β淀粉样蛋白25-35对BV2细胞TREM2/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨不同浓度β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对小胶质细胞髓样细胞触发受体2(TREM2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将BV2细胞随机分为5组,分别加入0、5、10、20、40μmol/L的Aβ25-35,作用24、48 h,镜下观察细胞形态,CCK-8法测定细胞活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定NF-κBp65、TREM2 mRNA表达。结果:显微镜下观察干预48 h后Aβ25-35≥10μmol/L细胞成片死亡,干预24 h后,CCK-8检测显示,不同浓度Aβ25-35干预BV2细胞的存活率均>70%,ELISA和RT-PCR检测显示,Aβ25-3520μmol/L和40μmol/L组促炎因子TNF-α和TREM2 mRNA的表达均明显升高,Aβ25-3520μmol/L的NF-κB p65 mRNA表达明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ25-35浓度20μmol/L作用24 h,能够激活小胶质细胞发生炎症反应,可能与TREM2/NF-κB信号通路的激活有关。

调心方对杏仁核注射Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的影响

目的 研究调心方 (HBR)对杏仁核注射 β-淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)致阿尔茨海默病 (AD)模型大鼠相关病理变化的作用。方法 单侧杏仁核注射 Aβ2 5- 35造成 AD大鼠模型 ,采用 Morris水迷宫法、放射免疫法、免疫组化法、RT- PCR法 ,以 Aricept为对照 ,观察 HBR对 AD模型大鼠的空间学习记忆能力、胆碱能系统、Aβ1 - 40 沉积、tau蛋白异常磷酸化及脑额叶皮层内 APP m RNA表达的影响。结果 HBR可显著改善 Aβ2 5- 35诱导的 AD大鼠空间学习记忆障碍 ,提高模型大鼠的胆碱乙酰化转移酶 (Ch AT)活性及 M受体结合容量 (Rt)值 ,减少 APP m RNA的表达和 Aβ1 - 40 的沉积 ,抑制 tau蛋白的异常磷酸化。结论 HBR对 Aβ2 5- 35诱导的 AD大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统损害具有显著改善作用 ,可以明显减轻 Aβ1 - 40 的沉积和 tau蛋白的异常磷酸化。

APP17肽对Aβ_(25-35)诱导神经细胞凋亡保护作用

目的 通过形态学和生化学指标观察APP17肽对Aβ2 5 3 5诱发SH SY5Y细胞凋亡是否有保护作用 ,并对其保护作用机制作进一步的探讨。方法 选用细胞形态观察、半定量LM PCRDNAladderAssay和流式细胞仪定量测定细胞凋亡率的方法观察APP17肽是否对Aβ2 5 3 5诱发SH SY5Y细胞凋亡有保护作用 ;通过测定细胞MTT代谢率 ,共聚焦显微镜观察Aβ2 5 3 5和APP17肽对细胞内过氧化物含量、线粒体膜电位的影响以及WesternBlotting观察细胞内凋亡诱导因子AIF及核转录因子NF κB的表达情况 ,探讨了APP17肽的保护作用机制。结果 APP17肽可以明显改善Aβ2 5 3 5造成的细胞形态损伤 ,显著降低细胞凋亡比率 ;与Aβ2 5 3 5损伤组相比 ,APP17肽预孵育能明显提高细胞MTT代谢率 ,稳定线粒体膜电位 ,减少AIF的表达 ;有效降低Aβ2 5 3 5引起的细胞内过氧化物含量增高 ;并且使具有神经保护作用的核转录因子NF κB表达增加。结论 APP17肽可以稳定线粒体功能、降低细胞内过氧化物含量 ,激活NF κB并使其持续表达 ,对Aβ2 5 3 5诱导的SH SY5Y细胞凋亡有比较明显的保护作用。

知母皂苷BⅡ对Aβ_(25-35)诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用

目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及AChE(乙酰胆碱酯酶)活力。结果知母皂苷BⅡ10-4、10-5mol.L-1能明显增强Aβ25-35(20μmol.L-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用。结论知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关。

地黄活性成分梓醇抗Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/L Aβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达。结果梓醇终浓度1×10-5mol/L和1×10-4mol/L显著提高PC12细胞存活率(P<0.05和P<0.01);1×10-4mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P<0.01)。Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白BaxmRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5mol/L和1×10-4mol/L有降低作用(P<0.05和P<0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P<0.05和P<0.01)。结论地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用。

