缺氧对786-0细胞体外黏附和迁移能力的影响

目的:探讨缺氧条件下肾癌786-0细胞体外黏附和迁移能力的变化。方法:将786-0细胞分别置于正常氧(37℃体积分数为5%CO2和21%O2饱和度,正常组)和缺氧(37℃体积分数为10%O2、5%CO2及85%N2,缺氧组)环境中培养,采用MTT法和Boyden小室法检测2组细胞的黏附能力和侵袭能力。结果:正常组786-0细胞的黏附率为(71.6±6.1)%,与缺氧组的(84.2±4.4)%相比,差异有统计学意义(t=3.748,P=0.006)。缺氧组786-0细胞的穿膜细胞数为(48±6),高于正常组的(28±5)(t=5.722,P=0.001)。结论:缺氧条件下肾癌786-0细胞的黏附和迁移能力增强。

薯蓣皂苷对人肾癌786-0细胞缝隙连接功能的影响

目的探讨薯蓣皂苷(Dioscin,Dio)对人肾癌786-0细胞缝隙连接(Gap junction,GJ)功能的影响及其作用机制。方法 MTT法测Dio对786-0细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞术结合荧光示踪法分析GJ功能变化,RT-PCR和Western blot分析连接蛋白基因表达。结果 0～2.5μmol.L-1 Dio处理786-0细胞48h不影响其存活率;用0、0.1、0.5、1和2μmol.L-1 Dio处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,Dio能明显提高786-0细胞Calcein传递,流式细胞术分析对照组和实验组的绿色荧光细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)分别是0.13±0.01、0.23±0.01、0.30±0.01、0.56±0.02和1.15±0.02,各实验组G4/G3值明显高于对照组(P<0.01);RT-PCR和Western blot分析结果显示,用0、0.1、0.5、1和2μmol.L-1 Dio处理细胞48 h对其Cx43、Cx32和Cx26表达无明显影响。结论体外较低浓度Dio能够有效促进786-0细胞GJ功能,且具有明显的剂量效应关系。但Dio促进GJ机制并不是通过上调Cx43、Cx32和Cx26蛋白表达途径。

白藜芦醇对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5 mRNA表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(RES)对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响。方法:取对数生长期的786-0细胞,用含25μmol/LRES的培养基(实验组)培养24、48及72h后,应用流式细胞术检测786-0细胞周期和凋亡情况,采用原位杂交技术检测细胞中PDCD5mRNA的表达情况,均以不含RES的培养基作为空白对照。结果:25μmol/LRES作用24h后,实验组786-0细胞G1期及G2期比例显著下降,S期比例明显升高。经25μmol/LRES处理24、48及72h后,实验组786-0细胞凋亡细胞数(F组间=869.853,P<0.001)和PDCD5mR-NA的表达均高于空白对照组(F时间=10.067,P<0.001;F组间=649.629,P<0.001),差异有统计学意义。结论:RES可上调人肾细胞癌786-0细胞PDCD5mRNA的表达,使786-0细胞阻滞在S期而诱导细胞凋亡。

As_2O_3诱导人肾癌786-0细胞凋亡及其分子机制的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导786-0细胞凋亡的作用及其分子机制。方法用FCM和TUNEL等方法观察As2O3诱导786-0细胞凋亡,以ICC、RT-PCR、ISH、Western blot和EMSA技术等检测凋亡相关基因p53、bcl-2、c-myc、c-fos、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达及NF-κBDNA结合活性的改变。结果2μmol/L以上浓度As2O3作用786-0细胞24h后开始发生细胞凋亡,出现凋亡的形态学改变和特征性亚二倍体峰(凋亡峰),使786-0细胞内p53活性升高(P<0.05),而bcl-2、c-myc、c-fos和NF-κBp65基因表达降低(P<0.05),NF-κBDNA结合活性也被显著抑制(P<0.01)。结论As2O3可能通过降低NF-κBp65基因表达和NF-κBDNA结合活性,下调bcl-2、c-myc和c-fos基因表达,而增加p53基因的表达,诱导人肾癌786-0细胞凋亡。

