中心复合效应面设计法优化7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)前体脂质体处方

目的通过中心复合效应面设计法筛选最佳处方,制备7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)前体脂质体。方法分别以药脂质量比(md∶ml)、磷脂质量分数(w)、Tween80质量浓度(ρ)为实验考察对象,以包封率(Y1∶wEE)、粒径(Y2∶d)为效应,利用中心复合效应面设计法筛选SN-38前体脂质体的最佳处方。结果前体脂质体的包封率为88.43%,粒径为239.00 nm,与模型预测值相比偏差均小于10%。结论使用中心复合效应面设计法可以很好的优化SN-38前体脂质体的处方。

脂质体对7-乙基-10-羟基喜树碱稳定性影响

目的考察脂质体对7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)活性形式的保护作用。方法建立测定SN-38活性形式的HPLC法,考察不同pH条件对SN-38活性与SN-38非活性形式相互转变动力学和平衡比例的影响;并研究了37℃的pH 7.4、8.0、9.0、10.0条件下脂质体对SN-38活性形式的保护作用。结果在pH<4.3的条件下,SN-38以其活性形式存在;在pH>9的条件下,SN-38主要以其非活性形式存在;在pH 6.5的条件下,SN-38活性和非活性形式之间相互转换最慢。包裹在脂质体内的SN-38在模拟生理条件下8 h活性形式质量分数仍大于98%。结论脂质体能够有效地保护SN-38α-羟基内酯环。

聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱共聚物的合成及体外表征

首先将聚乙二醇（PEG）琥珀酰化，在二氯磷酸苯酯作用下用PEG选择性与7-乙基-10-羟基喜树碱（1）的10-位羟基成酯，得到PEG-1共聚物，经FT-IR、^1HNMR和MALDI-TOF—MS确证结构，并考察了共聚物载药量、溶解度和在不同pH缓冲液中的水解情况。结果显示，共聚物可明显提高溶解度，延长体外半衰期。

7-乙基-10-羟基喜树碱两亲性嵌段共聚物亚微粒的制备及性质

本文用间接法合成了聚乙二醇单甲醚-聚乳酸两亲性嵌段共聚物(methoxypolyethylene glycol-poly lactic acid,PELA),用1HNMR对其结构进行了表征;并以此为载体材料,采用溶解成膜法制备7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)亚微粒,研究共聚物相对分子质量,投药量对亚微粒包封率,载药量及粒径的影响,并考察了该亚微粒的形态及体外释药特性。结果表明,SN-38亚微粒粒径小于200 nm。随着共聚物的相对分子质量增大,载药量与包封率有所下降;随SN-38投药量的增加,载药量和粒径增加,包封率明显降低。透射电镜显示所制备的亚微粒具有核-壳的胶束结构,体外释放实验表明该亚微粒具有明显的缓释效果。本文制备的亚微粒大大增加了SN-38的水溶性,是一种值得研究开发的抗癌药物SN-38的新剂型。

聚乙二醇对7-乙基-10-羟基喜树碱体外稳定性及对小鼠淋巴摄取的影响

目的本文研究不同相对分子质量的聚乙二醇(PEG)溶解7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)对其体外稳定性以及小鼠淋巴摄取量的影响。方法体外实验在SN-38的pH值7.4的PBS饱和溶液中分别加入乙醇、PEG200、PEG400、PEG800,37℃水浴12 h,用HPLC测定SN-38含量;在体内实验中分别将SN-38用乙醇及含体积分数50%PEG200-800的乙醇溶液配制成质量浓度为1 g·L-1的SN-38溶液剂,将上述SN-38的溶液剂在小鼠右后脚掌皮下注射,剂量为1 mg·kg-1。给药后分别于不同时间点用HPLC测定小鼠淋巴结及脚掌中的SN-38的含量。结果体外的稳定性实验测得SN-38含量为PEG200组>PEG400组>PEG800组>乙醇组;乙醇组与PEG200-800组小鼠淋巴结中药物的含量结果与体外稳定性结果一致。结论 PEG能够稳定SN-38的内酯环从而增强SN-38的淋巴摄取量,并且随着PEG相对分子质量的增加,这种稳定作用减弱。

