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慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡
被引量:
1
1
作者
石华
邓军洪
+4 位作者
郑少斌
王铸
曹开源
周亮
万华
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期603-609,共7页
【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌78...
【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)、CLU-RNAi-LV2(KD2)、CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化。用细胞划痕实验、MST-1、流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖、迁移、凋亡等生物学行为的改变。【结果】成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒。Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1、KD2、KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%~96.5%和0。Western blot结果显示KD1、KD2、KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%、46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达。划痕实验显示24 h时KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43±25.92)小于NC组(101.35±6.05)和CON组(68.13±6.64,P<0.05)。WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P<0.05),各组间差异(P<0.05),均有统计学意义。流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组、CON组细胞凋亡率分别为(6.23±2.51)%、(1.05±0.30)%和(1.17±0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组、CON组相比凋亡率增加(P<0.05),差异有统计学意义。肾癌786-O细胞的增殖、迁移受到抑制,而凋亡率增加。【结论】筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移并促进细胞凋亡。
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关键词
RNA干扰
慢病毒
CLUSTERIN
肾细胞癌
786
-
O
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职称材料
题名
慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡
被引量:
1
1
作者
石华
邓军洪
郑少斌
王铸
曹开源
周亮
万华
机构
南方医科大学南方医院泌尿外科
广州医学院附属广州市第一人民医院泌尿外科
中山大学临床检验标准化研究中心//中山医学院微生物学教研室
出处
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期603-609,共7页
基金
广东省科技计划项目(2009B030801053)
广州市科技计划项目(2009Z1-E381-02)
文摘
【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)、CLU-RNAi-LV2(KD2)、CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化。用细胞划痕实验、MST-1、流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖、迁移、凋亡等生物学行为的改变。【结果】成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒。Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1、KD2、KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%~96.5%和0。Western blot结果显示KD1、KD2、KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%、46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达。划痕实验显示24 h时KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43±25.92)小于NC组(101.35±6.05)和CON组(68.13±6.64,P<0.05)。WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P<0.05),各组间差异(P<0.05),均有统计学意义。流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组、CON组细胞凋亡率分别为(6.23±2.51)%、(1.05±0.30)%和(1.17±0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组、CON组相比凋亡率增加(P<0.05),差异有统计学意义。肾癌786-O细胞的增殖、迁移受到抑制,而凋亡率增加。【结论】筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移并促进细胞凋亡。
关键词
RNA干扰
慢病毒
CLUSTERIN
肾细胞癌
786
-
O
Keywords
RNA interference
lentivirus
clusterin
human renal cell carcinoma
756-0
分类号
R737.11 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡
石华
邓军洪
郑少斌
王铸
曹开源
周亮
万华
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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