基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析

热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

128例病毒感染患者血清HSP 70水平变化及HSP 70-1基因多态性分析

目的 分析贵州省某院128例新型冠状病毒感染患者血清HSP 70表达水平及HSP 70-1基因多态性变化,并探讨其临床价值。方法 选取2020年1月至2020年2月贵州省某医院收治的128例新型冠状病毒感染患者(病例组),同期128名健康体检者(对照组)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较两组血清中HSP 70水平变化;采用单核苷酸多态性(SNP)基因分型方法检测HSP 70-1(+190位点)基因序列,分析基因多态性。结果 病例组患者血清中HSP 70蛋白高于对照组,差异有统计学意义(Z=6.924,P<0.05),并且随着病例组患者病程的加重,血清HSP 70水平也逐渐升高,各临床分型的HSP70水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);HSP 70-1(+190位点)的基因型GG、GC、CC在患者病例组均存在,与对照组比较,差异有统计学意义(χ^(2)=6.975,P<0.05),此外,轻型患者HSP 70-1 GC基因型的分布频率(59.26%)及普通型患者HSP 70-1 GC基因型的分布频率(52.69%)均高于对照组(39.84%)(P<0.05),而轻型患者HSP 70-1 GG基因型的分布频率(33.33%)及普通型患者HSP 70-1 GG基因型的分布频率(38.71%)均低于对照组(53.90%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP 70表达水平及HSP 70-1基因分型与新型冠状病毒感染的发生、发展相关,可辅助新型冠状病毒感染患者临床分型的判断。

沙葱萤叶甲GdHsp70-2,GdHsp70-3的克隆鉴定与表达谱分析

为明确沙葱萤叶甲Galeruca daurica热激蛋白70(Heat shock protein 70,Hsp70)基因的序列结构及其系统进化关系,本研究通过PCR技术克隆沙葱萤叶甲Hsp70基因cDNA全长序列与基因组序列,并进行生物信息学与表达谱分析。结果显示,克隆获得了沙葱萤叶甲2条Hsp70基因GdHsp70-2(GenBank登录号:MZ853083)和GdHsp70-3(Genbank登录号:OK585088),基因全长分别为2410 bp和2242 bp,各自编码657和646个氨基酸,均含有3个保守的HSP70家族特征序列,预测蛋白三维结构均由N-端ATPase功能域和C-端底物结合功能域所组成;系统发育分析表明GdHSP70-2,GdHSP70-3分别与松墨天牛(Monochamus alternatus)MaltHSC70-1、玉米根萤叶甲(Diabrotica virgifera virgifera)DvirHSP70-2的亲缘关系最近;基因组DNA克隆获得GdHsp70-2的两段内含子序列,GdHsp70-3则不含有内含子;表达谱分析结果表明GdHsp70-2,GdHsp70-3均在蛹期的表达量最高,在成虫中分别在翅和足的表达量最高。研究有助于加深对沙葱萤叶甲Hsp70基因结构及其进化关系的了解,并为后续深入开展功能研究提供理论依据。

黏虫HSP90/70组织蛋白基因的分子特征与表达特性

为解析黏虫Mythimna separata响应环境胁迫的分子机制,采用RACE和RT-PCR的方法从黏虫中克隆了1个HSP90/70组织蛋白(heat shock 90/70 organizing protein, HOP)基因,并采用qRT-PCR分析了其在多种生物和非生物胁迫下的表达特性。结果表明,MsHOP具有1个1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸,预测的分子量为61.7 kDa。序列分析表明,MsHOP主要由已报道的3个保守四肽重复结构域(TPR1, TPR2A和TPR2B)和2个天冬氨酸-脯氨酸重复基序(DP)构成。基于鳞翅目昆虫HOP构建的系统进化树显示MsHOP与棉铃虫Helicoverpa armigera HOP和烟芽夜蛾Heliothis virescens HOP的亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,MsHOP在黏虫所有发育时期和组织均表达,分别在5龄幼虫和雌成虫中肠的表达量最高。在30℃下处理1 h后,MsHOP的表达水平较对照显著提高,而在33℃~39℃下处理1 h后MsHOP的表达水平则与对照差异不显著。饥饿24~72 h后,MsHOP的表达与对照相比无明显变化。Bt能显著诱导MsHOP的表达,其表达水平随Bt浓度的升高而上调,并在64 IU/mL浓度下的表达量最高。幼虫饲养密度对MsHOP的表达也具有显著影响,其表达水平随密度的升高而上调,在20头/瓶的饲养密度下达到最大值。这些结果表明,MsHOP可能在黏虫的生长发育、抵御杀虫剂和密度胁迫中发挥重要作用。

脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。

鹿结核分枝杆菌MPB70蛋白的表达与免疫原性鉴定

本研究以分离的鹿结核分枝杆菌DNA为模板扩增免疫原性蛋白MPB70基因,获得约590bp片段,并将其克隆,构建原核表达载体pET-30a-MPB70,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后纯化和SDSPAGE分析,在20ku处可见特异性蛋白条带。利用鹿结核阳性血清进行Western blotting鉴定,原核表达的融合蛋白可与鹿结核阳性血清抗体结合,并出现特异的免疫反应。该蛋白可作为特异性抗原进行鹿结核病的检测,从而为鹿结核病诊断方法的研究奠定基础。

犬颅脑枪弹伤后脑组织中热休克蛋白70和c-Myc的表达

目的 :研究犬枪弹伤后脑组织中热休克蛋白 70(Heatshockprotein70 ,HSP70 )和快反应蛋白c myc的变化规律 .方法 :2 4只杂种犬 ,随机分为对照组 ,损伤组 .采用德国小口径步枪子弹致犬颅脑额叶切线伤 (tangentbraininjury,TBI) .用免疫组织化学方法检测伤后 30min ,2 ,6 ,1 2和 2 4h各不同时期弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中HSP70和c myc蛋白的表达 .结果 :对照组脑神经元中HSP70和c myc蛋白表达弱 ,枪弹伤组挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中HSP70蛋白 2h开始增加 (P <0 .0 5 ) ,6h时明显增加 ,1 2h达高峰 (P <0 .0 1 ) ,2 4h开始下降 .c myc伤后 30min开始增加 (P <0 .0 5 ) ,2h达高峰 (P <0 .0 1 ) ,6h开始下降 ,2 4h同对照组 .且 2种蛋白距伤道越近 ,表达越明显 .结论 :HSP70和c Myc蛋白在弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元均有表达 ,两者在脑组织中表达分布范围基本一致 ,但c Myc先于HSP70表达 .

人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定

目的在毕赤酵母(pichiapastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70)。方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70。经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X33。用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆,Westernblot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌。结果经PCR法克隆的hHSP70DNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hHSP70DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDSPAGE和Westernblot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72kD。氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致。rhHSP70表达量高达250mg·L-1。结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌。

棉花HSP70基因的克隆与原核表达

以抗旱性较强的棉花品种‘KK1543’为材料,采用RT-PCR技术克隆了1个棉花HSP70基因,命名为GhHSP70。研究结果表明:GhHSP70基因开放阅读框长1 997bp,编码648个氨基酸,GhHSP70蛋白相对分子量为70.94kD,等电点为4.83。氨基酸序列比对和系统进化树分析发现,GhHSP70与欧洲大叶杨HSP70的亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达到96.4%。为进一步分析基因的功能,构建原核表达载体pGEX-4T-1-GhHSP70,并在大肠杆菌中异源表达。SDS-PAGE分析表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致,重组蛋白在37℃,0.2mmol/L IPTG诱导2h时表达量最大。研究为进一步研究棉花HSP70基因功能奠定基础。

罗非鱼热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达与纯化

以尼罗罗非鱼血液mRNA反转录获得编码罗非鱼Hsp70完整cDNA,重组构建罗非鱼真核表达载体pPIC9K/rtHsp70;在毕赤酵母Pichia pastoris KM71中表达重组罗非鱼的热休克蛋白70(rtHsp70),对表达上清液进行SDS-PAGE及Western blot分析;采用亲和层析、HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化目的蛋白。结果表明:克隆至pMD载体上的基因与目的基因完整编码区序列完全一致;诱导表达上清液经SDS-PAGE及Western blot分析,上清液中蛋白条带大小与目的蛋白相对分子质量大小一致;每升诱导上清液可以获得约2 mg纯化蛋白。本研究中获得的rtHsp70毕赤酵母工程菌及纯化的rtHsp70为后期rtHsp70-肽疫苗研究奠定了基础。

