2型糖尿病合并代谢综合征患者血清CTRP9、A-FABP水平变化及临床意义

目的研究2型糖尿病(T2DM)合并代谢综合征(MS)(T2DM~MS)患者血清补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP9)、脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)水平变化及临床意义。方法前瞻性选择2021年1月至2023年12月于广西医科大学第二附属医院治疗的90例T2DM患者纳入研究组,根据是否合并MS将其分为T2DM~MS组(n=71)、T2DM未合并MS组(n=19)。将同期于广西医科大学第二附属医院进行体检的90名健康者纳入对照组。检测并比较研究组与对照组、T2DM~MS组与T2DM未合并MS组的糖脂代谢指标[空腹血糖、高密度脂蛋白(HDL-C)、总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯]及血清CTRP9、A-FABP水平。采用Pearson相关性分析CTRP9、A-FABP与各糖脂代谢指标的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线评价CTRP9、A-FABP对T2DM~MS的诊断效能。结果研究组的空腹血糖、总胆固醇、LDL-C、甘油三酯及血清A-FABP水平分别为(9.37±0.95)mmol/L、(4.38±0.45)mmol/L、(2.83±0.29)mmol/L、(1.58±0.17)mmol/L、(15.48±1.72)ng/mL,均高于对照组,研究组HDL-C及血清CTRP9水平分别为(1.23±0.14)mmol/L、(8.38±0.85)ng/mL,均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM~MS组空腹血糖、总胆固醇、LDL-C、甘油三酯及血清A-FABP水平分别为(10.26±1.32)mmol/L、(4.51±0.47)mmol/L、(3.15±0.33)mmol/L、(1.74±0.20)mmol/L、(18.21±2.06)ng/mL,均高于T2DM未合并MS组,T2DM~MS组HDL-C及血清CTRP9水平分别为(1.12±0.13)mmol/L、(7.26±0.75)ng/mL,均低于T2DM未合并MS组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,血清CTRP9水平与空腹血糖、总胆固醇、LDL-C、甘油三酯均呈负相关(r=-0.902、-0.780、-0.745、-0.753;均P<0.05),与HDL-C呈正相关(r=0.827,P<0.05);血清A-FABP水平与空腹血糖、总胆固醇、LDL-C、甘油三酯均呈正相关(r=0.843、0.812、0.839、0.722;均P<0.05),与HDL-C呈负相关(r=-0.768,P<0.05)。经ROC曲线分析,血清CTRP9联合A-FABP对T2DM~MS的诊断效能高于两者单独诊断。结论T2DM~MS患者血清CTRP9水平低表达,A-FABP水平高表达,血清CTRP9、A-FABP水平与糖脂代谢指标密切相关。血清CTRP9联合A-FABP可提高T2DM~MS的诊断效能,监测血清CTRP9、A-FABP水平有助于预测T2DM~MS的发生。

脂联素联合FGF-21、A-FABP在2型糖尿病的早期诊断中的应用价值分析

了解脂联素+FGF-21+A-FABP检测对于2型糖尿病早期诊断的价值。方法 选取2020.01-2023.12共计三年时间,本院住院T2DM病人及正常人群体检者300名。按照随机数表法将上述研究对象分为三组,A组:正常人群组(n=100),B组:糖尿病高危人群组(n=100),C组:糖尿病(n=100),符合糖尿病诊断标准。收集三组的基本信息,了解病情情况,并进行相关指标检测,进行对比分析。结果 糖尿病组和糖尿病高危人群组的ADPN明显低于正常人群组,而FGF-21、A-FABP明显高于正常人群组。同时,糖尿病组的ADPN明显低于糖尿病高危人群组,而FGF-21、A-FABP明显高于糖尿病高危人群组。结论 T2DM患者体内ADPN、FGF-21、A-FABP水平与病情息息相关,为患者提供涵盖这三个指标的综合检测手段,可以帮助早期诊断T2DM,以及建立起科学的治疗方案,拥有良好的临床应用价值。

