藤茶总黄酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨藤茶总黄酮的体外抗肿瘤作用。方法采用MTT法、生长曲线法、细胞集落形成法观察藤茶总黄酮对人胃癌SGC-7901细胞抑制作用。结果藤茶总黄酮能明显抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长,MTT法IC50为20.71μg.ml-1;细胞生长曲线法提示其对SGC-7901细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法,当药物浓度在9.90μg.ml-1以上时抑制率为100%,当药物浓度为6.60μg.ml-1时抑制率为69.80%,当药物浓度为4.40μg.ml-1时抑制率为30.23%。结论藤茶总黄酮对体外SGC-7901细胞的生长有明显的抑制作用。

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。

β-紫罗兰酮诱导SGC-7901细胞凋亡作用

目的探讨β-紫罗兰酮对胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡作用及其可能机制。方法采用细胞生长曲线、核分裂、Hoechst33258荧光染色、透射电镜和WesternBlot方法,观察了β-紫罗兰酮对SGC-7901细胞的生长抑制作用和细胞凋亡诱导情况。结果β-紫罗兰酮对SGC-7901细胞生长和有丝分裂有明显地抑制作用,EC50值为(174.93±12.79)μmol/L;并且可诱导SGC-7901细胞产生凋亡,激活Caspase-3片断和降低ERK1/2蛋白的表达,呈剂量-反应关系。结论β-紫罗兰酮可诱导SGC-7901细胞产生凋亡,不仅作用凋亡途经,而且还影响MAPK途经。

芫菁体内结合斑蝥素对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用

本文考察了芫菁体内结合斑蝥素和人工合成的斑蝥素盐类衍生物斑蝥素酸镁的体外抗肿瘤活性。采用WST-1法检测两者在体外对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用。实验结果显示两者对SGC-7901细胞均表现出明显的抑制效果,且随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)分别为10.86和8.65μmol/L。此外,通过流式细胞术检测表明,结合斑蝥素能引起SGC-7901细胞G0～G1期阻滞;斑蝥素酸镁则引起SGC-7901细胞S期阻滞,两者均能通过干预SGC-7901细胞的周期来抑制其增殖。

银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2对胃癌SGC-7901细胞凋亡及其通路的影响

目的研究银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2体外对人胃癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,应用MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测培养上清中基因蛋白Caspase-9、Fas及Survivin的含量。结果 GBEE-2(5～160μg.mL-1)对SGC-7901细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度依耐性,IC50为83μg.mL-1;在10～160μg.mL-1浓度下体外培养,GBEE-2可提高SGC-7901细胞的凋亡率,可使Caspase-9、Fas蛋白表达量增加(P<0.05或0.01),而Survivin蛋白的表达则减少(P<0.05或0.01)。结论 GBEE-2抑制人胃癌SGC-7901细胞的作用机制与诱导细胞凋亡有关,其凋亡通路涉及Caspase途径。

姜黄素联合5-FU对人胃癌SGC-7901细胞作用及机制的研究

目的:探讨姜黄素联用5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:用姜黄素(20μmol/L)和5-FU(10、20、40μmol/L)单独或联合应用处理SGC-7901细胞后,MTT法检测生长、流式细胞术观察细胞周期与凋亡、酶标仪比色法检测Caspase-3/-8的活性和Western Blot法观察Bcl-2/Bax蛋白表达。结果:与对照组相比,各实验组均能显著抑制细胞增殖、促进细胞凋亡(P<0.05),姜黄素联合低/中剂量5-FU的增殖抑制率、凋亡率显著高于中/高剂量5-FU单用(P<0.05);各实验组将SGC-7901细胞的细胞周期阻滞在S期(P<0.05);各实验组Caspase-3/-8活性、Bax表达量显著增加,而Bcl-2的表达量显著降低(P<0.05),且姜黄素联合低/中剂量5-FU组的效果优于中/高剂量5-FU单用组(P<0.05)。结论:姜黄素能够增强5-FU对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的抑制增殖和促凋亡作用,其机制与增强Caspase-3/-8活性、上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。

人参皂苷CK对胃癌细胞株SGC-7901及其内源性VEGF的影响

目的研究人参皂苷CK对胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期的影响及其对内源性分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用。方法以50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/ml的人参皂苷CK作用于胃癌细胞株SGC-7901,通过MTT法检测人参皂苷CK对细胞的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;ELISA定量检测细胞培养液中内源性VEGF的含量变化。结果 MTT法显示人参皂苷CK对胃癌细胞株SGC-7901有抑制作用,并且呈浓度、时间依赖关系;SGC-7901细胞经人参皂苷作用后出现明显凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;人参皂苷CK处理组VEGF含量低于对照组(P<0.05),高浓度组低于低浓度组(P<0.05),且随着作用时间延长,VEGF含量降低。结论人参皂苷CK可通过诱导凋亡抑制胃癌细胞株SGC-7901生长,并可抑制SGC-7901细胞内源性分泌VEGF,人参皂苷CK可能成为一种潜在的抗胃癌药物。

