番茄红素通过SIRT1/NF-κB轴抑制肾癌786-O细胞增殖且促进其凋亡

目的:探讨番茄红素通过沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)轴对肾癌786-O细胞增殖、凋亡的影响。方法:常规培养人正常肾细胞HK-2和人肾癌细胞786-O,实验分为对照组(0.1%DMSO)、顺铂组(40μg/mL)、番茄红素低质量浓度(2.5μg/mL)组、番茄红素高质量浓度(5μg/mL)组、番茄红素(5μg/mL)+EX527(SIRT1抑制剂)(3μmol/L)组。CCK-8法、克隆形成实验检测各组HK-2、786-O细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组786-O细胞的凋亡,RH123、DCFH-DA染色分别检测各组786-O细胞的线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)水平,WB法检测各组786-O细胞中凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2、C-casp3和SIRT1/NF-κB轴相关蛋白SIRT1、p-NF-κB蛋白的表达。786-O细胞移植瘤实验检测番茄红素低(5 mg/kg)、高质量浓度(20 mg/Kg)、顺铂(2 mg/kg)、番茄红素(20 mg/kg)+EX527(10 mg/kg)对移植瘤生长的影响,TUNEL法检测各组移植瘤组织中的细胞凋亡。结果:番茄红素呈剂量依赖性地抑制786-O细胞的增殖活性,番茄红素、顺铂均明显抑制786-O细胞的克隆形成能力且促进其凋亡,细胞中MMP损伤率升高而ROS水平降低,凋亡相关蛋白BAX、C-casp3表达均显著升高(均P<0.05)而Bcl-2表达下调(P<0.05),SIRT1表达显著升高(P<0.05)而p-NF-κB的表达显著降低(P<0.05),上述作用均可被EX527逆转;番茄红素、顺铂抑制786-O细胞移植瘤的生长且促进其细胞凋亡,其作用也能被EX527逆转。结论:番茄红素通过上调SIRT1、抑制NF-κB通路的激活进而抑制786-O细胞增殖且诱导其凋亡。

融合PE38的抗CD70纳米抗体免疫毒素的制备及其对肾透明细胞癌786-O细胞的杀伤作用

目的:构建靶向CD70分子的重组免疫毒素,通过表达、纯化制备PE38与抗CD70纳米抗体重组蛋白,体外抗肿瘤实验探究重组蛋白是否对高表达CD70分子的阳性肿瘤细胞具有杀伤活性。方法:通过基因工程手段,将CD70纳米抗体Nb 2B3基因片段通过一个连接子与pET21a-PE38基因片段相连,获得重组表达载体pET21a-Nb 2B3-PE38并转入BL21(DE3)感受态细胞中进行表达、纯化与鉴定。用间接ELISA及FACS法检测Nb 2B3-PE38与CD70分子的结合活性,MTT法检测Nb 2B3-PE38对高表达CD70分子的肾透明细胞癌786-O细胞的体外杀伤活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Nb 2B3-PE38对786-O细胞凋亡的影响。结果:成功构建抗CD70纳米抗体重组免疫毒素Nb 2B3-PE38,纯化获得纯度>90%的重组蛋白,SDS-PAGE及WB检测结果表明目的蛋白正确表达,分子量为56000。纯化后的Nb 2B3-PE38能与重组CD70抗原及786-O细胞表面的CD70分子特异性结合;25μg/mL Nb 2B3-PE38即对786-O细胞产生极显著的杀伤作用(P<0.001),并且促进786-O细胞的细胞凋亡(P<0.01),其杀伤效应强于阳性对照顺铂(P<0.01)。结论:成功制备了特异性靶向CD70分子的免疫毒素Nb 2B3-PE38,其能够有效杀伤786-O细胞并诱导细胞凋亡且效果强于顺铂。