鸡H-FABP和A-FABP基因表达与肌内脂肪含量相关研究

选用H-FABP和A-FABP基因作为影响鸡肌内脂肪沉积的候选基因,以北京油鸡、矮脚鸡、白莱航鸡和AA肉鸡为研究群体,利用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术,分别对56、90、120日龄H-FABP和A-FABP基因mRNA进行定量分析,结合IMF含量及屠体性状测定,分析H-FABP及A-FABP基因表达水平对IMF含量等的影响。结果表明:H-FABP基因mRNA随日龄的增长表达量显著降低,而A-FABP基因mRNA随日龄的增长表达量显著升高,并表现出显著的品种效应(P<0.01),性别因素对A-FABP基因表达影响显著。北京油鸡、白莱航鸡和AA鸡群体的H-FABP基因mRNA表达水平与IMF含量及屠体重呈现显著的负相关,而A-FABP基因mRNA表达水平与屠体重显著相关,与IMF含量没有显著的相关性。矮脚鸡A-FABP基因mRNA水平与IMF含量呈现显著的负相关,其H-FABP基因mRNA水平对屠体重影响显著,表现出显著的品种差异。

鸡A-FABP基因多态性分析及其与脂肪性状的相关研究

以北京油鸡为试验材料,对A-FABP基因进行单核苷酸多态性(SNPs)检测和基因型与性状的关联分析。方差分析结果表明,不同基因型间腹脂率、皮脂厚、肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01),体重在不同基因型间差异不显著(P>0.05)。由此推测,A-FABP可能为影响鸡脂肪代谢的主效基因或与主效基因相连锁。

鸭A-FABP基因的克隆及其组织表达

本文采用RT-PCR方法从35周龄母鸭脂肪组织中克隆了A-FABP基因的cDNA序列,其长度为422 bp,包含了1个399 bp的完整CDS,编码132个氨基酸。该序列与家禽（鹅、鸡）和哺乳动物（人、小鼠、猪、牛）的A-FABP基因序列约有94%和73.4%-75.7%的同源性,而相应氨基酸序列的同源性为92.4%和72.0%-77.3%。半定量RT-PCR研究结果为A-FABP基因在间脑、肺和肾组织中不表达,在脂肪组织中的表达明显高于其他组织（P〈0.5）。表明A-FABP基因在动物进化中具有高度保守性,该基因的表达具有组织特异性。

中外11个猪种A-FABP基因微卫星遗传变异的研究

利用微卫星技术对五指山猪、沂蒙黑猪、汉江黑猪、莱芜猪、北京黑猪、民猪、成华猪、内江猪、二花脸猪、巴马香猪和大白猪11个猪种共420头猪的脂肪细胞脂肪酸结合蛋白基因内含子的微卫星序列的遗传变异进行了研究。研究表明:(1)中国猪种在A FABP基因微卫星基因座上有极高的多态性,五指山猪的PIC最高(PIC=0 7904)并检测到11个等位基因,但北京黑猪仅检测到两个等位基因。(2)本实验中,只有北京黑猪、民猪、巴马香猪和大白猪A FABP基因微卫星在群体中的分布达到平衡状态。(3)群体间的基因分化系数分析表明,中国猪种在该微卫星基因座上分化程度平均约为40.83%。

A-FABP在不同鸡种中遗传多态性分析

利用PCR-RFLP技术和DNA测序检测了尤溪麻鸡、鹿苑鸡、隐性白羽鸡3个鸡种共计96只鸡的脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)第85位点和第1 805位点的遗传变异。结果表明:1)在这2个位点上,3个鸡种均存在变异,外来品种隐性白羽鸡以杂合子Cc居多;地方鸡种以cc居多,3个鸡种均含有较高频率的等位基因c,其中以尤溪麻鸡最高,而以隐性白羽鸡最低。2)A-FABP第85位点不影响A-FABP的氨基酸序列;而第1 805位点的遗传多态性影响氨基酸序列的变化:由脯氨酸变为丝氨酸,说明该多态性可能通过A-FABP基因的表达水平从而影响鸡的肉质。本试验为进一步分析A-FABP基因的遗传变异与肌内脂肪含量的关系及该分子标记在育种计划中的应用奠定基础。