CIK细胞及上清液抗胃癌细胞株SGC-7901活性的研究

目的:探讨由多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外的增殖情况,分析体外CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤作用。方法:健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外诱导成CIK细胞,计数培养不同时间的CIK细胞,并用流式细胞术动态分析其表型特征。倒置显微镜下观察CIK细胞作用于SGC-7901胃癌细胞的形态学变化;流式细胞仪检测CIK细胞培养上清液对胃癌细胞的诱导凋亡作用;采用MTT法检测CIK细胞对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤活性。结果:CIK细胞随体外培养时间的延长,数量及杀伤活性均增加。体外培养21d,细胞总数增殖倍数111.63±10.97,CD3+CD56+双阳性细胞数量亦增加,比例达(35.8±9.7)%,其后两者数量逐渐降低。CIK细胞上清液能够诱导胃癌细胞株凋亡;CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为(74.91±2.71)%。结论:CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性,体外培养14～21d时具有较强的抗瘤活性,其主要通过直接杀伤及释放细胞因子诱导凋亡的作用杀伤肿瘤细胞。

红花多糖对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的形态学实验研究

目的:从形态学角度探讨红花多糖(SPS)诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用。方法:MTT法观察SPS对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用。荧光显微镜和透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化。Rhodamine 123染色观察SPS处理后细胞线粒体跨膜电位变化。结果:SPS能明显抑制SGC-7901细胞增殖,具有时间和剂量依赖性。显微镜下发现SPS处理后贴壁细胞减少,部分细胞变圆、皱缩、脱落,部分细胞崩解。荧光显微镜下和透射电镜下,SPS作用的细胞呈现典型凋亡细胞状态。胃癌细胞Rhodamine 123荧光强度明显减弱。结论:SPS对人胃癌细胞体外增殖有抑制作用,且具有明显的时间和剂量依赖性。

低温胁迫下草鱼ZC-7901细胞系内丙二醛含量的变化

在不同低温胁迫时间下 ,对草鱼 (Ctenopharyngodonidellus)吻端细胞系ZC - 790 1细胞内丙二醛含量的变化进行了研究 ,并探讨了其耐寒机理 .结果表明 ,与对照 ( 2 8℃ )相比 ,2～ 3℃低温胁迫 6h、12h、2 4h、4 8h、72h时 ,草鱼ZC - 790 1细胞内丙二醛 (MDA)含量在低温 12h前逐渐增加 ,之后其含量逐渐下降 ,但仍高于对照组 .结果提示 ,在低温胁迫下草鱼ZC - 790 1细胞内MDA的含量仍能保持较低的水平 。

原子力显微镜对华蟾素作用的SGC-7901细胞的凋亡研究

目的应用原子力显微镜(AFM)研究华蟾素对胃癌SGC-7901细胞的作用,在单细胞水平上分析胃癌SGC-7901细胞超微机构的变化,为进一步探讨华蟾素对胃癌SGC-7901细胞的作用机制奠定基础。方法利用原子力显微镜高分辨率、高灵敏度的特点,观察不同浓度(0、6.25、12.5、25、37.5、50ug/ml)华蟾素对胃癌细胞的作用,以及同等浓度药物作用下,随着作用时间(24h,48h,72h,96h)的延长,观察细胞超微结构的变化。同时,利用流式细胞仪对凋亡情况进行分析。结果药物作用后,细胞开始塌陷变矮。细胞表面结构的几何参数,包括高低差(Rp-v)、均方根粗糙度(Rq)、平均粗糙度(Ra)、平均高度(Meant Ht)均出现明显变化,且加药后的细胞凋亡率明显高于对照组(5.04±1.11)%。结论通过AFM观察细胞表面超微结构的变化,从纳米尺度上研究了华蟾素对胃癌细胞的作用,从另一层面增加了对胃癌细胞的认识,从而使AFM有望成为临床肿瘤诊断的一种新仪器。

尼美舒利对人SGC-7901细胞系增殖及hTERT-mRNA表达的研究

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和端粒酶hTERT-mRNA表达的作用。方法体外培养人胃癌细胞系SGC-7901后,加入不同浓度的尼美舒利(0、50、100、200、400μmol/L)进行共同培养。用相差显微镜动态地观察经尼美舒利处理后细胞的形态变化;MTT法检测人胃癌细胞系SGC-7901的增殖;RT-PCR法检测细胞端粒酶hTERT-mRNA表达。结果选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利作用于人胃癌细胞系SGC-7901后,细胞增殖受到明显的抑制,呈时间和剂量依赖性,并且端粒酶hTERT-mRNA的表达降低呈剂量依赖关系,与对照组比较差异有显著性(P<0.05).结论尼美舒利能够抑制人胃癌细胞系的hTERT-mRNA的表达,从而抑制其生长,这表明尼美舒利可能是种新的端粒酶抑制剂。