飞蝗热休克蛋白70cDNA片段的克隆和序列分析

采用RT PCR方法对海南、河北和辽宁 3个飞蝗 (LocustamigratoriaL )种群的热休克蛋白 70(HSP70 )基因cDNA片段进行克隆。在事先优化的条件下 ,通过简并性上游引物和下游引物扩增出了河北种群飞蝗HSP70基因的 6 0 4bpcDNA片段 (GenBank登录号为AY2 996 37) ,推导的氨基酸序列包含 2 0 1个氨基酸残基。分析表明 ,由飞蝗该片段推导的氨基酸序列与其他昆虫的同源性较高 ;3个种群该片段的核苷酸序列相似性更高达 98 75 %。由此推测 ,飞蝗种群间抗寒性的差异可能不是HSP70的序列变异引起的 ,而与HSP70的诱导表达有关。

电针对脊髓损伤模型大鼠热休克蛋白70及其mRNA的影响

目的探讨电针对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后热休克蛋白70(Hsp70)及其mRNA(Hsp70mRNA)表达的影响。方法成年雄性SD大鼠,随机分为电针组、模型组和假手术组。采用改良的Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型,电针组动物手术后2h即给予电针处理。分别在1d、2d和3d处死动物,应用实时荧光定量PCR方法检测脊髓损伤部Hsp70mRNA,应用免疫组织化学结合图像定量分析方法检测Hsp70表达。结果手术后1d时模型组和电针组Hsp70mRNA表达量与假手术组比较均明显增高(P<0.05),随后逐渐下降,至3d时已降至假手术组水平。电针组Hsp70mRNA表达下降速率明显较模型组缓慢,Hsp70mRNA表达量在2d时仍明显高于模型组(P<0.05)。模型组和电针组Hsp70蛋白表达也是1d时最高,以后逐渐下降;电针组Hsp70表达在各时间段均明显高于模型组(P<0.05)。结论电针治疗可以增加脊髓损伤大鼠脊髓损伤部Hsp70及其mRNA的表达,减少细胞毒性,从而抑制神经元的凋亡和死亡。

胃癌MG-7抗原模拟表位与HSP70融合基因的构建及表达

目的构建和表达胃癌 MG7模拟表位与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因.方法采用加端 PCR 的方法,将 MG7模拟表位(GC23)的编码序列融合到 HSP 基因的3′端;PCR 获得的融合基因片段经 T-A 克隆法克隆到 pUCm-T 载体上,并进行 DNA 测序;将融合基因片段从 pUCm-T 载体上酶切后,亚克隆到表达载体 PET-21a(+)上;将重组质粒 PET-21a(+)/GC23-hsp 转化大肠杆菌,经IPTG 诱导后,收集细菌,菌体裂解后进行 SDS-PAGE 及Western blot 检测.结果应用 PCR 方法扩增出约2.0kb 的目的片段,序列测定结果证实,模拟表位 GC23序列成功地融合到 HSP70基因的3′端,GC23及 HSP70基因序列均正确;经 EcoR I+Xho I 酶切及 PCR 鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体 PET-21a(+)上;转入重组质粒的大肠杆菌经 IPTG 诱导后,进行SDS-PAGE 发现在 M_r 为72000处有表达量明显增多的蛋白条带,Western blot 证实,M_r72000处的条带为目的条带.结论成功构建并表达了 MG7模拟表位与 HSP70的融合基因.

