柚皮素诱导K562细胞凋亡与Caspase-3/Caspase-8酶活性及FAS/FASL蛋白表达的关系

本研究旨在探讨柚皮素(naringenin)在体外诱导K562细胞凋亡及其相关机制。采用体外培养K562细胞,用不同浓度的柚皮素处理;用MTT法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测柚皮素作用后细胞凋亡率;透射电子显微镜观察柚皮素对K562细胞形态学的影响;caspase分光光度计法检测柚皮素作用后细胞内caspase-3和csapase-8活性的改变;细胞免疫化学染色检测柚皮素作用后细胞内FAS和FASL的表达。结果表明:柚皮素对K562细胞具有增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(p<0.05);在柚皮素作用下,出现典型亚G1峰,细胞凋亡率随柚皮素浓度的增高而增高(p<0.05);电子显微镜下细胞形态呈现凋亡征象;随着柚皮素浓度的增高,细胞内caspase-3和caspase-8酶活性增高(p<0.05),FAS表达上升,FASL表达下降(p<0.05)。结论:柚皮素在体外对K562细胞有诱导凋亡作用,而提高FAS的表达,降低FASL的表达,诱导caspase-3和caspase-8活化,可能是其作用机制。

水相法合成ZIF-8纳米颗粒及其水溶液中柚皮素的吸附性能

基于经济和环保的原则,采用水相合成法在室温下合成了沸石咪唑酯骨架-8(ZIF-8).扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、热重分析(TGA)和BET比表面积的结果表明,不同三乙胺(TEA)的添加量对形貌及比较面积有较大影响,加入10 mL的TEA改良后的ZIF-8具有菱形十二面体结构,平均粒径约为166 nm,热重分析表明具有良好的热稳定性.ZIF-8对柚皮素的吸附实验结果表明,当TEA的用量为10 mL时,ZIF-8对柚皮素的吸附效果最佳,其吸附行为更符合拟二级动力学模型和Langmuir模型,最大吸附量可达867 mg/g,在连续5次吸附-解吸循环中具有稳定的重复使用性,表明该材料在吸附柚皮素方面具有良好的应用前景.

柚皮素对新型体外肠上皮屏障模型的保护作用

为了探究柚皮素(NAN)对体外肠屏障炎性损伤和功能障碍的影响,本试验采用人肠上皮细胞系Caco-2和原代小鼠肠微血管内皮细胞(MIMVECs)共培养构建新型体外肠上皮屏障模型,使用1μg/mL脂多糖(LPS)诱导肠屏障炎性损伤,通过测定Caco-2细胞跨上皮电阻(TEER)和FITC-葡聚糖渗透量以评估柚皮素对肠屏障损伤的影响;通过分析Caco-2细胞炎性因子、紧密连接蛋白和NF-κB信号通路蛋白表达变化,进一步探究柚皮素保护肠屏障的机制。结果显示,柚皮素可显著抑制LPS诱导的共培养体系中上皮细胞单层TEER值的下降(P<0.05)和FITC-葡聚糖渗透量的升高(P<0.05);此外,柚皮素显著下调LPS诱导的共培养体系中上皮细胞炎性因子TNF-α(P<0.05)和IL-8(P<0.05)的分泌水平,上调紧密连接蛋白ZO-1(P<0.05)、Occludin(P<0.05)的表达,促进NF-κB信号通路蛋白IκB(P<0.05)的表达,抑制IκB(P<0.05)、p65(P<0.05)的磷酸化。结果表明,柚皮素可能通过抑制NF-κB信号通路的过度激活和炎性因子的分泌,增加紧密连接蛋白的表达,抑制LPS诱导的肠屏障炎性损伤和功能障碍。

长白瑞香化学成分的研究

从长白瑞香中分得三个化合物,经光谱分析和与合成品对照鉴定为β-谷甾醇、柚皮素和7,8-二甲氧基香豆素。

柚皮素及其结构修饰产物拮抗APAP所致的L02肝细胞损伤

目的:探讨以柚皮素(C_(15)H_(12)O_(5))为母核进行结构修饰改造的系列化合物对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的L02肝细胞损伤的预防和治疗作用。方法:设立溶剂对照组、APAP模型组、APAP+化合物组和化合物自身对照组,用CCK-8法检测细胞的存活率。通过存活率的高低,比较不同化合物对APAP诱导的L02肝细胞损伤的影响。结果:化合物预给药结果显示,与APAP模型组相比,25μmol/L的化合物3,4,5,6,7,8可显著提高细胞存活率(p<0.05),而化合物1(柚皮素)和化合物2(柚皮苷)组细胞存活率无显著变化(p>0.05)。化合物后给药结果显示,与APAP模型组相比,25μmol/L的化合物3,4,5,6,7,8可显著提高细胞存活率(p<0.05),而柚皮素和柚皮苷组细胞存活率无显著变化(p>0.05)。化合物保肝活性剂量依赖性实验结果显示,与模型组(APAP)相比,化合物3、8的5μM、10μM、25μM浓度组、化合物4、5的10、25μM浓度组和化合物6、7的25μM、50μM、100μM浓度组的细胞存活率均显著提高(p<0.05)。结论:本研究中,柚皮素结构修饰产物化合物对APAP诱导的肝细胞损伤不管是损伤前预给药,还是损伤后给药均具有拮抗作用,且其拮抗作用具有剂量依赖性。实验结果表明柚皮素经过结构改造后,其修饰产物保护肝细胞的作用明显提高。