miR-19a-3p靶向细胞黏附分子2阻断AKT通路抑制肾癌细胞786-O的增殖和迁移

目的:探讨肾癌组织高表达的miR-19a-3p靶向调控细胞黏附分子2(cell adhesion molecule 2,CADM2)并通过AKT信号通路影响肾癌细胞增殖和迁移的机制。方法:收集2012年4月至2017年11月苏州大学附属第一医院肾内科收治的42例资料完整的肾癌患者手术切除的肾癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测肾癌组织和786-O等4种肾癌细胞系中mi R-19a-3p的表达水平,CCK-8、Transwell和免疫荧光法检测miR-19a-3p敲减对肾癌786-O细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-19a-3p与CADM2的靶向关系。采用Wb检测miR-19a-3p通过CADM2对AKT信号通路的调控作用。结果:miR-19a-3p在肾癌组织及细胞系中均高表达(均P<0.01)。敲减miR-19a-3p可显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化,且miR-19a-3p靶向作用CADM2并下调其表达水平(P<0.05或P<0.01)。敲减miR-19a-3p通过靶向上调CADM2并阻断AKT信号通路进而显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化(均P<0.05或P<0.01),从而缓解肾癌发生发展。结论:肾癌组织中miR-19a-3p高表达,敲减miR-19a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,其机制可能是通过miR-19a-3p/CADM2/AKT分子轴起作用。

藤黄酸对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察藤黄酸(Gambogic acid)对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测藤黄酸对786-O细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测藤黄酸对786-O细胞凋亡的影响。Western blotting检测藤黄酸对786-O细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及NF-κB通路相关蛋白p65、IκB表达的影响。荧光显微镜观察藤黄酸对NF-κB活性的影响。结果:藤黄酸对786-O细胞的增殖抑制率具有显著的剂量依赖性,在作用48h后其IC50值为(3.4±0.3)μmol/L。细胞凋亡实验发现,藤黄酸能有效的诱导786-O细胞凋亡,随药物浓度增加细胞凋亡比例逐渐增大,当药物浓度达到4.0μmol/L时凋亡率为(68.1±3.6)%。Western blotting发现藤黄酸能引起Bax蛋白的上调和Bcl-2蛋白的降解,与此同时能抵抗TNF-α诱导导致的IκB降解;荧光显微成像则进一步发现藤黄酸能阻止NF-κB入核。结论:实验表明,藤黄酸能诱导786-O细胞凋亡,主要机制可能是通过其对NF-κB的信号通路的抑制实现的。

姜黄素与索拉非尼联合对人肾癌细胞株786-O增殖抑制作用的体外研究

目的研究姜黄素和索拉非尼联合应用对人肾癌786-O细胞株增殖的影响。方法采用MTT法观察姜黄素和索拉非尼对人肾癌细胞786-O细胞株的抑制作用。结果姜黄素及索拉非尼能抑制人肾癌786-O细胞株的增殖,并呈浓度及时间依赖性,两者作用人肾癌786-O细胞株48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为29.2μmol/L、6.5μmol/L。姜黄素6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L与索拉非尼1.5μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、联合24 h、48 h、72 h的抑制率显著高于单用索拉非尼、姜黄素组(P<0.05)。结论姜黄素在体外对人肾癌786-O细胞株的增殖有明显的抑制作用,能提高索拉非尼对人肾癌786-O细胞株的敏感性。

lncRNA LUCAT1通过靶向调控miR-199a-5p/HIF-1α促进肾透明细胞癌786-O细胞的增殖和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺癌相关转录物1(lung cancer associated transcript 1,LUCAT1)对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)786-O细胞的增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法:选取2013年6月至2017年6月宜昌市第一人民医院泌尿外科行手术切除的40例ccRCC患者癌组织及相应的癌旁组织样本,组织均经病理检查诊断明确。ccRCC细胞株786-O、ACHN、UM-RC-2及正常肾上皮细胞系KiMA培养完成后,用qPCR法检测cc RCC组织和细胞株中miR-199-a-5p、HIF-1α和LUCAT1T mRNA的表达,用CCK-8实验检测786-O细胞的增殖能力,Transwell法检测786-O细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验验证LUCAT1与miR-199a-5p的靶向作用关系,Western blotting实验检测LUCAT1、miR-199a-5p对HIF-1α蛋白表达的影响。结果:LUCAT1在ccRCC组织和细胞系786-O、ACHN和UM-RC-2中呈高表达(均P<0.01),敲低LUCAT1后可明显抑制786-O细胞的增殖和迁移(均P<0.01)。miR-199a-5p在ccRCC组织和细胞系中呈低表达(均P<0.01),StarBase数据库分析结果显示LUCAT1含有miR-199a-5p的保守目标位点,miR-199a-5p对LUCAT1-Wt的报告活性具有明显的抑制作用(P<0.01);敲低LUCAT1可明显降低miR-199a-5p的表达(P<0.01)。LUCAT1在转染miR-199a-5p模拟物的786-O细胞中呈低表达,但在LUCAT1+miR-199a-5p模拟物共转染的786-O细胞中出现逆转(P<0.05或P<0.01)。转染miR-199a-5p模拟物的786-O细胞中HIF-1αmRNA和蛋白表达水平升高,而LUCAT1过表达可逆转该效应(P<0.05或P<0.01)。转染miR-199a-5p模拟物抑制786-O细胞的增殖和迁移,而转染LUCAT1可部分消除转染miR-199a-5p模拟物对786-O细胞增殖和迁移的影响(P<0.05或P<0.01)。结论:lncRNA LUCAT1通过靶向调节miR-199a-5p/HIF-1α的表达从而在ccRCC中发挥促癌效应。