Aβ25-35伤害大鼠空间学习记忆和在体海马长时程增强的联合研究

目的:探讨海马内注射β-amyloid protein 25-35(Aβ25-35)所致Alzheizer’s病(AD)模型大鼠空间学习记忆功能障碍的海马突触可塑性长时程增强(LTP)机制,为联合开展AD动物行为学和在体电生理学研究提供实验证据。方法:在脑立体定位仪上给予大鼠双侧海马分别注射4 nmol/L Aβ25-35或等体积生理盐水每侧2μl,手术后恢复2周,每只大鼠依次进行行为学和电生理两部分实验。首先,利用Morris水迷宫进行空间学习、记忆功能测试;之后,进行在体海马CA1区场兴奋性突触后电位(fEPSP)引导记录实验,观察突触可塑性指标长时程增强(LTP)的改变。结果:与对照组相比,海马内注射Aβ25-35大鼠的空间学习记忆功能和在体海马突触可塑性LTP均有改变,其中:逃避潜伏期和逃避距离明显增加(P<0.01);目标象限内游泳时间和距离明显缩短(P<0.01);在体海马LTP幅度显著降低(P<0.01)。结论:海马内注射Aβ25-35可导致大鼠空间学习记忆功能障碍;联合实验中Aβ25-35同样可引起在体海马LTP改变。提示同批动物先后进行行为学和电生理学测试的方法是可行的,行为学实验不会影响后续LTP的实验结果。因此,本实验为行为学改变后进行在体LTP机制探讨提供了实验依据,为有效开展行为学和电生理学实验提供了思路。

知母皂苷对Aβ_(25-35)引起的巨噬细胞炎症介质释放的抑制作用及信号转导机制

目的观察知母皂苷(SAaB)是否能对抗淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)引起的巨噬细胞炎症介质释放并探讨其信号转导通路的影响。方法小鼠腹腔巨噬细胞培养24 h,加入不同浓度SAaB(10、30和100μmol·L-1)或加入不同的阻断剂(诱导性一氧化氮合酶阻断剂SMT、MEK1的特异性阻断剂PD98059、p38MAPK特异性阻断剂SB203580和PI3K特异性阻断剂LY294002),之后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)继续培养。Aβ25-35作用2 h后,采用Westernblot观察巨噬细胞磷酸化Akt/PKB蛋白表达水平的改变。Aβ25-35作用48 h后,取巨噬细胞培养上清液分别测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的含量变化。结果 PD98059和LY294002均可明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加和磷酸化Akt/PKB表达明显增加。SMT可完全对抗Aβ25-35引起的NO释放增加。SAaB可明显抑制Aβ25-35引起的TNF-a和NO的产生增加,并呈明显的浓度依赖性。SAaB也可明显抑制Aβ25-35引起磷酸化Akt/PKB表达增加。结论 SAaB能够明显的抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞炎症因子释放,这种抑制作用部分通过SAaB抑制Akt/PKB信号转导通路产生。

西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用。方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化。结果:50μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05)。而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系。结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用。

TAT-tCNTF融合蛋白对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的确定TAT-tCNTF融合蛋白能够透过细胞膜进入细胞内,并研究其对Aβ诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法重组PCR获得人截短型CNTF基因后,与pBV220-TAT载体连接,在大肠杆菌中表达,细胞免疫荧光方法检测TAT蛋白运载融合蛋白穿过SH-SY5Y细胞膜的作用,Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞产生神经毒性,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测融合蛋白对细胞存活率的影响,Heochst33342/PI荧光双染法进行细胞凋亡和坏死的形态学观察,并进行LDH释放分析进一步检测TAT-tCNTF对细胞损伤后的保护作用。结果成功构建pBV220-TAT-tCNTF表达载体,Western blot结果表明重组融合蛋白可以与CNTF抗体特异性结合,细胞免疫荧光方法显示TAT-tCNTF能大量进入细胞,而rhCNTF只有微量进入细胞。对Aβ25-35诱导损伤的SH-SY5Y细胞MTT、Heochst33342/PI荧光双染法及LDH分析都表明TAT-tCNTF能明显提高细胞的存活率。结论TAT-tCNTF融合蛋白可以跨越细胞膜,能够保护Aβ25-35诱导损伤的SH-SY5Y细胞,具有促进细胞生存生长的活性。