鸡A-FABP基因不同基因型遗传效应及初步验证

本研究旨在探讨影响鸡肌内脂肪性状的重要候选基因A-FABP的不同基因型遗传效应,并进行初步验证,为进一步开发利用脂肪性状的有效分子标记提供依据。运用PCR-SSCP技术检测如皋鸡A-FABP基因的单核苷酸多态性(SNPs),并分析其与胸肌脂肪含量之间的关系;同时采用荧光定量PCR技术检测后代分离群体不同基因型的时空表达规律,进行不同基因型遗传效应的初步验证。研究表明,如皋鸡A-FABP基因外显子3中1 763位点存在A/G突变,引起Ser(AA型)突变为Asn(BB型);不同基因型对12周龄如皋鸡胸肌脂肪含量的关联分析发现,AA、AB基因型个体的IMF含量显著高于BB型个体(P<0.05),AA型IMF含量最高,为有利基因型;经后代分离群体Q-PCR证实,A-FABP基因的表达不存在性别差异,在不同组织中表达量顺序:腹脂>胸肌>心脏>肝脏;在不同时间阶段,肝脏、心脏和胸肌的表达趋势一致,4周龄时达到最高值,6～12周龄缓慢下降;而腹脂在10周龄时达到最高峰,12周龄开始下降。同一组织中不同基因型个体表达水平存在显著差异,BB基因型在所有组织中的表达量均处在较低水平,与肌内脂肪含量关联分析结果一致,从而表明BB型与低肌内脂肪含量具有紧密关联性。表明A-FABP基因外显子3中1 763位点变异可作为肌内脂肪性状有效的候选标记。

鸭A-FABP基因单核苷酸多态性分析及其与体脂性状相关的研究

以樱桃谷鸭为试验材料,对脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因进行单核苷酸多态性检测(SNPs),并对该基因型与体脂等性状进行关联分析。结果表明:在内含子2中发现A76T、T78C、T93C、C134T4个单碱基突变,鸭群中表现出3种基因型(AA、AB和BB)。方差分析结果表明:该品种的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、肝脏重、皮脂重、胸肌脂肪含量和肝脏脂肪含量在不同基因型间差异不显著;BB型腹脂重、腹脂率显著高于AA型和AB型;BB型皮脂率和腿肌脂肪含量显著高于AB型。结果提示A-FABP基因可能是影响鸭脂肪代谢的主效基因或与控制该性状的主效基因连锁。

A-FABP基因5′侧翼区多态性及其与秦川牛肉用性状的关联分析

本研究通过对牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因5′侧翼区的1441bp序列进行SNPs检测,结果在转录起始位点上游-389bp处发现T→C突变,进而利用PCR-SSCP的方法在秦川牛、南阳牛、鲁西牛、夏南牛和郏县红牛共5个牛群体中进行个体基因型分析,结果发现3种基因型,分别命名为AA、AB和BB。χ2检验表明,除秦川牛外其它各品种在该基因座均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。基因型与秦川牛肉用性状的关联分析发现,AB基因型个体的宰前活体质量、胴体质量、含水率均显著低于AA和BB基因型个体(P<0.05),AA和BB基因型个体之间差异不显著;BB基因型个体大理石花纹等级极显著优于AB基因型个体(P<0.01),显著优于AA基因型个体(P<0.05)。推测这一位点可能是影响牛肉大理石花纹及含水率的主效QTL或与之紧密连锁,可尝试做为肉牛肉质性状的候选分子标记。

利用实时荧光定量RT-PCR检测鸡A-FABP和H-FABP基因的差异表达

依据鸡A-FABP和H-FABP基因及参照基因GAPDH序列设计引物,以鸡心肌、胸肌和腿肌、肝脏和腹脂总RNA逆转录合成的cDNA为模板,GAPDH基因为参照基因,应用SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测如皋黄鸡和安卡红鸡A-FABP和H-FABP基因的差异表达。结果表明:A-FABP、H-FABP基因和参照基因GAPDH基因融解曲线为单峰,无杂峰及二聚体,其扩增效率分别为99.7%、99.8%和100.0%。如皋黄鸡H-FABP基因在心肌、胸肌和腿肌的差异表达量分别是安卡红鸡的0.0860、0.0680倍和0.0580倍(P<0.05)。H-FABP基因mRNA表达量与肌内脂肪含量呈显著负相关。如皋黄鸡A-FABP基因在腹脂和肝脏的表达量分别是安卡红鸡的15.9640倍和10.9640倍(P<0.05),而在心肌、胸肌和腿肌的表达量差异不显著。