EphrinA1-Fc对人肾透明细胞癌786-O细胞EphA2和ERK表达影响的研究

目的:探讨EphrinA1-Fc对人肾透明细胞癌786-O细胞系促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化程度的影响。方法:应用可溶性配体EphrinA1-Fc干预人肾透明细胞癌786-O细胞系,采用Wstern blot方法分析不同时间点细胞内EphA2和ERK1/2的磷酸化程度。结果:EphrinA1-Fc干预5、10、30、60 min后,p-EphA2、p-ERK的相对表达量逐渐增加(F=9.392,P=0.025;F=4.428,P=0.041),p-EphA2、p-ERK在EphrinA1-Fc干预前均未见表达。结论:Eph rinA1-Fc抑制肿瘤转移复发的可能机制之一是其促使肾透明细胞癌786-O细胞EphA2磷酸化而导致其降解实现。

Survivin在肾透明细胞癌786-O细胞株中表达的实验研究

目的:检测抗凋亡基因survivin在肾透明细胞癌786-O细胞株中的表达并探讨其临床意义。方法:运用MTT(四唑盐比色)法检测细胞生长状态并绘制生长曲线,运用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)法和免疫组化法检测786-O细胞株中survivin mRNA及survivin蛋白的表达情况。结果:检测出786-O细胞株中有survivin mRNA的表达,survivin蛋白的表达亦呈阳性,而正常肾细胞无阳性表达。结论:survivin mRNA及survivin蛋白在肾透明细胞癌中均有明显的表达,利用这一表达特异性,为以survivin基因为靶点的肾癌基因治疗研究提供了实验依据。

CLU基因干扰肾癌786-O细胞差异基因表达的研究

目的:观察CLU基因干扰前后肾癌细胞株786-O的基因表达谱差异,探讨肾细胞癌与CLU基因相关基因及传导通路。方法:CLU基因干扰慢病毒载体及空病毒载体转染肾癌786-O细胞样本与RocheNimbleGen表达谱芯片杂交,比较干扰前后基因表达谱差异,并行GO分析及Pathway分析。结果:六份样本中,共筛选出差异表达基因1731个,其中共同上调基因1154个,共同下调基因577个。差异表达基因中生物进程、细胞成分、分子功能方面均以下调为主。通路分析显示29条通路上调,如细胞黏附、异体排斥、吞噬体。31条通路下调,如mTOR、MAPK、非小细胞肺癌。结论:采用全基因组芯片检测CLU基因干扰后肾癌786-O基因表达谱获得差异表达基因,为以CLU基因为靶点的肾癌基因研究提供了实验依据。

慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)、CLU-RNAi-LV2(KD2)、CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化。用细胞划痕实验、MST-1、流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖、迁移、凋亡等生物学行为的改变。【结果】成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒。Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1、KD2、KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%～96.5%和0。Western blot结果显示KD1、KD2、KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%、46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达。划痕实验显示24 h时KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43±25.92)小于NC组(101.35±6.05)和CON组(68.13±6.64,P<0.05)。WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P<0.05),各组间差异(P<0.05),均有统计学意义。流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组、CON组细胞凋亡率分别为(6.23±2.51)%、(1.05±0.30)%和(1.17±0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组、CON组相比凋亡率增加(P<0.05),差异有统计学意义。肾癌786-O细胞的增殖、迁移受到抑制,而凋亡率增加。【结论】筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移并促进细胞凋亡。