人参皂苷Rg3对常氧和缺氧条件下Eca-109和786-0细胞VEGF、HIF-1α和COX-2表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg3对常氧和缺氧条件下Eca-109和786-0细胞血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:Eca-109和786-0细胞分别于常氧和缺氧条件下培养,并分别给予不同浓度的Rg3处理。采用MTT法检测Rg3对2种细胞增殖的影响,Real-timePCR检测2种细胞VEGF和HIF-1αmRNA的表达,ELISA法检测2种细胞VEGF蛋白的表达,Westernblot检测2种细胞HIF-1α和COX-2蛋白的表达。结果:在常氧或缺氧环境中,Rg3均能抑制Eca-109和786-0细胞增殖;抑制2种细胞VEGFmRNA和蛋白的表达及COX-2蛋白的表达,同时抑制HIF-1αmRNA的表达,其作用呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:Rg3抑制常氧和缺氧状态下Eca-109和786-0细胞的增殖,其机制可能与其抑制HIF-1α和COX-2的表达,从而抑制VEGF的表达有关。

PLCε基因通过NF-κB/p65途径抑制肾癌786-0细胞的增殖

目的探讨RNA干扰技术沉默人源磷脂酶Cε(PLCε)基因对肾癌786-0细胞p65核转位的调控,对786-0细胞增殖的影响及其机制。方法用携带PLCεshRNA基因的真核表达质粒pGenesil-PLCε转染786-0细胞,克隆形成实验检测786-0细胞的增殖,RT-PCR检测PLCε、c-Myc和COX-2 mRNA的表达,Western blot检测PLCε、c-Myc、COX-2和p65总蛋白及p65在细胞核的表达,细胞免疫荧光检测p65在细胞核与细胞质的定位。同时应用p65特异的抑制剂BAY11-7082处理786-0细胞,Western blot检测c-Myc和COX-2蛋白的表达。结果转染pGenesil-PLCε质粒的786-0细胞生长明显受抑制;转染pGenesil-PLCε质粒细胞中PLCε、c-Myc和COX-2 mRNA和蛋白表达水平均较对照组pGenesil-NP明显下调(P<0.01),且抑制核中p65蛋白的表达(P<0.01),细胞免疫荧光结果显示转染pGenesil-PLCε质粒组p65在细胞核中的表达较对照组pGenesil-NP明显下降;BAY11-7082抑制c-Myc和COX-2蛋白的表达(P<0.01),且呈时间浓度依赖性。结论沉默PLCε基因后可能是通过抑制p65的核转位及c-Myc、COX-2的表达抑制786-0细胞的增殖。

细胞因子对肾癌细胞株786-0、GRC-1 Fas、FasL表达的调节及其意义

目的 :研究细胞因子对肾癌株Fas、FasL表达的影响及其意义。方法 :单独或联合应用IFNγ ,IFNα ,IL 2 ,TNFα刺激肾癌株 786 0、GRC 1细胞并检测Fas、FasL表达 ,以Fas单克隆抗体 (FasAb)诱导其凋亡 ,以JurkatT细胞共培养试验检测其FasL功能。结果 :1 IFNγ、IFNα均能显著上调 786 0、GRC 1细胞的Fas表达 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,并促进FasAb诱导的凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。 2 TNFα、IFNα能分别上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达。IFNγ能显著上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达(P<0 0 1,P <0 0 1) ,并促进JurkatT细胞凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :IFNγ、IFNα可增强肾癌细胞株的Fas表达 ,并促进FasAb介导的凋亡。但其亦能上调肾癌细胞FasL表达并增强其对淋巴细胞的攻击作用。

没食子儿茶素没食子酸酯对Cr^(6+)诱导的Vero及786-0肾细胞凋亡的影响

目的 探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肾脏受活性氧应激损伤的保护作用。方法 以Cr6 +应激诱导Vero和 786 0肾细胞凋亡为实验模型 ,用吖啶橙染色、流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法研究了EGCG对两种肾细胞凋亡的影响。结果 Cr6 +浓度依赖地降低Vero和 786 0细胞存活率 ,IC50 分别为 9.8和 8.6mg·L- 1;其中 4 0 0mg·L- 1/2hCr6 +处理可诱导Vero和 786 0细胞凋亡。2 0～ 6 0mg·L- 1EGCG有效抑制Cr6 +引起的Vero活细胞数下降 ,且 4 0mg·L- 1EGCG显著抑制该细胞凋亡 ;但EGCG对 786 0细胞没有相应的保护作用 ,相反促进 786 0细胞凋亡。结论 EGCG对正常肾细胞的氧化应激损伤有保护作用 ,但对肿瘤细胞的氧化损伤没有保护作用。

Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡的相关性研究

目的研究Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明癌细胞增殖和凋亡的相关性。方法人肾癌细胞系786-0作为Survivin转染组,肾小管上皮细胞系HK-2作为阴性对照组,分别用Survivin模拟物转染;转染72 h后测定Survivin基因及蛋白表达;对比两组细胞吸光值、细胞数及凋亡细胞比值;对Survivin基因和蛋白表达水平与细胞吸光值、细胞数和凋亡细胞比值进行Pearson相关性分析。结果转染后,Survivin转染组Survivin mRNA、Survivin蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05);吸光值从第1 d开始显著低于阴性对照组(P<0.05);细胞数从第2d开始显著少于阴性对照组(P<0.05)。786-0细胞的凋亡比例从第1d开始显著低于阴性对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Survivin基因和蛋白表达水平与吸光值和细胞数呈负相关,与凋亡细胞比值呈正相关。结论 Survivin基因和蛋白表达可以抑制786-0肾透明癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

白花蛇舌草乙醇提取物对人肾癌786-0细胞体外生长及体内成瘤的影响

目的:探讨白花蛇舌草乙醇提取物(Ethanol extract of Hedyotis Diffusae Herba,EEHDH)对人肾癌786-0细胞体外生长及体内成瘤的影响。方法:体外实验采用MTT法检测EEHDH对人肾癌786-0细胞的生长抑制作用;体内实验采用人肾癌786-0细胞实体瘤小鼠动物模型,取30只昆明小鼠,6只为正常对照组,余24只昆明种小鼠每只左后肢腋窝皮下接种0.2 m L肿瘤细胞悬液,24 h后称质量,随机分为模型对照组、EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组和EEHDH高剂量组,每组各6只。正常组和模型对照组灌胃等体积饮用水,EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组和EEHDH高剂量组分别灌胃含生药量5.0 g·kg-1、10.0 g·kg-1、20.0 g·kg-1的EEHDH溶液,每日1次,连续给药14 d,末次给药24 h后颈椎脱臼处死动物,切开肿瘤部位,剥离瘤块,用滤纸吸净其上液体,称瘤块质量,计算抑瘤率。同时分离胸腺、脾脏,精密称质量,计算胸腺指数、脾脏指数。结果:EEHDH在体外可显著抑制人肾癌786-0细胞的增值,其效果与剂量和作用时间相关。体内试验表明,与模型组比较,EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组、EEHDH高剂量组均能明显减轻瘤块的质量,差异具有统计学意义(P<0.05),抑瘤率分别为16.02%、31.22%和34.26%,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠荷瘤后,其脾脏指数、胸腺指数比较正常组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组、EEHDH高剂量组能显著提高脾脏指数,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EEHDH在体外能明显抑制人肾癌786-0细胞的增值,体内能显著抑制荷瘤小鼠肾癌786-0细胞生长,与调节免疫器官功能有关。

叶下珠抑制人肾癌786-0细胞增殖作用的研究

目的观察叶下珠提取物对人肾癌786-0细胞增殖抑制作用并探讨叶下珠提取物发挥该作用的机制,为叶下珠的临床应用更进一步的提供理论依据。方法用不同浓度的叶下珠(浓度分别为1、10、100、1000μg/m L)作用于人肾癌786-0细胞株,采用CCK-8法检测叶下珠对肾癌786-0细胞增殖效应的影响,采用流式细胞术(FCM)检测叶下珠对肾癌786-0细胞周期的影响,采用蛋白印迹法检测叶下珠对Survivin蛋白表达水平的影响。结果 CCK-8法结果提示,不同浓度的叶下珠均可显著抑制肾癌786-0细胞的增殖,且抑制率呈时间、剂量依赖关系。FCM检测发现叶下珠可使肾癌786-0细胞周期中的G0/G1期比例增加,S期缩短。蛋白印迹法显示,叶下珠可使肾癌786-0细胞中Survivin蛋白表达水平降低。结论通过建立人肾癌786-0细胞的体外抗肿瘤实验模型,预试验结果表明叶下珠乙醇提取物对人肾癌786-0细胞增殖具有抑制作用。

中药千金子对肾癌细胞株786-0增殖作用的影响及对G250蛋白影响研究

目的 探讨中药千金子对肾癌细胞株786-0增殖作用的影响及对G250蛋白的影响研究.方法 选用肾癌细胞株786-0,分为A组（对照）、B组（5 mg/mL）、C组（10 mg/mL）、D组（20 mg/mL）,各组分别采用不同浓度千金子水溶液处理786-0细胞株.MTT比色法检测细胞增殖抑制率,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,western blot法检测细胞Fas、Caspase3、Caspase7、G250蛋白表达水平,RT-PCR法检测细胞G250 mRNA表达水平.结果 ①各浓度千金子水溶液在24、48、72h对786-0细胞增殖抑制率较高,差异有统计学意义（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强.②B、C、D组细胞核均有明显的凋亡形态学变化.③与A组比较,C、D组细胞凋亡率较高（P〈0.05）,C、D组G1期细胞比例较高（P〈0.05）,C、D组S期及G2期细胞比例较低,差异有统计学意义（P〈0.05）.④与A组比较,B、C、D组Caspase3、Caspase7蛋白表达水平较高（P〈0.05）,C、D组Fas蛋白表达水平较高,差异均有统计学意义（P〈0.05）.⑤与A组比较,B、C、D组G250 mRNA及G250蛋白表达水平较高,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 中药千金子对肾癌细胞株786-0增殖有明显的抑制作用,其机制为上调G250抗原及Fas、Caspase3、Caspase7蛋白表达,促进细胞发生G1期阻滞,引起786-0细胞凋亡.