白花蛇舌草提取物体外对人胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草提取物体外对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用。方法通过体外无菌传代培养人胃癌细胞SGC-7901,将白花蛇舌草提取物以0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL四个不同浓度作用于该细胞,24h后采用MTT法检测细胞活性及数量。结果药物组0.05mg/mL和0.1mg/mL浓度孔的吸光值与对照组相比无显著性差异(P>0.05),而0.15mg/mL和0.2mg/mL浓度孔的吸光值明显小于对照组(P<0.05)。结论白花蛇舌草提取物体外对人胃癌细胞SGC-7901增殖有一定的抑制作用,且抑制作用的强弱可能跟药物浓度有关,值得进一步研究。

shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901/VCR MDR1基因表达的实验研究

目的利用RNAi技术干扰胃癌多药耐药细胞(7901/VCR)多药耐药基因(MDR1)的表达,为临床肿瘤的基因治疗奠定基础。方法根据MDR1的碱基序列设计并合成两对短发夹RNA,构建重组载体,用阳离子脂质体法体外转染7901/VCR;采用MTT法检测转染胃癌细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和Western blot检测转染前后MDR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果成功构建RNAi质粒载体,转染后细胞IC50明显降低(P<0.05);G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05);MDR1 mRNA转录水平下降(P<0.05),P-糖蛋白(P-gp)的表达水平降低(P<0.05)。结论RNAi能明显抑制胃癌细胞7901/VCR MDR1mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对肿瘤细胞多药耐药性有明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。

川芎嗪对人胃癌细胞株SGC-7901/ADR增殖、凋亡和MDR1、GST-π表达的影响

目的：探讨川芎嗪诱导人胃癌细胞株SGC-7901/ADR凋亡及对MDR1、GST-π表达的调控作用。方法：不同剂量（0~120μM）川芎嗪内酯与人胃癌细胞株SGC-7901/ADR同培养不同时间（24、48及72 h）,50μM 5-氟尿嘧啶（5-FU）作为阳性对照组,采用CCK8法测定细胞的增殖,流式细胞术测定细胞凋亡率。用不同剂量的川芎嗪与细胞培养48 h后,采用Western blot测定MDR1、GST-π蛋白的表达情况,用半定量RT-PCR测定MDR1、GST-πmRNA表达。结果：不同浓度川芎嗪处理人胃癌细胞株SGC-7901,川芎嗪抑制SGC-7901细胞增殖呈浓度及作用时间依赖性且120μM川芎嗪的抑制率与阳性对照组相当;而且应用流式细胞仪检测发现川芎嗪作用于人胃癌细胞株SGC-7901 48 h后,细胞出现凋亡。Western blot及半定量RT-PCR检测细胞中MDR1、GST-π及其mRNA的表达,结果显示,川芎嗪可下调MDR1、GST-π表达,下调作用与TMZ相当甚至更具优势。结论：川芎嗪能够抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖,诱导其凋亡,且能抑制细胞中MDR1、GST-π的表达,其表达量与川芎嗪剂量呈现明显的时间-浓度效应关系。

隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对VEGF m RNA表达的影响。结果 20、40、60、80、100μmol/L的隐丹参酮作用于人胃癌SGC-7901细胞6-48 h,其生长和增殖均受到一定程度的抑制;24 h为隐丹参酮对SGC-7901细胞抑制作用的最佳时间,IC50为59.11μmol/L;选取40、60和80μmol/L 3个剂量作用于人胃癌细胞SGC7901 24 h后,60和80μmol/L的隐丹参酮均可下调VEGF m RNA的表达（均P〈0.01）。结论隐丹参酮可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF mRNA的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。

微缺氧对三氧化二砷抑制胃癌细胞SGC-7901生长的影响

目的常氧和微缺氧条件下三氧化二砷(As2O3)注射液对人胃癌细胞株SGC7901生长抑制作用的对比研究。方法运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,实验分为微缺氧组和对照组,用MTT法检测药物效应。流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度As2O3对人胃癌细胞株SGC7901生长有抑制作用,并呈剂量效应关系。细胞滞留于G2/M及S期。微缺氧条件下As2O3对人胃癌细胞株SGC7901生长抑制作用下降(P<0.01)。凋亡细胞百分比下降。结论As2O3对人胃癌细胞生长有抑制作用,但对缺氧胃癌细胞的抑制作用下降,单用As2O3治疗胃癌存在一定的局限性。

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。

活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞P53和Bcl-2基因表达影响的实验研究

目的:研究活血行气方健脾理气方对人胃癌SGC-7901细胞株p53和Bcl-2基因表达的影响。方法:利用血清药理学方法制备药物血清,应用Western-blot分析方法观察活血行气方对人胃癌SGC-7901细胞株p53、Bcl-2基因表达的影响。结果:药物血清作用后,p53表达明显增强;Bcl-2表达明显降低。结论:活血行气方药物血清上调p53、下调Bcl-2,达到抑制人胃癌SGC-7901细胞株的作用。

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的 观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法 采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果 显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论 不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。