益气活血通脉颗粒调控小胶质细胞表达MMP-9与TIMP1蛋白介导脑缺血再灌注损伤的作用机制

目的探讨益气活血通脉颗粒治疗调控小胶质细胞表达MMP-9与TIMP1蛋白介导脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法采用BV2小胶质细胞进行氧糖剥夺和复氧实验,设置模型组、空白组、MMP-9 siRNA组、益气活血通脉颗粒组、MMP-9 siRNA+益气活血通脉颗粒组。除空白组外,其余4组均置于氧糖剥夺罐进行氧糖剥夺/复氧实验。CCK8检测各组细胞增殖能力。Western blot检测各组小胶质细胞中MMP-9与TIMP1蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小胶质细胞存活率明显降低(P<0.01),与模型组比较,MMP-9 siRNA组、益气活血通脉颗粒组与MMP-9 siRNA+益气活血通脉颗粒组小胶质细胞存活率升高(P<0.05或P<0.01)。与空白组比较,模型组小胶质细胞MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.01),TIMP1蛋白表达水平降低(P<0.01),MMP-9 siRNA组、益气活血通脉颗粒组与MMP-9 siRNA+益气活血通脉颗粒组MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),TIMP1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论益气活血通脉颗粒能够调节MMP-9/TIMP1平衡,有助于抵抗缺氧复氧导致的小胶质细胞损伤。

S100A_4在肺癌中的表达及其与MMP9/TIMP1表达失衡的关系

目的:研究S100A4在人肺癌中的表达及其临床生物学意义,探讨其在肺癌的侵袭和转移中的作用及其与MMP9/TIMP1表达失衡的关系。方法:采用S-P免疫组化法检测50例肺癌及6例正常肺组织中S100A4、MMP9及TIMP1的表达水平。结果:S100A4、MMP9和TIMP1在肺癌中表达显著高于正常肺组织;非小细胞肺癌中表达明显高于小细胞肺癌(P<0.05);腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05)。S100A4和MMP9表达与非小细胞肺癌临床病理特征关系密切,在有淋巴结转移组与无转移组中两者均有显著性差异(P<0.05)。在肺癌不同临床TNM分期中,S100A4和MMP9阳性表达随临床分期的升高而明显增加,各期间均有显著性差异(P<0.05)。MMP9表达与非小细胞肺癌分化程度密切相关,随分化程度的降低,MMP9阳性率升高(P<0.05);S100A4阳性率随分化程度的降低也有升高趋势,但没显著性差异。S100A4表达与肿瘤大小有密切的正相关关系,随肿瘤体积的增大,S100A4的阳性率升高(P<0.05)。S100A4与MMP9呈正相关(P<0.05);MMP9与TIMP1呈正相关关系(P<0.05)。结论:S100A4和MMP9与肺癌的侵袭和转移有密切的关系,可以作为评估肺癌病人预后的重要指标。TIMP1不是简单对MMP9的局部升高起反应。S100A4参与调节MMP9的表达,则可能为肺癌的治疗开辟一条新的途径。

参藤三黄汤对糖尿病肾病中MMP2,9及TIMP1,2基因和蛋白表达的影响

探索参藤三黄汤对糖尿病肾病中MMP2,9、TIMP1,2基因和蛋白表达的影响,以50只实验大鼠随即分为空白组10只,余下造模成功后等分为模型组,参藤三黄汤高、低剂量组,阳性药对照组并给予相应药物。12周后实验结束时检测大鼠24 h尿微量白蛋白、血糖、血胰岛素等指标及肾内皮细胞外基质MMP2,9、TIMP1,2基因和蛋白的表达。结果:1参藤三黄汤治疗组血糖水平明显优于模型组,差异显著(P<0.01),说明参藤三黄汤有明显的降血糖功效;2参藤三黄汤干预后,治疗组大鼠的糖耐量异常有所改善,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组大鼠肾小球和肾小管形态趋于正常且MMP2,9表达明显提高,而TIMP1,2表达明显降低。说明参藤三黄汤能明显降低糖尿病大鼠的血糖水平,增强糖耐量能力;其作用机制可能与提高MMP2,9、降低TIMP1,2基因和蛋白的表达有关。