芒柄花黄素对人肾癌细胞786-O的抑制作用及机制研究

目的观察芒柄花黄素对人肾癌细胞786-O的抑制作用及其机制研究。方法人肾癌细胞786-O细胞加入不同剂量的芒柄花黄素培养,根据药物剂量分为对照组(0μmol/L,A组)、芒柄花黄素低剂量组(20μmol/L,B组)、芒柄花黄素中剂量组(40μmol/L,C组)、芒柄花黄素高剂量组(80μmol/L,D组)。CCK8法检测四组的增殖情况;流式细胞术及Hoechst染色检测凋亡情况;RT-PCR检测miR-155的表达情况;Western blot检测P-PI3K、P-AKT蛋白表达情况。结果培养72 h,B、C、D组细胞增殖抑制率高于培养24、48 h;培养48 h,B、C、D组细胞增殖抑制率高于培养24 h,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48、72 h,B、C、D组细胞增殖抑制率高于A组;C、D组细胞增殖抑制率高于B组;D组细胞增殖抑制率高于C组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。四组细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);B、C、D组可见细胞皱缩,细胞核致密浓染,且药物剂量越高,细胞凋亡越明显;A组细胞核完整,形态饱满。B、C、D组细胞miR-155表达水平及P-PI3K、P-AKT蛋白表达水平低于A组,C、D组细胞miR-155miR-155表达水平及P-PI3K、P-AKT蛋白表达水平低于B组,D组细胞miR-155表达水平及P-PI3K、P-AKT蛋白表达水平低于C组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论芒柄花黄素对人肾癌细胞786-O有着显著的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与其下调miR-155的表达从而抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

肾癌组织中NF-kB信号分子的表达及As_2O_3对人肾癌786-O细胞中NF-kB信号通路影响的研究

目的:探讨NF-K B信号通路与肾癌发生和发展的关系以及三氧化二砷(As_2O_3)对人肾癌细胞系786-0的NF-K B信号转导的影响。方法:采用ICC、ISH、Western blot和EMSA技术检测15例肾癌组织和10例正常肾组织中NF-K B信号分子IKKα/β、IK Bα、p65和ICAM-1的表达和NF-K B DNA结合活性;As_2O_3处理肾癌786-0细胞后NF-K B信号分子蛋白表达、p65mRNA表达和NF-K B DNA结合活性的改变。结果:肾癌组织中NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P<0.01),但IK Bα蛋白明显降低(P<0.01);经2μmol/L浓度As_2O_3处理786-0细胞72h后,p65mRNA含量、NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β、I K Bα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P<0.01)。结论:NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关;2μmol/L以上浓度As_2O_3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IK Bα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达,抑制NF-KB DNA结合活性,可能是As_2O_3、抑制786-0细胞增殖的另一种机制,NF-KB有可能成为抗肾癌治疗的靶点之一。

姜黄素对肾癌786-O细胞增殖及凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对肾癌786-O细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP蛋白)表达水平以及细胞凋亡的影响,研究姜黄素对肾癌细胞的生长抑制作用并探讨其分子机制,进一步揭示姜黄素对肾癌的治疗作用。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌786-O细胞24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对人肾癌786-O细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;免疫细胞化学检测姜黄素对786-O细胞HIF-1α和XIAP表达的影响。结果姜黄素对人肾癌786-O细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞48 h后,HIF-1α和XIAP蛋白表达量下降。结论姜黄素通过下调HIF-1α和XIAP的表达抑制人肾癌786-O细胞的增殖,诱导人肾癌786-O细胞的凋亡。

大麻素受体1对肾癌细胞786-O增殖及迁移能力的影响

目的探索大麻素受体1(CB1)在肾癌组织中表达及对肾癌细胞系786-O相关生物学功能的影响。方法采用免疫组化实验方法检测肾癌组织标本中CB1表达情况;应用CB1拮抗剂AM251处理786-O肾癌细胞株,观察细胞的增殖及迁移能力的改变。结果免疫组化结果显示相对于癌旁组织,肾癌组织中CB1表达量较高;通过CB1拮抗剂AM251处理后,786-O肾癌细胞增值能力明显下降:25μmol/L组48h和72h抑制率分别为28.09±2.99和32.83±1.53;50μmol/L组48h和72h抑制率分别为78.59±5.69和88.02±5.34,其IC50在48h和72h分别为(38.20±4.75)μmol/L和(35.30±4.80)μmol/L;经过CB1拮抗剂AM251处理后迁移能力发生显著下降:与对照组细胞迁移数目(184.33±11.06)相比,20μmol/L AM251处理组(114±9.64,P=0.001 7)、30μmol/L AM251处理组(41.67±3.51,P=0.001 5)随着药物浓度的升高迁移细胞呈明显减少趋势。结论 CB1可能参与肾癌发生发展,为寻找潜在的新的治疗靶点提供理论依据。