过氧化氢诱导人血管内皮细胞凋亡及HSP70和Bcl-2基因蛋白表达的研究

目的 :探讨过氧化氢 (H2 O2 )对血管内皮细胞 (VEC)损伤机制和细胞凋亡的调控。方法 :通过人脐静脉内皮细胞株 (ECV 30 4)体外培养 ,采用流式细胞技术、原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法和分子生物学分析相结合的方法观察 H2 O2 对 VEC中热休克蛋白 70 (HSP70 )和 Bcl 2基因蛋白表达及细胞凋亡的影响。结果 :两种检测方法细胞凋亡率变化趋势一致 :10 0、30 0和 5 0 0 mm ol/ L H2 O2 刺激后 ,VEC中 HSP70蛋白表达由(12 .15± 3.0 3) %分别增至 (2 3.80± 8.74) %、(35 .35± 6 .6 8) %和 (35 .85± 5 .83) % ,差异显著 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;而 Bcl 2表达下调 ,由 (2 4.90± 2 .95 ) %分别下降至 (19.35± 3.36 ) %、(18.75± 3.33) %和 (13.0 5±2 .93) % (P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。 H2 O2 可诱导 VEC发生凋亡 ,并在一定范围内呈量效关系。结论 :细胞凋亡是血管内皮细胞受损的主要方式之一 ,HSP70与 Bcl 2表达改变可能共同参与了急性呼吸窘迫综合征的发病。

分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70的构建及鉴定

目的用结核分枝杆菌热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)启动子改建分枝杆菌穿梭质粒pJEM11为分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70,并对其功能进行鉴定。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HSP70启动子,克隆至pMD18-T载体,经鉴定后,再定向克隆入pJEM11的ApaⅠ位点与SnaBⅠ位点之间,构建pJHSP70载体,并对载体进行PCR及酶切鉴定,然后再将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)尿素酶B亚单位(urease B subunit,UreB)基因克隆入pJHSP70载体,评价其在耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,M.smegmatis)mc2155中的表达情况。结果从BCG基因组中扩增出160bp的基因片段,所构建的穿梭质粒经酶切和PCR鉴定与预期结果一致。测序结果证实插入片段正确,UreB基因在M.smegmatis中成功表达。结论成功改建穿梭质粒pJEM11为穿梭表达质粒pJHSP70。

家蚕热休克蛋白70家族基因的染色体定位及表达特征

热休克蛋白70家族(Hsp70)是非常保守的蛋白家族,每个物种的Hsp70家族都有多个成员,每个成员都可能具有特殊的功能。为了能够对家蚕Hsp70家族各成员进行科学命名和了解其特有的功能,分析家蚕Hsp70家族成员的编码基因及其在染色体上的定位,并通过实时荧光定量PCR方法检测这些基因在5龄第3天幼虫中肠、脂肪体和丝腺组织中的转录表达情况。家蚕诱导型Hsp70家族成员Bmhsp70A和Bmhsp70B的编码基因集中分布在第27号染色体上,有多个拷贝;组成型Bmhsp70家族成员的编码基因则分布在不同的染色体上,一般仅有1个拷贝。家蚕Hsp70家族基因中有10个能转录并翻译蛋白质产物的成员,还有1个能正常转录但不能正确翻译的假基因。实时荧光定量PCR结果表明:在常温(25℃)条件下,组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-4和Bmhsc70-3的表达水平较高,而其它基因成员的表达水平则相对较低,诱导型Bmhsp70家族基因成员在常温下也有一定程度的基础表达;40℃热激2 h后,Bmhsp70家族所有基因的表达水平都有所升高,其中诱导型Bmhsp70家族基因Bmhsp70B和Bmhsp68的转录表达上升水平远高于组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-3和Bmhsc70-4。不同表达类型的家蚕Hsp70家族基因成员在5龄幼虫中肠、丝腺和脂肪体中的表达情况不同,热激2 h后的表达变化规律也不完全相同,提示家蚕Hsp70家族成员具有各自特殊的功能。

