ischemia-hypoxia injury. 展开更多
关键词 LASER confocal scanning MICROSCOPE brain ischemia-hypoxia INJURY lipid peroxide 2 7-dichIorofluorescin diacetate.
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