通肺络补宗气方对肺纤维化大鼠肺功能、MMP9/TIMP1平衡及FN、Col Ⅳ表达的影响

目的:观察通肺络补宗气方对肺纤维化大鼠肺功能、基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)平衡及纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响。方法:健康雄性SD大鼠96只,按随机数字表法分为空白组、模型组、中药初、中、后期干预组和西药初、中、后期干预组,中药各组给予通肺络补宗气方灌胃,西药各组给予N-乙酰半胱氨酸灌胃,均连续给药90 d。实验第19周检测各组大鼠肺功能相关指标变化以及肺组织中FN、ColⅣ、MMP9和TIMP1蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型大鼠肺功能FVC、Cdyn明显降低,肺组织中FN、ColⅣ、MMP9和TIMP1表达水平明显升高;与模型组比较,中药初、中期干预组大鼠肺功能Cdyn明显升高(P<0.05),中西药各干预组大鼠FN、ColⅣ和TIMP1表达水平明显降低,中药初期干预组大鼠MMP9表达水平明显降低。结论:通肺络补宗气方可调节MMP9/TIMP1失衡,减少FN、ColⅣ的过度沉积,进而改善大鼠肺功能,抑制大鼠肺纤维化的发生发展。

缺氧对细胞滋养细胞MMP9/TIMP1基因表达及细胞侵袭力的影响

目的探讨缺氧对细胞滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制物1(TIMP1)mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭能力的影响。方法将永生化的早孕细胞滋养细胞进行化学缺氧(150μmol/L CoCl2),用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot等方法检测正常和缺氧细胞滋养细胞系MMP9/TIMP1基因的表达,应用Transwell侵袭模型检测缺氧对细胞滋养细胞侵袭能力的影响。结果缺氧组的细胞滋养细胞MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),MMP9/TIMP1比值升高,且呈时间依赖性。缺氧组细胞滋养细胞的侵袭力较对照组增强(P<0.05)。结论在生理性缺氧条件下,早孕细胞滋养细胞的侵袭力是增加的,并与MMP9/TIMP1比值的升高有关;同时TIMP1除了调节MMP9外,还可能促进细胞滋养细胞的增殖与分化。

脑泰方对局灶性脑缺血大鼠脑组织核因子-κB、基质金属蛋白酶9及其抑制剂表达的影响

目的观察益气活血中药脑泰方对局灶性脑缺血大鼠海马C2区缺血组织基质金属蛋白酶9(MMP-9),核因子-κB(NF-κB)及基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)表达的影响,探讨其治疗局灶性脑缺血的机制。方法随机将SD大鼠分为假手术组、模型组及脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠灌胃给药连续3 d,每日1次,预处理后采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血模型,术后连续灌胃给药3 d。采用HE染色观察海马C2区细胞,免疫组化法检测海马C2区MMP-9、NF-κB及TIMP1表达。结果脑泰方高剂量组大鼠正常细胞较模型组明显增多,仅少数细胞出现核固缩样改变;脑泰方高、中、低剂量组MMP-9表达明显降低(P<0.05);脑泰方高、中剂量组NF-κB表达明显下降(P<0.05);脑泰方高、中、低剂量组TIMP1表达明显升高(P<0.05)。结论脑泰方干预通过抑制NF-κB、降低MMP-9表达,增强TIMP1表达,保护血脑屏障,减轻脑水肿,对局灶性脑缺血导致的血脑屏障损伤有一定保护作用。

脑泰方对局灶性脑缺血大鼠血清MMP-9、PA及TIMP-1表达的影响

目的研究脑泰方治疗对局灶性脑缺血大鼠血清中基质金属蛋白酶9(MMP-9),MMP-9前体纤溶酶原激活物(plasminogen activator,PA)及内源性抑制剂1(TIMP1)的作用。方法随机将SD大鼠分为假手术组、空白对照组、脑泰方低、中、高剂量组(3,9,27g/kg),marimastat(BB-2516)组(6.25mg/kg)ig。各组大鼠预处理ig给药连续3d,每日1次,后采用大脑中动脉栓塞法(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)行大鼠局灶性脑缺血模型制备,术后连续ig给药3d。采用ZeaLonga神经学评分标准记录动物的行为活动,采用ELISA法检测血清中MMP-9、PA及TIMP1的表达。结果脑泰方高剂量组神经学评分较空白对照组有显著降低(P<0.05);脑泰方高、中、低剂量组血清中MMP-9、PA的表达显著降低(P<0.05),脑泰方高、中、低剂量组TIMP1表达明显升高(P<0.05)。结论脑泰方对局灶性脑缺血导致的血脑屏障损伤有一定保护作用。