BMI1小分子抑制剂PTC-209对人肾癌细胞786-O干细胞的干性抑制作用

目的观察PTC-209对人肾癌细胞786-O干细胞的干性抑制作用。方法用成球实验培养786-O干细胞,用Western blot法检测BMI1蛋白的表达水平。用对照载体和PTC-209处理786-O细胞,记录786-O细胞的成球效率和侵袭能力。建立裸鼠人786-O肾癌移植瘤模型,实验分为对照组和PTC-209干预组。测量皮下移植瘤体积并记录肿瘤生长情况。结果 Western blot结果显示BMI1蛋白表达水平在肾癌干细胞的表达与对照组相比,PTC-209能显著抑制786-O细胞的成球能力较强(17.6±6.0 vs.6.1±2.5,P<0.05),对照组侵袭的细胞,高于PTC-209干预组(116.5±10.7)个vs.(32.3±4.8)个(P<0.05),PTC-209干预组在裸鼠体内786-O细胞成瘤速度及瘤体生长速度均较对照组慢。结论 BMI1参与786-O肾癌干细胞的干性调节与移植肿瘤的生长。

腺病毒介导的Akt／mTOR基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

目的应用腺病毒技术下调Akt／mTOR表达水平，检测Akt／mTOR基因沉默对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法收集人肾癌及癌旁样品，RealtimePCR检测两组样品中Akt和mTOR的mRNA水平。利用病毒包装细胞293A获得靶向Akt／mTOR基因的重组腺病毒，感染人肾癌786-O细胞株。实验分2组：加人靶向Akt／mTOR基因的腺病毒感染的肾癌细胞组（rAd5-Am组），未处理的腺病毒感染的。肾癌细胞组（NC组）。应用Real timePCR及Western blot检测干扰前后Akt和mTOR mRNA及蛋白表达水平的变化。用细胞增殖及凋亡试剂盒检测Akt和mTOR沉默后，肾癌786-O细胞增殖、凋亡及PCNA表达水平的改变。结果与癌旁组织相比，Akt和mTOR的mRNA水平在肾癌组织中分别上调了2．613和3．254倍。成功获得knockdownAkt／mTOR的rAd5-Am腺病毒及对照腺病毒，感染肾癌786一O细胞。Real time PCR显示rAd5-Am组与NC组相比Akt／mTOR的mRNA水平分别下调65．3％和77．1％，Westernblot结果显示rAd5-Am组与NC组相比Akt／mTOR的蛋白表达水平分别下调78．4％和89．2％。rAd5．Am能显著降低786-O细胞中Akt／mTOR基因的表达。细胞增殖与凋亡实验表明，Akt／mTOR基因沉默后能显著抑制肾癌细胞786-O的增殖，并促进其凋亡（rAd5-Am组细胞凋亡率是NC组的2．57倍）。进一步的实验结果表明，Akt／mTOR下调后能降低PCNA的蛋白量，从而抑制。肾癌细胞的增殖。rAd5-Am感染的。肾癌786-O细胞的增殖和PCNA蛋白量受到抑制，而凋亡率增加。结论构建出能稳定干扰Akt／mTOR基因表达的。肾癌786-O细胞株。Akt／mTOR腺病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性Akt／mTOR基因，抑制肾癌786-O细胞的增殖，下调PCNA的表达，并促进细胞凋亡。