7-乙基-10-羟基喜树碱的合成

用喜树碱乙基化制得的7-乙基喜树碱在冰乙酸中用双氧水氧化成N-氧化物,再经光照重排制得7-乙基-10-羟基喜树碱,并优化了反应条件,总收率49%。

7-乙基-10-羟基喜树碱与大鼠血浆蛋白结合率的测定

为了建立7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)血浆蛋白结合率的测定方法,采用平衡透析法模拟SN-38在人体内与血浆蛋白结合的过程,并以HPLC法测定SN-38在透析袋内血浆中的药物浓度与透析袋外缓冲液中的浓度;透析内液用含0.5%乙酸的乙腈沉淀蛋白,透析内液过滤后直接测定。结果表明:透析内液和透析外液在25~5000 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好;提取回收率大于80%;SN-38与大鼠血浆蛋白结合率为49.9%~59.1%,平均为55.3%。SN-38与大鼠血浆蛋白结合率相对较高,建立的方法灵敏度高,重现性好,操作简单。

7-乙基-10-羟基喜树碱聚合物胶束的肿瘤靶向性研究

目的研究7-乙基-10-羟基喜树碱/聚乙二醇-聚天冬氨酸聚合物胶束(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin/polyethylene glycol-polyaspartic acid polymer micelles,SN-38/PEG-pasp)在荷瘤小鼠体内的组织分布特点。方法采用LC-MS法测定荷瘤小鼠血浆和组织中7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)的质量浓度,并用SPSS13.0统计学软件对测定的数据进行分析。结果药物在肿瘤组织中相对摄取率(r_e)达到10,远远高于其他组织,除去肝其余组织作为非靶向组织时,肿瘤的靶向效率(t_e)均大于1,呈现出明显的肿瘤靶向特征,胶束组药物在体内质量浓度排布顺序:肿瘤>肝>肺>脾>肾>心>血。结论 SN-38/PEG-pasp在肿瘤组织中药物浓度明显高于除肝脏外的其他各组织,具有明确的肿瘤靶向性。

HPLC法测定合成伊立替康反应中7-乙基-10-羟基喜树碱含量及转化率

目的：建立合成伊立替康反应中的7-乙基-10-羟基喜树碱含量测定方法和转化率测定的HPLC方法。方法：采用外标法,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18柱（5μm,250mm×46mm）;流动相为甲醇乙腈溶液：用磷酸调pH至4.0的0.05mol/L磷酸氢二钾缓冲液（含10ml-L三乙胺）[（55：5）：50];检测波长为266nm;流速为0.8mL/min;柱温30℃,进样量20μl。结果：7-乙基-10-羟基喜树碱浓度与峰面积具有良好相关性,线性范围为0.5（0.48）-50（48）μg/ml,r=0.9999（n=8）,精密度RSD为0.72%（n=6）,平均回收率为98.7%（n=27）,最低检测限为0.24μg/ml,定量限为0.72μg/ml。

基于羟乙基淀粉-姜黄素前药的SN38协同给药胶束构建与评价

化疗药物协同给药可以作用于不同代谢通路,有效抑制癌细胞增殖,从而改善药物的治疗效果,在避免引发多药耐药性等方面具有显著优势。本研究基于季铵盐羟乙基淀粉-姜黄素(QHES-S-CUR)前药,构建了负载7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)的协同给药胶束SN38@QHES-S-CUR。首先,借助分子动力学模拟的手段预测姜黄素与SN38共混体系的稳定性;在此基础上,通过纳米沉淀法制备了负载SN38的协同给药胶束。详细考察了QHES-S-CUR与SN38的质量比对胶束形貌及粒径分布的影响,在QHES-S-CUR与SN38的质量比为20:1时,可得到平均粒径为(258.76±28.76)nm的球形纳米粒。体外药物释放实验表明,SN38@QHES-S-CUR胶束能够在模拟的肿瘤微环境中响应性地释放出姜黄素及SN38,比SN38单独给药对小鼠结肠癌细胞CT-26的细胞毒性显著增强。本研究将两亲性前药应用于疏水性化疗药物的递送中,为化疗药物的协同给药提供了新思路。

