牛脑液泡型质子泵70kD和33kD亚基基因的表达

已分离了编码牛脑液泡型质子泵的７０ｋＤ亚基的ｃＤＮＡ，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了７０ｋＤ亚基的编码片段，同时直接从牛脑ｃＤＮＡ库中得到了３３ｋＤ亚基的编码片段．分别将相应片段连接到ＰＥＴ载体上完成７０ｋＤ和３３ｋＤ亚基基因在大肠杆菌中的表达．ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析表明７０ｋＤ和３３ｋＤ亚基基因均得到明显表达．

SeO_3^（2－）及SeO_3^（2－）和半胱氨酸或还原型谷胱甘肽联用对牛脑V

Ｓｅ_３^（２－）对牛脑Ｖ型质子转运ＡＴＰ酶复合体活力呈现明显的抑制作用。这种抑制作用具有对剂量和预保温时间的依赖关系，且不被稀释效应所恢复，但过量的ＤＴＴ可去除这种抑制作用。半胱氨酸对这种抑制作用呈双功能效应。低浓度时促进抑制作用，高浓度时部分恢复抑制作用。还原型谷胱甘肽与半胱氨酸有类似效应。但促进抑制作用没有半胱氨酸强，而恢复抑制作用却较半胱氨酸强。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影图谱表明，ＳｅＯ_３^（２－）和半脱氨酸优先结合在７０ｋＤ亚基上。并且验证了ＡＴＰ酶复合体的－ＳＨ基和ＳｅＯ_３^（２－）及半胱氨酸的－ＳＨ基以－Ｓ－Ｓｅ－Ｓ－键相连接。根据上述结果，讨论了７０ｋＤ亚基的－ＳＨ基及其相关的结构域涉及到ＡＴＰ酶的活性中心，７０ｋＤ亚基可能是ＡＴＰ酶复合体的水解活性亚基。