8-异戊烯基柑橘素与柑桔素对体外培养破骨细胞活性影响的比较研究

目的:研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin,PNG)和柑桔素(naringenin,NG)影响体外培养破骨细胞活性和凋亡的差异,探讨8-异戊烯基团的生理活性。方法:从青紫兰乳兔四肢长骨中分离出破骨细胞,培养于含10%FBS的α-MEM培养液中,分别加入浓度为1×10-5mol.L-1的PNG和NG。药物干预4 d后进行TRAP染色和TRAP酶活性测定,7 d后进行甲苯胺蓝染色。于加药后48 h内多个时间点进行Annexin V-FITC染色,观察破骨细胞凋亡情况,并提取总RNA,用Real-time RT-PCR法检测TRAP及Cathepsin K(CTSK)的基因表达情况。结果:与对照组相比,PNG和NG组的TRAP阳性细胞即破骨细胞数均显著减少,TRAP酶活性显著降低,形成骨吸收陷窝的数量和面积明显减少,TRAP和CTSK的基因表达水平明显降低。PNG组与NG组相比,以上所有指标均是前者显著低于后者。此外,PNG组的破骨细胞凋亡高峰于加药后12 h到达,而NG组是24 h后到达,且前者的凋亡总数显著高于后者。结论:PNG抑制破骨细胞骨吸收和诱导破骨细胞凋亡的活性明显高于NG。由于两者分子结构的唯一差别在于8-异戊烯基团,因此,8-异戊烯基团可提高黄酮母核的抗骨吸收活性。

合成8二甲基异戊烯基柚皮素的人工酿酒酵母菌株构建

8二甲基异戊烯基柚皮素(8DN)作为生产黄酮类药物淫羊藿苷的重要前体,在医药合成领域具有重大应用潜力。由于其合成路径及相关基因的复杂性,目前主要通过饲喂8DN的直接前体(柚皮素、异黄腐酚等)的方式合成8DN,而在生物体内全合成8DN的研究工作还未见报道。为了实现8DN在酿酒酵母体内的生物全合成,通过组合筛选8DN前体物柚皮素合成所需的多种外源基因(TAL、4CL、CHS、CHI),获得30株柚皮素生产菌,发现不同来源的基因组合使柚皮素产量的具有明显差异(0.37~22.33mg/L)。并且利用Delta位点将较优的基因组合整合至酵母基因组,实现了稳定的柚皮素高产菌株(Sy BE_Sc02050031)构建。在此基础上进一步导入带有苦参来源的异戊烯基转移酶基因(N8DT)多拷贝质粒,实现8DN合成的完整反应过程,8DN的摇瓶发酵产量达到36.7μg/L。另外,通过关键限速酶N8DT的序列优化策略,发现截断定位信号肽序列的N8DT明显提高了从柚皮素到8DN这一关键反应的催化效果,8DN的产量提高到52.6μg/L(144.2%)。首次在酿酒酵母中成功构建高产8DN的生物全合成路径,为在微生物体内合成其他黄酮类天然产物提供了参考,具有重要的指导意义。

调控爪哇正青霉生物合成8-异戊烯基柚皮素的关键酶鉴定及性质研究

采用对硝基苯酚法建立爪哇正青霉生物转化合成8-异戊烯基柚皮素体系中O-脱甲基酶酶活的分光光度测定方法;研究生物催化合成8-异戊烯基柚皮素的过程;采用3种经典的细胞色素P450酶抑制剂对P450酶和生物转化反应之间的关系进行鉴定;研究O-脱甲基酶的酶学性质。研究结果表明,生物转化体系中O-脱甲基酶酶活力在第4天达到最大值,其最适反应温度60℃,最适p H 8.0。

8-异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响

目的:比较研究8-异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响。方法:体外分离培养大鼠股骨组织,然后随机分为4组,其中3组分别给予雌二醇(终浓度为1×10-8mol·L-1)、8-异戊烯基柑橘素(终浓度为1×10-5mol·L-1)和柑橘素(终浓度为1×10-5mol·L-1),另外1组加生理盐水作为对照。分别在培养的第3、6、9、12、15和18 d测定大鼠股骨组织中碱性磷酸酶活性和钙含量,并采用RT-PCR检测骨保护素、Ⅰ-型胶原、Runx-2和骨形态发生蛋白基因的mRNA表达水平。结果:8-异戊烯基柑橘素、柑橘素和雌二醇均可提高股骨组织中碱性磷酸酶的活性,增加钙含量,并上调opg、bmp-2、collagen-I和runx-2 mRNA的表达水平;8-异戊烯基柑橘素活性强于柑橘素。结论:8-异戊烯基柑橘素和柑橘素均能改善体外培养大鼠股骨组织的代谢活性。