7-乙基-10-羟基喜树碱新型给药系统的研究进展

7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)是伊立替康的活性代谢物,在体外的抗肿瘤效果是伊立替康的100~1 000倍。然而,SN38水溶性差、在pH>9.0时完全水解开环为不具有治疗效果的羧酸盐形式。SN38新型给药系统均可提高药物在各种不同癌症模型中的理化性质和体内性能,从而提高其抗肿瘤活性和减少不良反应。因此从物理封装、化学偶联和主动肿瘤靶向3种策略对基于SN38的新型给药系统进行介绍,为后续开发出有效SN38新型给药系统提供参考。

三维荧光二阶校正同时测定人体液中伊立替康及其代谢物7-乙基-10-羟基喜树碱的含量

提出了激发发射矩阵荧光光谱与化学计量学二阶校正方法相结合用于同时快速定量人体液(血浆和尿液)中的伊立替康(CPT11)和其主要代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)的绿色、高灵敏分析策略.尽管其分析物之间以及分析物和背景之间的光谱存在严重重叠现象,采用基于交替归一加权残差(ANWE)算法的二阶校正方法进行解析仍能得到令人满意的定性定量分析结果.当该体系的组分数选取为3时,可以得到血浆和尿液中CPT11的平均回收率分别为(96.8±6.3)%和(101.7±1.1)%,SN38在血浆和尿液中的平均回收率分别为(100.4±4.9)%和(101.6±1.1)%.另外,通过品质因子,如灵敏度(SEN)、选择性(SEL)、检测下限(LOD)和定量检测限(LOQ)评估了该方法的准确性.实验结果表明,该方法能以"数学分离"代替繁琐的"物理和化学分离",成功地解决实际复杂体系中内源干扰物质与分析物光谱重叠所引起的难分辨的问题,可用于人体液中CPT11和SN38含量的直接快速定量测定.

7-乙基-10-羟基喜树碱长循环脂质体的制备及药动学研究

目的:研究7-乙基-10-羟基喜树碱长循环脂质体(Lip-SN38)的制备方法以及在大鼠体内的药动学。方法:采用两步合成法制备脂质体空间稳定膜材甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(mPEG-PE);同时采用薄膜分散法制备Lip-SN38;用阳离子交换树脂微型小柱层析法分离游离药物和脂质体,紫外分光光度法测定包封率;HPLC法测定大鼠血浆中药物浓度。结果:Lip-SN38平均粒径<200 nm,药物包封率>90%;48 h只有<30%的药物体外释放;大鼠尾静脉注射Lip-SN38,剂量为10 mg.kg-1,与SN3-8溶液剂相比,t1/2β增加4.61倍。结论:采用薄膜分散法可制得包封率高、粒径小的脂质体,mPEG-PE修饰磷脂膜可增加Lip-SN38的t1/2β,延长药物在血中的循环时间。

7-乙基-10-羟基喜树碱白蛋白纳米粒的制备及其药动学与毒性的研究

目的制备7-乙基-10-羟基喜树碱白蛋白纳米粒(SN38-HSA-LN)来延长药物在体内的循环时间并降低毒性。方法采用高压均质法制备SN38白蛋白纳米粒,并对制剂的形态学、粒径、包封率进行考查;同时采用LC-MS/MS法测定其在大鼠血浆中的药物浓度;并通过检测大鼠的外周血白细胞数量来评价其骨髓抑制毒性。结果制备的纳米粒大小均匀,形态良好,包封率为88.14%±3.15%,粒径为162.3±5.9 nm,PDI为0.137±0.015;大鼠尾静脉iv给药后,SN38-HSA-LN较SN38溶液的t1/2延长,AUC显著增加,且骨髓抑制程度明显降低。结论制备的SN38-HSA-LN包封率较高,粒径大小分布均匀,静脉注射延长了药物血液循环时间,并降低了骨髓抑制毒性。