索坦对肾透明细胞癌786-0细胞生长与Tiam1表达的影响

目的:探讨索坦对肾透明细胞癌786-0细胞生长与Tiam1表达的影响。方法:将对数生长期肾透明细胞癌786-0细胞分为4组:索坦低、中、高浓度处理组和正常对照组。索坦低、中、高浓度处理组细胞分别用2、4和8μmol/L索坦培养24、48和72h。采用免疫细胞化学和原位杂交技术检测各组细胞中Tiam1蛋白和mRNA的表达。采用MTT和TUNEL法检测培养48h各组细胞凋亡和存活情况。结果:各组细胞培养24、48和72h时间点的Ti-am1蛋白及mRNA表达比较,差异有统计学意义(F=898.782、551.191、510.484,294.803、460.127、358.019,P均<0.05)。索坦高、中、低浓度处理组不同时间点Tiam1蛋白及mRNA表达比较,差异有统计学意义(F=38.601、81.324、262.601,120.671、509.902、56.464,P均<0.05)。同一时间点随着索坦浓度增加,细胞Tiam1蛋白及mRNA的表达减弱(P<0.05);同一浓度处理组中,随着时间延长,Tiam1蛋白及mRNA的表达降低(P<0.05)。培养48h,各组细胞存活率和凋亡率比较,差异有统计学意义(F=123.432和120.341,P均<0.001),随着索坦浓度增加,细胞存活率降低,凋亡率增加(P<0.05)。结论:索坦可能通过抑制Tiam1基因在肾癌细胞株786-0中表达,促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞生长。

姜黄素对人肾癌细胞786-0体外增殖的抑制作用

目的观察姜黄素对人肾癌细胞786-0体外增殖的抑制作用。方法采用MTT法测定细胞增殖。结果由6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L的姜黄素处理24h、48h、72h后,786-0细胞生长均受到不同程度地抑制,与对照组相比各处理组OD值均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05),各处理组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。不同浓度姜黄素(6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)作用786-0细胞24h、48h、72h后抑制率分别变化为8.1%~58.0%、9.4%~67.7%、13.1%~75.3%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各处理组PI值均小于对照组,且随姜黄素素浓度增大而逐渐减小,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能有效地抑制激素人肾癌细胞786-0增殖,姜黄素有可能成为一种治疗肾细胞癌的靶向新药。

奎纳克林对人肾癌细胞系786-0的抑制作用研究

目的:研究奎纳克林(quanacrine,OC)对786-0细胞的抑制作用,为临床应用奎纳克林治疗肾癌提供理论依据。方法:采用细胞培养、光学显微镜及MTT法研究奎纳克林对786-0细胞的抑制作用。结果:MTT实验显示QC处理24h胚肾细胞HEK293IC50为24.836μmol/L,肾癌细胞系786-0IC50为10.421μmol/L;QC处理48h胚肾细胞HEK293IC50为21.044μmol/L,肾癌细胞系786-0IC50为6.822μmol/L;QC处理72h胚肾细胞HEK293IC50为15.643μmol/L,肾癌细胞系786-0IC50为3.859μmol/L。结论:QC对肾癌细胞系786-0有明显的增殖抑制作用,作用随时间延长和浓度提高而增强,且其抑制作用具有选择性。

青蒿素对肾癌细胞株786-0细胞的增殖和Fascin表达的影响

目的:探讨青蒿素对肾癌细胞株786-0细胞的增殖和Fascin表达的影响。方法:选用786-0肾癌细胞株,分别通过不同浓度的青蒿素作用细胞株,收集不同时间点(0、24、48、72 h)的细胞,运用细胞增殖CCK-8法测定青蒿素对肾癌细胞株786-0细胞的增殖;通过Western Blot检测青蒿素干预后肾癌细胞株786-0细胞Fascin的表达。结果:随着药物浓度的增加,青蒿素可明显抑制肾癌细胞株786-0细胞的增殖(P<0.01),青蒿素可显著降低肾癌细胞株786-0 Fascin蛋白的表达(P<0.05)。结论:青蒿素通过抑制肾癌细胞增殖和Fascin蛋白的表达,从而抑制肿瘤细胞的恶性增生。

