9-芴甲基氯甲酸酯柱前衍生反相高效液相色谱法测定大鼠脑内海马组织中谷氨酸与γ-氨基丁酸含量

目的:建立并改良柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC),测定大鼠脑内海马组织中氨基酸类神经递质,研究戊四唑(PTZ)致病大鼠脑内海马组织中谷氨酸(GLu)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量变化。方法:通过PTZ皮下注射SD大鼠进行癫痫动物造模,将大鼠随机分为正常对照组(皮下注射生理盐水)、癫痫组(皮下注射PTZ),样品经甲醇及乙腈处理后,采用RedClassical AQ-C18色谱柱(5μm,250 mm*4.6 mm),以9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-CL)为柱前衍生剂,流动相A:50 mmol/L乙酸钠溶液(PH4.8)410 mL+去离子水85 mL+四氢呋喃5 mL;流动相B:乙腈500 mL。流速:1.0mL/min,在柱温30~32℃下采用梯度洗脱程序进行洗脱,检测波长265nm。结果:GLu和GABA在30min内分离完全,在质量浓度为20~200μg/mL范围内有良好的线性关系,线性相关系数均大于0.9995;两种氨基酸加标回收率均大于100%,加标回收率的RSD均小于2%。结论:改良后的FMOC-CL柱前衍生反相高效液相色谱法稳定、简单、反应快速、灵敏度高、特异性及重复性好,能有效分离并检测大鼠脑内海马组织中的GLu与GABA。

9-芴甲氧羰酰氯柱前衍生同时测定环境水样中草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸-高效液相色谱法

建立了9-芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生同时测定环境水样中草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸-高效液相色谱法。水样经调节pH为4~10后,用二水合柠檬酸三钠净化、过滤,取2 mL过滤好的样品依次加入0.5 mL 0.04 mol/L四硼酸钠溶液、1.0 mL 1.0 g/L9-芴甲氧羰酰氯乙腈溶液,在40℃下水浴衍生1 h,以5 mL二氯甲烷净化去除衍生水解产物FMOC-OH,取水相过滤测定。3种化合物以甲醇+0.02 mol/L乙酸铵水溶液为流动性,经Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6×250 mm,5 μm)分离,激发波长270 nm、发射波长315 nm进行荧光检测。结果表明,3种化合物在2.0~50.0 μg/L范围内相关系数(r)均大于0.999,线性关系良好,方法检出限为0.05~0.60 μg/L。环境水样在3个不同加标水平下,草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸平均回收率分别为101%~108%、101%~104%、102%~112%,相对标准偏差(RSD)分别为1.1%~2.6%、2.4%~5.7%、2.1%~7.2%。该方法简便、准确、重现性好,适用于环境水样中草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸的同时分析。