红参水提物对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的探讨红参水提物对Aβ25-35诱导人神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,模拟阿尔茨海默病患者脑内神经元的病理损伤模型,以不同浓度的红参水提物进行干预;用倒置显微镜观察其形态学的变化;MTT法测定细胞的存活率;流式细胞技术检测细胞的凋亡率以及线粒体膜电位的变化。结果50μmol·L-1Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72h后,细胞变圆、聚集,其存活率为39.26%±3.16%、凋亡率为37.30%±0.69%,线粒体红绿荧光强度比值为0.45±0.10;而Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞与不同浓度(1、5、10mg·ml-1)红参水提物同时孵育后,明显减少了细胞损伤,升高了细胞存活率、降低了凋亡率,并升高了线粒体红绿荧光强度比值。结论红参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用。

不同浓度Aβ_(25-35)蛋白模拟阿尔茨海默病模型学习记忆的差异

目的不同浓度的淀粉样蛋白Aβ_(25-35)侧脑室注射后,观察大鼠Morris水迷宫学习记忆能力的变化,探讨制备AD模型大鼠时Aβ_(25-35)注射的最佳浓度。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组Aβ_(25-35)注射浓度分别为2、4和8μg/μL。参照《大鼠脑立体定位图谱》,选取右侧侧脑室注射聚集态的Aβ_(25-35),制备AD大鼠模型。造模成功后7 d采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力的变化。结果平均游泳速度比较,各组大鼠间差异无显著性(P>0.05)。逃避潜伏期结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显增加,差异有显著性(P<0.05);模型组中,与注射2μg/μL的大鼠比较,注射4μg/μL与8μg/μL后大鼠逃避潜伏期时间明显增加,差异有显著性(P<0.05);4μg/μL与8μg/μL组间比较,差异无显著性(P>0.05)。目标象限的活动时间与路程显示,与假手术组比较,模型组注射不同剂量Aβ_(25-35)的大鼠目标象限活动时间和路程均显著减少,差异有显著性(P<0.05),但模型组不同浓度间比较差异无显著性(P>0.05)。空间探索结果显示,与假手术组比较,模型组注射不同剂量Aβ_(25-35)的大鼠穿越平台次数均显著减少,差异有显著性(P<0.05);模型组中,与注射2μg/μL的大鼠比较,注射4μg/μL和8μg/μL后大鼠穿台次数明显减少,差异有显著性(P<0.05)。4μg/μL与8μg/μL组间比较,差异无显著性(P>0.05)。结论单侧侧脑室注射Aβ_(25-35)蛋白制备大鼠AD模型时,注射Aβ_(25-35)的推荐浓度为4μg/μL。

原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的 探讨原花青素(Procyanidins，PC)对β淀粉样肽25～35(β amyloid peptide25-35，Aβ25-35)诱导PCI2细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-P1荧光染色法检测凋亡，RT-PCR检测P53和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测P53和Bcl-2蛋白表达。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩，凝聚和碎裂，降低P53 mRNA表达以及P53蛋白表达，增加bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。

Aβ_(25-35)诱导PC12细胞内Ca^(2+)浓度升高和自噬发生

目的研究Aβ25-35对PC12细胞内Ca2+浓度和自噬发生的影响。方法培养PC12细胞,分别用0、5、10μmol/L Aβ25-35处理24 h,用MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察自噬泡,共聚焦显微镜检测LC3-Ⅱ表达,透射电镜观察细胞超微结构。结果 5、10μmol/L Aβ25-35处理24 h后,PC12细胞存活率分别为(64.6±2.3)%和(41.3±4.1)%,与对照组相比显著下降(P<0.05),细胞内游离Ca2+浓度升高(P<0.05)。与此同时,随着Aβ25-35浓度升高,显微镜下可见细胞皱缩、变圆,与对照组相比,细胞内MDC阳性颗粒增多,LC3-Ⅱ荧光强度增强(P<0.05),与Aβ25-35呈浓度依赖关系。电镜下可见单(双)层膜样自噬体。结论Aβ25-35诱导PC12细胞发生自噬呈浓度依赖关系,其发生可能与细胞内游离Ca2+浓度升高有关。

