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HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在Huh-7细胞中表达
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作者 李洪涛 刘水平 +2 位作者 谭宇蓉 李乐 周秩权 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期471-473,共3页
目的构建1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)反式激活因子(Tat)基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核... 目的构建1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)反式激活因子(Tat)基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入人体肝癌细胞系Huh-7细胞。RT-PCR检测其基因转录情况,Westernblot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质。结果成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT-PCR和Westernblot方法证实该质粒能在Huh-7真核细胞中有效表达HIV-1Tat目的蛋白质。结论成功构建了HIV-1Tat基因的真核表达质粒载体,并在Huh-7细胞中表达,为在Huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 1型人类免疫缺陷病毒tat基因 载体构建 HUH-7细胞 表达
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TAT-Smad7-HA融合蛋白的表达及其转导活性验证
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作者 刘波 张恒术 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2198-2202,共5页
目的构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性。方法分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA... 目的构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性。方法分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA重组原核表达载体,IPTG诱导表达后经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的片段回收和FITC标记后,将FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白作用于体外培养的人原代KFB以观察其转导活性。结果成功构建了TAT-Smad7-HA融合蛋白的原核表达载体pTAT-Smad7-HA,目的蛋白在诱导后获得了高效表达(占菌体总蛋白的25%以上),并成功进行了纯化(纯度达95%以上)、脱盐柱脱盐、Western blot验证、硫氧环蛋白切除及FITC标记,得到相对分子质量约为50×103的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并进一步在体外培养的人KFB细胞中证实了其高转导活性。结论本实验获得了高纯度的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并验证了其在KFB中的高转导活性。 展开更多
关键词 原核表达 tat蛋白转导结构域 瘢痕疙瘩 人Smad7蛋白 TGF-Β/SMAD信号通路
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高效液相色谱法分离TAT和TRAT 被引量:8
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作者 娄忠良 孟子晖 +1 位作者 孟文君 王鹏 《含能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期226-228,共3页
建立了高效液相色谱分离高能炸药奥克托今(HMX)合成反应前体1,3,5,7-四乙酰基-1,3,5,7-四氮杂环辛烷(TAT)和1,3,5-三乙酰基-1,3,5-三氮六氢均三嗪(TRAT)的分析方法,并利用高效液相-质谱联用技术(HPLC-MS)对TAT和TRAT的色谱峰进行了结构... 建立了高效液相色谱分离高能炸药奥克托今(HMX)合成反应前体1,3,5,7-四乙酰基-1,3,5,7-四氮杂环辛烷(TAT)和1,3,5-三乙酰基-1,3,5-三氮六氢均三嗪(TRAT)的分析方法,并利用高效液相-质谱联用技术(HPLC-MS)对TAT和TRAT的色谱峰进行了结构确认。优选后的色谱分离条件为硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:乙腈:水=75∶25(V/V),流速为1.0mL·min-1,检测波长:215nm,进样量为20μL。在上述条件下,TAT和TRAT分别在10~1000μg/ml和30~1000μg/ml范围内与响应信号呈良好的线性关系(R2=0.9999,R2=0.9996),Rs=1.5。 展开更多
关键词 分析化学 1 3 5 7-四乙酰基-1 3 5 7-四氮杂环辛烷(tat) 1 3 5-三乙酰基-1 3 5-三氮六氢均三嗪(TRAT) 奥克托今(HMX) 黑索今(RDX) 高效液相色谱(HPLC)
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人类免疫缺陷病毒Ⅰ型Tat基因真核表达载体的构建
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作者 梁庄万 《医学信息(下旬刊)》 2010年第3期16-17,共2页