一种透明质酸修饰的7-乙基-10-羟基喜树碱纳米混悬液的制剂制备和抗肿瘤研究

目的:制备透明质酸(HA)修饰7-乙基-10-羟基喜树碱纳米混悬液(S1C1),探究其抗肿瘤治疗作用,为纳米制剂临床应用提供参考。方法:经电荷吸附法制备纳米混悬液(S1C1-HA);经动态光散射粒径仪进行制剂表征和粒径稳定性考察;运用高效液相色谱法(HPLC)测定S1C1-HA的包封率和载药量;采用噻唑蓝法考察游离纳米混悬液对4T1细胞的增殖抑制作用;运用3D多细胞肿瘤球考察纳米混悬剂的肿瘤球渗透力;通过考察纳米混悬液的体内药动学行为、脏器分布行为和抗肿瘤治疗,评价制剂的体内药效。结果:S1C1-HA平均粒径138.04 nm,电位-8.03 mV,体外24 h内粒径稳定性良好,载药量5.44%,包封率90.07%;S1C1半数抑制浓度为S1C1-HA的4.59倍,S1C1-HA的肿瘤渗透能力显著增强;S1C1-HA的半衰期和药时曲线下面积为S1C1的5.55,17.12倍,其体内抗肿瘤治疗效果显著增强。结论:修饰后S1C1-HA能显著增强药物的稳定性、细胞毒性、肿瘤渗透能力,有更优异的体内生物利用度和抗肿瘤治疗作用,S1C1-HA较S1C1更有临床应用潜力。

7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体在大鼠体内的代谢和排泄

目的考察7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)脂质体经静脉注射后,在大鼠尿液、粪便中的代谢产物以及以SN-38原形药物排泄的量。方法大鼠尾静脉单次给予2.77 mg/kg SN-38脂质体,分别于0~6、6~12、12~24、24~48 h分段收集尿液、粪便,采用UPLC/Q-TOFMS法对SN-38脂质体在大鼠尿液、粪便中的代谢产物进行鉴定,并且建立HPLC法,用于大鼠尿液及粪便样品中SN-38原形药物的排泄量的测定。结果 SN-38脂质体的在大鼠体内的代谢产物经鉴定为SN-38G。48 h内脂质体组共有1.57%的原形药物经过尿液排出,共有12.94%的SN-38原形药物经过粪便排出。结论 SN-38脂质体只有少部分以原形药物经尿液和粪便排出体外。

LC-MS/MS法测定肝微粒体孵育体系中伊立替康活性代谢物及其次级代谢产物浓度

目的:建立LC-MS/MS法测定大鼠肝微粒体酶孵育体系中伊立替康活性代谢物(SN-38)及其次级代谢产物(SN-38G)的浓度,并对体外孵育条件进行优化。方法:采用蛋白沉淀法,用甲醇(含0.1%的甲酸)溶液处理孵育样本后,直接采用LC-MS/MS法测定分析。色谱柱采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),柱温35℃,流动相由乙腈-0.1%甲酸水(23∶77)组成,流速0.3 ml·min^(-1);采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测方式(MRM)进行定量分析。通过单因素法对各孵育条件进行优化。结果:SN-38、SN-38G分别在2.3~920 ng·ml^(-1)、2.5~1 000 ng·ml^(-1)内线性关系良好(r≥0.997 2);日内、日间精密度RSD均小于14.6%(n=6);回收率均在74.1%~123.4%之间,RSD均小于13.5%(n=6)。最佳的孵育体系为:肝微粒体蛋白浓度为0.3 mg·ml-1,孵育时间为30 min。结论:本研究所建立的LC–MS/MS法分析快速、灵敏、准确,适于体外孵育体系中SN-38与SN-38G浓度的测定,并为葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)体外活性测定提供方法学基础。