Aβ_(25-35)对大鼠大脑皮质神经元神经甾体水平的影响

目的研究Aβ25-35对大鼠大脑皮质神经元合成神经甾体的影响。方法采用Aβ25-35(1μmol·L-1)处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,固相萃取结合高效液相色谱-质谱联用法测定细胞培养液中神经甾体的浓度,四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞活性。结果与对照组相比,Aβ25-35处理后神经元存活率降低约50%(P<0.01),胆固醇处理组神经元存活率未见改变(P>0.05),但Aβ+胆固醇组的神经元存活率明显高于Aβ处理组(P<0.01)。与胆固醇组相比,Aβ25-35处理后神经甾体PREG水平略有降低(P>0.05),PROG水平明显下降(P<0.01),AP水平明显增高(P<0.01)。结论神经甾体PREG-PROG-AP代谢通路在Aβ25-35引起的大鼠大脑皮质神经元损伤时发生明显改变,并能部分地对抗Aβ的神经毒性作用。

Aβ_(25-35)诱导大鼠胚胎海马神经元凋亡的形态学影响

目的：观察染料木素（Genistein，Gen）对Aβ-amyloid peptide fragment25-35（AB25-35）诱导胎鼠海马神经元细胞损伤前后形态学指标的变化．方法：取16—18d孕龄胎鼠海马组织进行神经元细胞的原代培养，细胞培养72h后进行实验．Gen浓度为0．32mg／L，用0．01μmol／L 17β-雌二醇为阳性对照组，细胞损伤模型采用25mg／L Aβ25-35建立．实验分6组，即Gen组、Gen模型组、雌二醇组、雌二醇模型组、空白组和空白模型组．海马神经元培养完毕，将Gen、17β-雌二醇比Aβ25-35提前4h加入培养液，继续孵育24h后观察海马神经元细胞形态学：活细胞形态、细胞核Hoechst33342和PI双染色以及神经元NSE和Tunel双染色等指标的变化水平．结果：①空白模型组海马神经元细胞树突轴突基本消失，未见网状结构，细胞胞体没有折光性，细胞碎片很多；和空白模型组相比较，Gen模型组细胞可见明显树突轴突，并可连接成网状结构，细胞胞体部分可见折光性，细胞碎片明显减少．Gen模型组和雌二醇模型组细胞形态差异不大．②空白模型组可见大量坏死细胞核（红色），仅有少量正常细胞；和空白模型组相比较，Gen模型组坏死细胞核的数量明显减少，而正常细胞核的数量明显增加．Gen模型组和雌二醇模型组差异不大．③空白模型组可见大量坏死细胞核着色（Tunel黄绿色），而胞体染色（NSE红色）不可见；和空白模型组相比较，Gen模型组坏死细胞核的数量明显减少，而正常细胞的数量明显增加，且胞体可连接呈网状结构．Gen模型组和雌二醇模型组细胞形态差异不大．结论：①Gen模型组较空白模型组能明显改善Aβ25-35诱导损伤后海马神经元细胞形态学各指标，且和雌二醇模型组比较差异不大；②Gen对Aβ25-35诱导的海马神经元起保护因子或抗凋亡因子的作用，Gen有一定的神经保护作用；③Gen对Aβ25-35诱导海马神经元的神经保护作用机制可能与海马部位存在一定的雌激素受体从而引起雌激素水平变化有关．

复智散对抗Aβ25-35神经细胞毒性机制的研究

目的 研究自制中药复智散对 Aβ2 5 - 35神经毒性作用的影响及相关机制。方法 测定 Aβ2 5 - 35及复智散孵育下 SH- SY 5 Y神经母细胞瘤株的 MTT值 ,利用 Western Blot法检测 CREB、Bcl- 2、Cyt C的表达。结果 Aβ2 5 - 35致培养神经细胞存活率下降、CREB和 Bcl- 2表达下调、Cyt C表达增加 ,复智散促进神经细胞存活、上调CREB和 Bcl- 2、减少 Cyt C释放入胞浆。结论 复智散通过对 CREB、Bcl- 2和 Cyt C的影响对抗 Aβ2 5 - 35的神经细胞毒性效应。

黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方（RPEWM）对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆（AD）损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10-125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。

活血荣络方对Aβ_(25-35)损伤神经胶质细胞Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ表达的影响