目的:构建人类免疫缺病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法:以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4—3为模板,通过PCR扩增HIV-1 Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1... 目的:构建人类免疫缺病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法:以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4—3为模板,通过PCR扩增HIV-1 Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入huh-7细胞。RT—PCR检测其基因转录情况,WesternBlot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质。结果:成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT—PCR证实该质粒能在huh-7真核细胞中有效表达Hiv-1Tat目的片段。结论:成功构建了HIV—ITat基因的真核表达质粒载体,并在huh-7中表达,为在huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 tat基因 载体构建 HUH-7细胞 表达
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Tat-GluR6-9c抑制MLK3-MKK7-JNK信号通路对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用 被引量:1
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作者 荣良群 杨辉 +3 位作者 魏秀娥 裴冬生 张光毅 张清秀 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期231-236,共6页
目的探讨小肽Tat-GluR6-9c对混合性的谱系激酶3(MLK3)、丝裂原活化的蛋白激酶激酶7(MKK7)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平及蛋白表达的影响,以及对海马CAl区神经元损伤的影响。方法采用4-血管阻塞方法建立大鼠全脑缺血模... 目的探讨小肽Tat-GluR6-9c对混合性的谱系激酶3(MLK3)、丝裂原活化的蛋白激酶激酶7(MKK7)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平及蛋白表达的影响,以及对海马CAl区神经元损伤的影响。方法采用4-血管阻塞方法建立大鼠全脑缺血模型,应用免疫印迹的方法分别检测小肽Tat-GluR6-9c对缺血再灌注6h时MLK3、缺血再灌注3d时JNK的磷酸化及蛋白表达水平的影响;采用免疫印迹、免疫组织化学的方法检测小肽Tat—GluR6-9c对缺血再灌注1d时MKK7的磷酸化及蛋白表达水平的影响;采用焦油紫染色方法检测缺血再灌注5d时小肽Tat-GluR6-9c对大鼠海马CAl区神经元损伤的影响。结果Tat-GluR6-9c组MLK3、MKK7及JNK磷酸化水平显著低于缺血再灌注组及对照肽组.海马CAl区神经元存活的数量明显多于缺血再灌注组及对照肽组,差异有统计学意义fP〈0.05)。结论小肽Tat-GluR6-9c能显著抑制脑缺血再灌注诱导的MLK3、MKK7及JNK的磷酸化高峰.降低海马CAl区神经元的损伤。 展开更多
关键词 脑缺血 tat—GluR6 9c 混合性的谱系激酶3 丝裂原活化的蛋白激酶激酶7 C-JUN氨基端激酶
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Tat—SmacN7对人乳腺癌细胞系的放射增敏作用 被引量:2
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作者 郭艳婷 王彦 +7 位作者 杜利清 徐畅 曹嘉 刘建香 陈凤华 付岳 刘强 苏旭 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期13-17,共5页
目的观察Tat—SmacN7对人乳腺癌SK—BR-3细胞放射敏感性的影响并探讨其机制。方法取对数生长期乳腺癌SK—BR-3细胞,分为对照组、叮射线照射组、Tat—SmacN7组和Tat—SmacN7联合1射线照射组(联合组)。MTT法检测Tat—SmacN7对SK—BR-3... 目的观察Tat—SmacN7对人乳腺癌SK—BR-3细胞放射敏感性的影响并探讨其机制。方法取对数生长期乳腺癌SK—BR-3细胞,分为对照组、叮射线照射组、Tat—SmacN7组和Tat—SmacN7联合1射线照射组(联合组)。MTT法检测Tat—SmacN7对SK—BR-3细胞的毒性;克隆形成实验检测Tat—SmacN7的存活分数;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比(SER);流式细胞术检测Tat—SmacN7联合1射线照射对细胞凋亡的影响;Westernblot法检测细胞凋亡抑制蛋白XIAP和cIAP-1蛋白表达水平。结果Tat—SmacN7随浓度升高对SK-BR-3细胞的增殖抑制率增大,药物浓度与细胞增殖率呈正相关(r=0.924,P〈0.05),IC50为(62.62±1.19)μmol/L,IC20为(5.66±0.67)μmol/L;5μmol/LTat—SmacN7能增加SK—BR-3细胞的放射敏感性,联合组与照射组放射增敏比为1.48;6Gy.y射线照射后48h,联合组凋亡率显著高于照射组(t=7.01,P〈0.05);与对照组相比,Tat—SmacN7组XIAP表达水平降低,联合组XIAP和cIAP-1蛋白表达水平均降低。结论Tat—SmacN7通过促进人乳腺癌细胞SK—BR-3细胞的凋亡,增加其辐射敏感性,这一特性与XIAP的表达有关。 展开更多
关键词 tat—SmacN7 乳腺癌 放射增敏 细胞凋亡 凋亡抑制蛋白
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Microparticle Formation and Crystallization Rate of HMX with Supercritical CO_2 Antisolvent Recrystallization 被引量:10