腺病毒重组人白细胞介素24对肾癌细胞株786-O细胞生长和凋亡的影响

目的探讨腺病毒重组人白细胞介素24(IL-24)对肾癌细胞株786-O细胞的生长和凋亡的影响。方法将培养的肾癌细胞株786-O细胞随机分为空白对照组、阴性对照组(转染腺病毒重组人IL-24对照组)及实验组(转染腺病毒重组人IL-24组)。取对数生长期肾癌细胞株786-O,构建腺病毒重组人IL-24及对照并转染至肾癌细胞株786-O实验组细胞及阴性对照组细胞。使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测肾癌细胞株786-O生长能力;采用流式细胞术检测肾癌细胞株786-O凋亡情况;应用Western Blot检测肾癌细胞株786-O中MMP-9蛋白的表达水平。结果实验组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞表面磷脂酰丝氨酸表达水平高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞中MMP-9蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力、细胞膜表面磷脂酰丝氨酸表达水平、MMP-9蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染腺病毒重组人IL-24可抑制肾癌细胞株786-O细胞的生长并诱导细胞凋亡,腺病毒重组人IL-24可能通过下调MMP-9诱导肾癌细胞株786-O细胞的凋亡。

肾癌细胞系SN12C和786-O无血清培养的干细胞球特性的比较

目的:本研究通过比较SN12C和786-O两株肾癌细胞系中肿瘤干细胞特征的差异性,初步探讨筛选肾癌干细胞更有效的方法。方法:以无血清培养法培养SN12C和786-O细胞,比较其在不同时间形成肿瘤干细胞球的差异;应用流式细胞术分析SN12C和786-O球体细胞中干细胞标志物的表达情况;利用裸鼠体内成瘤模型检测SN12C和786-O球体细胞成瘤能力。结果:SN12C较786-O更易形成肿瘤干细胞球且所需时间更短,即786-O在无血清培养的第7天开始形成规则的球体,而SN12C则在第5天就已形成规则的球体。SN12C和786-O球体细胞中干细胞指标表达量亦有显著性差异,在SN12C球体细胞中CD133、CD44、Nanog和Oct3/4比例明显高于786-O球体细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。裸鼠体内的成瘤能力实验发现SN12C明显强于786-O球体细胞。结论:SN12C肾癌细胞系通过无血清培养方法富集肿瘤干细胞球明显多于786-O,是获得肿瘤干细胞较好的研究对象。

miR-181a在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞786-O功能的影响

目的探讨miR-181a在肾透明细胞癌中的表达及miR-181a对肾透明细胞癌细胞系786-O功能的影响。方法通过q RT-PCR的方法检测miR-181a在42对肾透明细胞癌肿瘤及瘤旁组织和细胞系786-O、769-P、A498、Caki-1中的表达水平;以miR-181a mimics、miR-181a inhibitor转染786-O细胞系,通过MTS实验观察其增殖能力的改变,并通过流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化。结果 miR-181a在肾透明细胞癌中的表达明显高于瘤旁组织,同时其在细胞系786-O、769-P、A498、Caki-1中的表达明显高于其在人肾小管上皮细胞HKC中的表达。在786-O细胞系中,转染miR-181a mimics可以明显促进其增殖,诱导G1/S期转换并抑制凋亡;而miR-181a inhibitor则抑制增殖,诱导G1期阻滞并促进凋亡。结论 miR-181a在肾透明细胞癌中高表达并参与肿瘤的发生和发展,提示miR-181a可能成为肾癌治疗的潜在靶点。

腺病毒介导的PDCD4基因过表达促进肾癌BTG1蛋白的表达和786-O细胞的凋亡

目的探讨过表达抑癌基因PDCD4的腺病毒对肾透明细胞腺癌细胞株(786-O)的影响及肾脏注射后对肾癌的治疗效果。方法体外构建过表达抑癌基因PDCD4的腺病毒;培养786-O细胞株,转染腺病毒体外干预,观察细胞的死亡情况;将SD大鼠随机分为对照组和移植组,两组均在前肢腋部皮下注射786-O细胞株构建肾癌模型,造模14 d后,对照组瘤中注射0.1 ml D-Hanks,移植组则注射含1×10^(11)vp/m L的表达抑癌基因PDCD4的腺病毒的D-Hanks 0.1 ml。结果体外观察转染病毒后,786-O细胞的生长活力下降,死亡率升高;体内注射病毒后,可以观察到肾脏中抑癌基因PDCD4的上调和BTG1蛋白表达水平的升高。结论过表达抑癌基因PDCD4的腺病毒注射治疗肾癌具有可行性。