VEGF-C MMP9及TIMP-1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF-C)、基质金属蛋白酶MMP9及其抑制物TIMP-1在宫颈癌组织中的表达,及与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接染色法(SP法),检测62例宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期患者癌组织中VEGF-C、MMP9及其抑制物TIMP-1的表达,并进行统计学分析。结果:VEGF-C、MMP9及其抑制物TIMP-1在宫颈鳞癌Ⅰ、Ⅱ期均为高表达。VEGF-C在宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期和有淋巴转移者的表达率分别为73.8%、85%、100%。MMP9为66.7%、75%、93.3%。TIMP-1为64.3%、60%、66.7%,VEGF-C、MMP9及TIMP-1在浸润间质≥1/2的表达高于<1/2(P<0.05)者;其表达与浸润深度及淋巴结转移相关。结论:VEGF-C与宫颈癌的侵袭和转移密切相关;MMP9及其抑制物TIMP-1与肿瘤的浸润及侵袭转移有关,VEGF-C、MMP9及TIMP-1在宫颈癌转移中发挥了重要作用。

索拉非尼对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的探讨索拉非尼(sorafenib)体外对EC9706细胞生长抑制作用及其机制。方法 q RTPCR检测sorafenib作用后MMP-2、MMP-9、TIMP1、AKT和Bcl-2 m RNA的表达;Western blot检测sorafenib作用后AKT、p-AKT、Bcl-2、MMP-2和TIMP1蛋白表达水平的变化;Hoechst/PI染色荧光显微镜观察sorafenib诱导的细胞凋亡/坏死;细胞划痕实验观察sorafenib对EC9706细胞的迁移抑制作用。结果与对照组相比,q RT-PCR显示sorafenib下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2 m RNA表达,上调TIMP1 m RNA表达(P<0.05);Western blot显示sorafenib降低MMP-2、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平,上调TIMP1蛋白表达水平(P<0.05);荧光显微镜观察发现sorafenib诱导红染细胞增加(P<0.05);细胞划痕实验发现sorafenib作用后划痕明显变宽,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论索拉非尼能够上调TIMP1表达水平、下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2表达水平,可以抑制食管鳞癌EC9706细胞的迁移、促进凋亡坏死,这些可能是其产生抗肿瘤作用的机制之一。

基于生物信息学筛选纳米二氧化硅致肺纤维化关键因子

目的构建巨噬细胞-成纤维细胞体外模型模拟肺纤维化过程,探讨纳米二氧化硅(SiNPs)暴露致肺纤维化的关键机制。方法于2021年1月,取对数生长期的人单核细胞白血病(THP-1)细胞,分别采用0、25、50、100μg/ml SiNPs处理24 h,收集THP-1细胞上清液分别作用于对数生长期的对照组和低、中、高剂量组人胚肺成纤维(MRC-5)细胞,继续培养24 h。检测不同组别MRC-5细胞增殖情况。检测MRC-5细胞上清液中细胞羟脯胺酸(Hyp)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。检测高剂量组MRC-5细胞中的差异蛋白表达情况,应用GeneCard数据库中肺纤维化相关蛋白对高剂量组MRC-5细胞进行差异肺纤维化蛋白的筛选。应用GO分析对高剂量组的差异肺纤维化蛋白进行富集分析,应用String数据库构建高剂量组的差异肺纤维化蛋白的相互作用(PPI)网络,使用CytoHubba软件筛选高剂量组的关键差异肺纤维化蛋白。使用Pearson相关分析计算关键差异肺纤维化蛋白之间的相关系数,Western blotting检测不同组别中关键差异肺纤维化蛋白表达。结果与对照组比较,低、中、高剂量组MRC-5细胞增殖率增加(P<0.05)。与对照组比较,低、中、高剂量组细胞上清液中Hyp、IL-1β的表达水平均升高(P<0.05),高剂量组细胞上清液中IL-6、TNF-α蛋白表达水平均升高(P<0.05)。用GeneCard数据库结合高剂量组差异表达蛋白共筛选出26个差异肺纤维化蛋白,GO分析显示,差异肺纤维化蛋白主要调控细胞外基质水解、细胞炎症反应、组织修复和细胞增殖等生物过程。CytoHubba软件计算出基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)是PPI网络中的关键节点蛋白。相关分析结果显示,MMP9蛋白与基质金属蛋白酶1(MMP1)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、TIMP1和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达相关(r=0.97、0.98、0.94、0.93,P<0.05)。Western blotting结果显示,与对照组比较,低、中、高剂量组TIMP1蛋白表达均升高(P<0.05),而MMP9蛋白表达仅在高剂量组增加(P<0.05)。结论SiNPs暴露后体外细胞肺纤维化模型中MRC-5细胞的差异肺纤维化表达蛋白主要调控细胞外基质水解、组织修复、细胞炎症等生物过程,且MMP9、TIMP1蛋白可能是影响SiNPs暴露后MRC-5细胞纤维化进程的关键蛋白。