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作者 蔡建国 周展云 邓修 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2001年第3期258-261,共4页
Microparticle formation and crystallization rate of 1,3,5,7-tetranitro-l,3,5,7-tetraazacyclooctane (HMX) in acetone solution using supercritical carbon dioxide antisolvent (GAS) recrystallization were studied. Scannin... Microparticle formation and crystallization rate of 1,3,5,7-tetranitro-l,3,5,7-tetraazacyclooctane (HMX) in acetone solution using supercritical carbon dioxide antisolvent (GAS) recrystallization were studied. Scanning electronic microscopy, X-ray diffraction and infrared radiation were used to examine particle size, crystallinity and chemical structure. The results show that B-HMX microparticle in different average size (2-9.5um) and with narrow size distribution were obtained by controlling the expansibility, expansion speed, initial concentration and temperature during recrystallization of HMX. The formation of nuclei may be a main cause of consumption of solute when the solution is expanded rapidly enough and the equilibrium concentration is lower, in which almost monodisperse microparticle can be obtained. 展开更多
关键词 supercritical carbon dioxide MICROPARTICLE recrystallization rate 1 3 5 7-tetranitro-1 3 5 7-tetraazacyclooctane
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人类免疫缺陷病毒I型Tat真核表达载体的构建及鉴定
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作者 刘昭国 《实用预防医学》 CAS 2010年第10期1961-1964,共4页
目的构建人类免疫缺陷病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1 Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+),构... 目的构建人类免疫缺陷病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达。方法以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1 Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入huh-7细胞。RT-PCR检测其基因转录情况,Western Blot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质。结果成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat,RT-PCR和Western blot方法证实该质粒能在huh-7真核细胞中有效表达HIV-1 Tat目的蛋白质。结论成功构建了HIV-1 Tat基因的真核表达质粒载体,并在huh-7中表达,为在huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1tat 载体构建 HUH-7细胞 表达
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艾滋病治疗靶点的新技术研究进展 被引量:2
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作者 宋翌琰 徐俊驰 胥萍 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2021年第10期637-641,共5页
艾滋病是世界范围内的一类公共卫生问题和社会问题,目前主要采用抗反转录病毒治疗,虽然通过该方法在一定程度上达到了有效控制艾滋病的目的,但是并不能彻底清除潜伏状态的人类免疫缺陷病毒,并且患者耐药问题也日益严重。基于艾滋病治疗... 艾滋病是世界范围内的一类公共卫生问题和社会问题,目前主要采用抗反转录病毒治疗,虽然通过该方法在一定程度上达到了有效控制艾滋病的目的,但是并不能彻底清除潜伏状态的人类免疫缺陷病毒,并且患者耐药问题也日益严重。基于艾滋病治疗的现状,研究者利用免疫、细胞和基因工程技术发展了新型的防治方法。本研究基于辅助受体趋化因子受体5、跨膜蛋白gp41、TAT蛋白、p7核衣壳蛋白和核酸内切酶等在艾滋病治疗中较有潜力的靶点,阐述艾滋病治疗的研究现状和发展前景,为艾滋病的临床治疗提供参考。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 受体 CCR5 跨膜蛋白gp41 tat蛋白 p7核衣壳蛋白 核酸内切酶
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