9.1C3分子对人NK细胞和T细胞细胞毒作用的抑制效应

目的探讨9.1C3分子是否作为抑制型受体调节NK细胞和T细胞的杀伤功能。方法用抗CD56抗体和羊抗鼠IgG免疫磁珠分离混合淋巴细胞培养中活化的淋巴细胞 ,分选CD56 +细胞和CD56 -细胞分别作为效应细胞。采用重导向杀伤实验(redirectedkillingassay,RKA)观察抗9.1C3抗体对效应细胞杀伤小鼠肥大细胞瘤细胞P815作用的影响。结果发现人NK细胞和T细胞对P815细胞均有一定的杀伤作用 ,在效靶比为4∶1 ,2∶1和1∶1时 ,NK细胞和T细胞的杀伤率分别为:6.4% ,3.4% ,1.1%和21.2 % ,16.7 % ,6.5 %。用抗CD16和抗CD3抗体分别刺激NK细胞和T细胞时 ,它们对P815细胞的细胞毒作用显著增强 ;在相同的效靶比例 ,它们对P815的杀伤率分别为:47.1 % ,32.2% ,19.1 %和64.4 % ,50.3% ,39.5 %。但用抗9.1C3抗体刺激效应细胞时 ,不仅NK细胞的杀伤作用完全被抑制 ,CD16介导的NK细胞的杀伤作用也被明显下调 ,其杀伤率仅为18.5 % ,9.7 %和7.0 % ;但对CD3介导的T细胞的杀伤作用只轻度被抑制。结论9.1C3分子可能是一种新的抑制型杀伤细胞受体 ,对NK细胞和T细胞细胞毒作用的负调节可能有所不同。

9.1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制

探讨 9 1C3分子对杀伤细胞功能的影响。方法 :以新鲜分离的PBMC或混合淋巴细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞 ,采用重导向杀伤实验 (Redirectedkillingassay ,RKA)观察 9 1C3抗体对效应细胞杀伤P815细胞作用及其杀伤过程中TNF 浕分泌的影响?峁?:9 1C3抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用 ,并使效应细胞分泌TNF 浕水平降低。结论 :9 1C3分子是一种抑制型杀伤细胞受体。

9.1C3/LAIR-1的真核表达、纯化及单克隆抗体的制备和鉴定

目的 表达并纯化 9.1C3/LAIR 1胞膜外区与人的IgG1Fc段的融合蛋白 ,制备针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的单克隆抗体 (mAb)。方法 构建真核表达载体 pIg/ 3C 9.1C3/LAIR 1,表达并纯化 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白。以 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠 ,制备。以间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性 ,以竞争结合实验鉴定mAb识别LAIR 1的表位。结果表达并纯化了 9.1C3/LAIR 1 hIgFc融合蛋白 ,以其免疫BALB/c小鼠 ,获得 1株针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的mAb 4H7。4H7对HL 6 0细胞和经 9.1C3/LAIR 1cDNA转染的COS7细胞上的表位识别 ,与已报道的抗 9.1C3mAb体不同。结论 成功地构建了 9.1C3/LAIR 1胞膜外区基因的真核表达载体 ,并表达纯化了 9.1C3/LAIR 1 hIgFc融合蛋白。获得一株针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的mAb ,为进一步研究9.1C3/LAIR

9.1C3对CD2和CD3诱导的杀伤作用的影响及其机制探讨

目的 探讨９．１Ｃ３分子对ＣＤ２和ＣＤ３诱导的ＰＢＭＣ杀伤作用的影响及其作用机制。方法以活化ＰＢＭＣ为效应细胞，采用重导向杀伤实验（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ，ＲＣＡ），观察９．１Ｃ３对ＣＤ２、ＣＤ３介导效应细胞杀伤Ｐ８１５细胞作用的影响。以Ｊｕｒｋａｔ细胞为模型，用相应的抗体刺激细胞，通过荧光分光光度计，测定９．１Ｃ３对ＣＤ２、ＣＤ３诱导［Ｃａ２＋］ｉ升高的影响。结果９．１Ｃ３ ｍＡｂ能显著抑制ＣＤ２ ｍＡｂ介导活化ＰＢＭＣ对Ｐ８１５细胞的杀伤作用，但对ＣＤ３ ｍＡｂ介导杀伤的抑制作用较弱。以Ｊｕｒｋａｔ细胞为模型，发现ＣＤ２ ｍＡｂ经羊抗鼠Ｉｇ（ｇｏａｔ ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ Ｉｇ， ＧＡＭ Ｉｇ）交联后能诱导［Ｃａ２＋］ｉ的升高，当同时加入９．１Ｃ３ ｍＡｂ时，［Ｃａ２＋］ｉ的升高受到抑制；ＣＤ３ ｍＡｂ在没有ＧＡＭ Ｉｇ交联时即能引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高，而９．１Ｃ３ ｍＡｂ对ＣＤ３ ｍＡｂ诱导［Ｃａ２＋］ｉ的升高有赖于ＧＡＭ Ｉｇ的交联。结论９．１Ｃ３分子对ＣＤ２和ＣＤ３介导的杀伤的抑制程度不同。抑制杀伤细胞脱颗粒依赖的［Ｃａ２＋］ｉ升高可能是９．１Ｃ３分子抑制活?

CD226和9.1C3特异性抗体对NK-92细胞杀伤作用的影响

目的 :探讨NK细胞活化型受体CD2 2 6和NK细胞抑制型受体 9 1C3分子特异性抗体对活化NK细胞系NK 92杀伤的调节作用。方法 :通过间接免疫荧光染色和FCM分析 ,鉴定CD2 2 6和 9 1C3分子在NK 92细胞的表达 ,采用51 Cr释放实验和重导向杀伤实验观察CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92杀伤作用的影响。结果 :NK 92细胞为CD2 2 6阳性 ,9 1C3弱阳性。CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92自然杀伤作用没有明显的调节作用。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6mAb能增强NK 92对P815细胞的杀伤作用 ,而 9 1C3mAb对NK 92的自然杀伤以及CD2 2 6mAb诱导的杀伤均没有抑制作用。结论 :NK细胞活化型受体CD2 2 6分子可能参与NK 92细胞杀伤作用的正向调节 ,而NK细胞抑制受体 9 1C3分子对NK 92细胞杀伤功能的影响不大。

9．1C3单链抗体的基因构建及序列分析

本文在已克隆９．１Ｃ３抗体ＶＨ和Ｖｋ基因的基础上，用一编码疏水性多肽接头的ＤＮＡ，经重叠延伸拼接ＰＣＲ，构建了９．１Ｃ３单链抗体基因。经测序表明，ＶＨ、Ｖｋ及Ｌｉｎｋｅｒ的序列均正确，为９．１Ｃ３单链抗体的表达奠定了基础。

9．1C3单克隆抗体可溶性单链抗体基因的表达及其初步鉴定

用噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ构建含９．１Ｃ３单链抗体基因片段的重组表达栽体，经ＩＰＴＧ诱导后可表达一分子量约为３０ｋＤａ的可溶性融合蛋白。体外生物学实验表明，诱导表达的９．１Ｃ３单链抗体，可阻断ＮＫ细胞对靶细胞Ｋ５６２的杀伤。此结果为临床应用９．１Ｃ３单链抗体治疗自身免疫性疾病和预防移植排异反应提供了基础。