目的：旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-Ca MKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病（AD）的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法。方法：分别将Aβ25-35损伤星形胶质细胞铺板,以（2.53）×104/孔的密度接种到96孔板中,并随机分为6组,分别为2倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组、s FRP组、空白组;待细胞的融合率为85%90%时,含药组分别给予相应的含药血清,s FRP组给予s FRP,空白组予以空白血清。取生长对数期细胞加相应刺激分别处理12、24、48、72 h。分别取细胞上清液分离细胞,用MTT法检测细胞毒力,用流式细胞术检测细胞凋亡;用化学免疫法检测Wnt5、Fz5、Ca MKⅡ的含量。结果：各组OD值随着时间的延长而增高,2倍活血荣络方组72 h OD值明显高于12 h（P〈0.05）,而空白组、s PRF组、2倍、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异（P〉0.05）;各给药组细胞活性均高于空白组（P〈0.05）,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞活性低于空白组（P〈0.05）。各组细胞凋亡数目随着时间的延长而增高,其中空白组72 h细胞凋亡比例高于12 h（P〈0.05）,s PRF组72 h细胞凋亡比例明显高于12 h;2倍、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异（P〉0.05）;各给药组细胞凋亡比例明显低于空白组及s PRF组,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞凋亡比例高于空白组（P〈0.05）。各给药组Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达均高于空白组（P〈0.05）,其中2倍活血荣络方组Wnt5α表达明显高于空白组（P〈0.01）,空白组明显高于s PRF组（P〈0.05）;其它给药组间比较：2倍活血荣络方组明显高于1倍活血荣络方组、多奈哌齐组及0.5倍活血荣络方组（P〈0.01）,1倍活血荣络方组与多奈哌齐组Wnt5α表达程度无明显差异（P〉0.05）,此两组Wnt5α表达均高于0.5倍活血荣络方组（P〈0.05）。结论：活血荣络方能有效提高Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达,减轻神经毒性的积累及细胞凋亡反应的发生,保护神经胶质细胞,延缓AD发病进展,其中以2倍活血荣络方效果最佳。

原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期紊乱的保护作用

目的观察原花青素(PAC)对β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25-35)诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期紊乱与凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用血清饥饿培养使PC12细胞同步于G0期,PAC预处理后加入Aβ25-35,通过流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,RT-PCR和Western印迹从mRNA及蛋白水平检测p21、Cyclin D1、pRb和E2F1基因表达的变化。结果与Aβ25-35诱导组比较,PAC保护组S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P<0.05);p21 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),Cyclin D1、E2F1 mRNA和Cyclin D1、pRb蛋白表达降低(P<0.05)。结论PAC对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期紊乱与凋亡起保护作用,其机制可能与上调p21表达,下调Cyclin D1、pRb、E2F1表达有关。

藏药旺拉提取物CE保护Aβ_(25-35)介导的大鼠前额叶神经元损伤的作用研究

目的探讨藏药旺拉提取物CE在Aβ25-35所致大鼠前额叶神经元损伤中的作用。方法运用大鼠前额叶神经细胞原代培养技术,采用Aβ25-35诱导建立神经细胞损伤模型。实验共分为6组:正常对照组,Aβ25-35模型组,CE高、中、低浓度预处理组(CE终浓度分别为10,1,0.1 mg·ml-1)和CE组(终浓度为10 mg·ml-1)。免疫组化法鉴定大鼠前额叶神经细胞纯度;镜下观察神经细胞形态学变化;MTT法测定细胞活性;TUNEL法检测细胞凋亡情况;免疫组化法检测大鼠前额叶神经细胞中微管蛋白β-tubulin Ⅲ蛋白的形态结构及表达。结果培养的大鼠前额叶神经细胞纯度达95%以上;形态学观察显示:与模型组比较,CE预处理组神经细胞损伤程度明显减轻;24 h的CE高、中浓度预处理CE发挥着对Aβ25-35所致大鼠前额叶神经元损伤的保护作用,MTT法显示CE中高浓度预处理组细胞活性(0.783,0.667 3)比模型组细胞活性(0.603 8)明显升高(P<0.001或P<0.01);TUNEL法显示CE10 mg·ml-1高浓度预处理组细胞凋亡阳性率(11.1%)明显低于模型组细胞凋亡阳性率(32.1%)(P<0.001);CE10 mg·ml-1高浓度预处理组微管蛋白β-tubulinIII结构正常,表达量明显高于模型组。结论藏药旺拉提取物CE对Aβ25-35所致大鼠前额叶神经元损伤具有一定的保护作用,其作用与其维护神经元中微管蛋白β-tubulin III的正常形态及表达有关。