β-环糊精-聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱纳米胶束的制备及其质量评价

目的制备两亲性聚合物β-环糊精-聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱(β-CD-PEG-SN38)纳米胶束并进行质量评价。方法采用自组装法制备β-CD-PEG-SN38纳米胶束,采用单因素变量法对影响纳米胶束粒径的因素进行了考察,并对β-CD-PEG-SN38纳米胶束的粒径、Zeta电位、形态和稳定性进行评价。结果胶束制备的最佳条件为丙酮作有机溶剂,β-CD-PEG-SN38在丙酮中的质量浓度为1 mg/mL,有机相和水相的体积比为1∶8。该纳米胶束大小适中、粒径分布均匀,为均匀的球形结构。β-CD-PEG-SN38纳米胶束的临界胶束质量浓度为7μg/mL,在模拟的生理条件下具有良好的胶体稳定性,在4℃条件下储存6个月的粒径未发生明显变化。结论β-CD-PEG-SN38在水中能自发形成纳米胶束,粒径均匀、稳定性好,具有良好的胶体稳定性和长期储存稳定性。

人参总皂苷对伊立替康及其代谢产物在大鼠体内药动学的影响

目的研究人参总皂苷对伊立替康及其代谢产物在大鼠体内药动学的影响。方法将SD大鼠随机分成实验组与对照组,实验组灌胃人参总皂苷400 mg·kg^(-1),0.5 h后尾静脉注射伊立替康20 mg·kg^(-1);对照组同法给予0.9%氯化钠溶液与等剂量伊立替康。给药后不同时间点取血,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆伊立替康及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度,以DAS3.1版软件计算药动学参数,SPSS 21.0版软件行统计分析。结果实验组伊立替康主要药动学参数t_(1/2)(5.527±1.156)h、AUC_(0-t)(2.078±0.118)μg·h·L^(-1)、MRT_(0-t)(0.462±0.023)h、MRT_(0-∞)(1.405±0.212)h;对照组伊立替康主要药动学参数t_(1/2)(0.296±0.011)h、AUC_(0-t)(2.161±0.146)μg·h·L^(-1)、MRT0-t(0.360±0.026)h、MRT_(0-∞)(0.391±0.026)h;实验组SN-38主要药动学参数t_(1/2)(1.398±0.045)h、AUC_(0-t)(9.073±0.109)μg·h·L^(-1)、MRT0-t(2.337±0.081)h、MRT_(0-∞)(2.408±0.089)h;对照组SN-38主要药动学参数t_(1/2)(0.928±0.050)h、AUC_(0-t)(8.933±0.434)μg·h·L^(-1)、MRT0-t(1.869±0.061)h、MRT_(0-∞)(1.935±0.066)h。与对照组比较,实验组SN-38 t_(1/2)延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论合用人参总皂苷后,大鼠体内伊立替康活性代谢产物SN-38血浆半衰期延长。

HPLC-荧光法测定人血浆中伊立替康及其活性代谢产物的浓度

目的:建立同时测定人血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的方法。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白及盐酸酸化后,以喜树碱为内标,采用高效液相色谱-荧光法测定。色谱柱为Waters Luna C_(18),流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈(70∶30,V/V,用磷酸调节pH至4.0),流速为1 mL/min,激发波长为380 nm,发射波长为480 nm(CPT-11)、535 nm(SN-38),柱温为25℃,进样量为20μL。结果:CPT-11和SN-38血药浓度分别在200~1 000、5~45 ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.999 4、0.999 2,n=5),定量下限分别为200、5 ng/mL;日内、日间RSD为1.68%~5.57%;CPT-11和SN-38的相对回收率分别为90.12%~106.93%(RSD<8%,n=5)、92.07%~102.56%(RSD<6%,n=5),提取回收率分别为72.23%~86.56%(RSD<6%,n=5)、71.98%~83.44%(RSD<7%,n=5)。采用该方法测得5例结肠癌患者体内CPT-11和SN-38的血药浓度分别为431.13~617.19、13.97~31.89 ng/mL(静脉滴注结束后1 h),398.14~584.43、11.61~29.94 ng/mL(静脉滴注结束后2 h)。结论:该方法样品处理简单、快速,且灵敏度高、重复性好,适用于临床常规监测CPT-11及其代谢物SN-38的血药浓度及药动学研究。