热休克蛋白70-hom基因+2437(T/C)位点基因多态性与肺癌的关系

目的：研究热休克蛋白（HSP）70-hom基因＋2437（T／C）单核苷酸多态性与肺癌遗传易感性的关系，探讨肺癌易感的HSP70一hom基因型。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测159例肺癌患者和202名正常对照人群HSP70-hom基因＋2437（T／C）位点多态性，采用病例一对照研究分析其与肺癌的关系。结果：病例组与对照组之间HSP70．hom各基因型（TT、TC和CC）频率及T和c的等位基因频率分布，差异均有统计学意义（P〈0．05）。对病理类型分层分析并经年龄、性别、吸烟状况、饮酒史和肿瘤家族史调整后发现，非TT基因型携带者患肺鳞癌危险性是TT基因型携带者的2．17倍（95％CI：1．17～4．00）。对吸烟状况进行分层分析并经年龄、性别、饮酒史、肿瘤家族史调整后发现，吸烟者及重度吸烟者中非TT基因型调整OR值分别为5．19（95％CI：1．57～17．19）和9．23（95％CI：2．52～33．84），与肺癌有强关联，提示TT基因型是吸烟者特别是重度吸烟者的保护因素。结论：HSP70一hom基因＋2437（T／C）位点TT基因型可能是肺鳞癌的遗传保护因素，并可降低吸烟者特别是重度吸烟者患肺癌的危险度。

缢蛏ScHsc70 cDNA的分子特性和表达分析

从缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)cDNA文库中筛选出一条热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)同源序列,采用EST扩增和5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增方法获得全长cDNA序列,共2 335 bp,包括76 bp的5′非翻译区和309 bp的3′非翻译区,以及1 950 bp的开放阅读框。阅读框共编码649个氨基酸,推算的分子量约为70.89 kD,理论等电点为5.28。氨基酸序列分析结果表明,该基因的氨基酸序列含有HSP70家族的3个签名序列,2个糖基化位点,1个ATP-GTP结合位点,且C末端具有GGXP四肽重复序列以及细胞质特异性调控基序EEVD。该基因是组成型HSC70(Heat shock cognate 70)亚家族基因成员,被命名为ScHsc70。基于氨基酸序列的双壳贝类聚类分析表明,缢蛏与南极帽贝(Laternula elliptica)、文蛤(Meretrix meretrix)的亲缘关系最近。荧光定量表达分析显示,ScHsc70 mRNA在缢蛏水管、鳃、斧足、外套膜、肝和性腺等组织中以不同水平存在,其中在外套膜中的表达量最低,而在水管和肝中的表达量最高。经副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和副鳗弧菌(V.anguillarum)诱导后,ScHsc70 mRNA在缢蛏肝中的水平呈现先升高后下降的变化趋势,且分别在感染后的第20小时和第30小时达到最高。结果提示,缢蛏ScHsc70基因可能参与了对细菌感染的防御反应。

脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70基因的表达研究

目的 对所建立的新生大鼠脑缺氧缺血 (HI)模型进行热休克蛋白 70基因的表达研究 ,评估检测该基因的表达能否作为缺氧缺血及其程度的有用标志。方法 应用自行研制的新生大鼠缺氧实验装置 ,建立新生大鼠脑缺氧缺血模型。应用竞争性RT PCR方法对脑HI模型进行热休克蛋白 70基因表达的检测。结果 HI组在HI后 2h即观察到HSP70mRNA出现明显表达 ,48h达高峰 ,并在 72h内维持较高水平 ,HI后 7d表达明显下降 ,但仍高于正常水平。正常新生大鼠在相应各时段内 ,其HSP70mRNA的表达则极其微弱。结论 缺氧缺血诱导了HSP70基因的表达 ,检测HSP70基因可作为缺氧缺血及其程度的有用标志 。

毒死蜱诱导大鼠肝组织热休克蛋白70基因表达的研究

目的研究毒死蜱诱导大鼠肝组织热休克蛋白70(HSP70)基因表达的变化,为毒死蜱环境污染早期监控及暴露人群的保护提供依据。方法将Wistar大鼠随机分成17、8.5及4.25mg/kg毒死蜱染毒组及阴性对照组,每组12只,雌雄各半,每日经口灌胃不同浓度毒死蜱水稀释液,连续染毒14d,运用RT-PCR扩增技术观察肝组织HSP70mRNA表达的变化,并进行血清胆碱酯酶(CHE)活力测定。结果各剂量组动物肝组织HSP70mRNA表达及CHE活力呈剂量-效应关系,8.5及17mg/kg组HSP70 mRNA表达明显增加,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);4.25mg/kg组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。17mg/kg组血清CHE活力明显下降,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HSP70基因是毒死蜱所致环境污染的敏感基因,提示HSP70基因表达可作为毒死蜱污染早期监控的生物标志物。