沉默PDCD4对786-0细胞增殖能力的影响

目的:探讨在肾癌细胞系中,沉默PDCD4对786-0细胞增殖能力的影响。方法:将786-0细胞分为两组(PDCD4 siRNA和阴性对照siRNA),分别转染PDCD4 siRNA和negative control siRNA,采用EDU增殖实验研究沉默PDCD4对肿瘤细胞增殖的影响。结果:EDU增殖实验中,阴性对照组(NC组)的增殖率为(28.6±2.3)%,PDCD4siRNA组的增殖率为(44.7±3.6)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默PDCD4后786-0细胞的增殖能力明显比阴性对照组强,表明PDCD4具有促进肾癌细胞增殖的作用。

LncRNA PVT1对肾癌细胞株786-0增殖、侵袭和迁移的影响研究

目的:探讨长链非编码核糖核酸PVT1(LncRNA PVT1)在肾癌细胞株786-0中表达及其对肾癌细胞株786-0增殖、侵袭、迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法比较人正常肾细胞株与人肾癌细胞株786-0中LncRNA PVT1表达差异,采用小干扰RNA(siRNA)转染786-0,使LncRNA PVT1基因沉默后通过CCK-8法检测LncRNA PVT1沉默对细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测LncRNA PVT1沉默对786-0细胞迁移能力、侵袭能力的改变,通过蛋白质印记法(Western blot)检测增殖相关蛋白β-catenin、cyclin D1及侵袭迁移相关蛋白N-cadherin、vimentin、E-cadherin表达情况。结果:与正常组、癌旁组相比,肾癌组细胞LncRNA-PVT1相对表达量显著升高(P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,siPVT1组LncRNA-PVT1相对表达量显著降低(P<0.05),转染后48 h后OD值显著降低(P<0.05),细胞β-catenin、Cyclin D1蛋白水平显著降低(P<0.05),侵袭细胞数、迁移细胞数显著降低(P<0.05),N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:肾癌细胞株786-0中LncRNA PVT1高表达,沉默LncRNA PVT1表达可抑制786-0细胞增殖、降低细胞侵袭、迁移能力。

As_2O_3抑制人肾癌786-0细胞血管生成及浸润转移机制的初步研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抑制人肾癌细胞系786-0细胞血管生成及浸润转移的机制。方法:采用免疫细胞化学方法检测As2O3处理前后786-0细胞VEGF、nm23、MMP-9、TIMP-1蛋白表达的改变;RT-PCR分析TGF-β1、TβR-I和TβR-IImRNA表达的改变。结果:2μmol/L As2O3处理肾癌786-0细胞72h后可显著抑制VEGF、MMP-9的蛋白表达(P<0.01),而促进786-0细胞中TIMP-1和nm23蛋白的表达(P<0.05)。786-0细胞中缺乏TβR-I mRNA,As2O3处理后,786-0细胞中TGF-β1和TβR-II mRNA表达无改变(P>0.05)。结论:As2O3通过抑制VEGF和MMP-9的蛋白表达,增加TIMP-1和nm-23蛋白的表达,抑制786-0细胞的血管生成和转移。

As_2O_3对肾癌细胞786-0细胞周期的影响及其机制的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人肾癌细胞系786-0的细胞周期、周期素(Cyclin)和周期素依赖性激酶抑制剂(DKI)的影响,探讨As2O3抗肾癌作用的机制。方法:采用细胞培养、流式细胞技术观察As2O3作用786-0细胞后细胞周期的改变,以免疫细胞化学和RT-PCR技术等检测As2O3致细胞Cyclin蛋白和CDKI基因的改变。结果:以2μmol/L或5μmol/LAs2O3作用786-0细胞24h、48h、72h,使其细胞周期停滞于G2/M和G0/G1期,并出现细胞凋亡,周期素蛋白CyclinA、B1、D1、E表达均不同程度降低(P<0.05),而其CDKI基因p16、p21WAF/CIPI、p27kip1表达升高(P<0.05)。结论:As2O3通过降低CyclinA、B1、D1、E蛋白的表达和增强p16、P21WAF/CIPI、p27kip1活性,将786-0细胞阻滞于G2/M和G0/G1期,达到其抑制增殖和诱导细胞凋亡的作用。