秦川牛A-FABP基因的生物信息学分析

【目的】克隆秦川牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因,并对其进行生物信息学分析,为深入研究A-FABP基因与秦川牛肉质性状的关系奠定基础。【方法】以秦川牛脂肪组织为材料,采用RT-PCR方法对牛A-FABP基因进行克隆。使用DNAMAN、NCBI等一系列在线软件及工具,对所得到的序列及其编码蛋白质的结构和特性等进行生物信息学分析。【结果】秦川牛A-FABP基因含有15个酶切位点,编码的蛋白分子质量为14.7 ku,二级结构主要以α-螺旋、不规则盘绕和延伸链为结构元件,含132个氨基酸,其中强碱性氨基酸18个,强酸性氨基酸19个,疏水氨基酸45个,不带电荷的极性氨基酸32个;含有6个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,3个肉豆蔻酰基化位点,1个FABP结合域;含有4个Ser、6个Thr和1个Tyres,这11个氨基酸均可能成为蛋白激酶磷酸化位点。【结论】秦川牛A-FABP基因编码的氨基酸序列与人、鸡、小鼠、大鼠、野猪的氨基酸序列同源性分别为84.09%,85.61%,71.97%,88.33%,81.82%,表明在进化关系上,A-FABP氨基酸序列有较好的保守性;此蛋白序列具有脂钙蛋白结合域,没有信号肽;无明显跨膜区,不含有二硫键。

苏姜猪A-FABP基因遗传多态性及其与肉质性状的关联分析

研究采用PCR-RFLP技术分析苏姜猪、姜曲海猪、长白猪群体A-FABP基因遗传多态性,并用统计学方法分析基因座多态与肉质性状的相关性。结果表明:3个猪种A-FABP基因内含子1均具有Bsm I酶切多态性,分别检测到3种基因型(AA、AB和BB),χ~2适合性检验显示,3个猪种A-FABP基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。多态信息含量(PIC)分析显示,3个品种猪均为中度多态;基因型与肉质性状关联分析显示,不同基因型肌内脂肪含量、大理石纹差异显著,大理石纹AA、AB型显著高于BB型(P<0.05),肌内脂肪含量AA显著高于AB、BB型(P<0.05)。结论显示,苏姜猪、姜曲海猪、长白猪A-FABP基因intron 1多态性对肉质性状影响显著。

牛A-FABP与SREBP1基因的组织表达规律研究

A-FABP(脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白)和SREBP1(固醇调节元件结合蛋白)是动物体内参与脂肪沉积和脂质合成的重要基因。为了研究这两种基因在牛组织中的表达规律,研究利用qRT-PCR技术检测A-FABP和SREBP1在荷斯坦牛13种组织中表达水平,并进一步比较了这两个基因在秦川牛和雪龙黑牛脂肪、肌肉和肝脏的组织中表达差异。研究结果表明A-FABP基因在脂肪组织中的表达水平远远高于其他组织,SREBP1基因在各组织中均有表达,脂肪组织的相对表达量最高。A-FABP基因在雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中的表达量显著高于秦川牛的肌肉和肝脏(P<0.05),而在脂肪组织中,秦川牛和雪龙黑牛该基因表达量无显著差异(P>0.05)。SREBP1基因在雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中的表达量显著高于秦川牛的肌肉和肝脏(P<0.05),而在脂肪组织中,秦川牛表达量显著高于雪龙黑牛(P<0.05)。由于A-FABP和SREBP1在脂肪中表达量最高,且它们的表达量在脂肪沉积能力不同的秦川牛和雪龙黑牛肌肉和肝脏组织中存在显著差异,故推断这两种基因在牛脂肪组织的脂质代谢过程中发挥重要作用,对脂肪的沉积和大理石花纹牛肉的形成起到一定的调控作用。

鸡前脂肪细胞中A-FABP基因表达的变化对PPARγ、perilipin和E-FABP表达的影响

本研究以鸡原代前脂肪细胞为实验材料,探讨A-FABP基因在鸡脂类代谢过程中的功能以及该基因与脂类代谢相关7个基因间的调控关系。利用A-FABP基因的shRNA干扰载体和真核表达载体对该基因进行干扰和过表达,分别在干扰和过表达后24、36、48、60和72h时检测脂类代谢相关基因的表达情况。结果表明,干扰A-FABP后,鸡前脂肪细胞中PPARγ和perilipin基因的表达量在24和36h时显著低于对照组,在48h时显著高于对照组,在48和72h时,E-FABP基因表达量显著低于对照组;过表达A-FABP后,鸡前脂肪细胞中PPARγ和perilipin基因的表达量在24和36h时显著高于对照组,在48h时显著低于对照组,在所有检测的时间点E-FABP基因表达均显著下调。结果显示,在前脂肪细胞中,鸡A-FABP表达量的变化影响PPARγ、perilipin和E-FABP的表达。

猪A-FABP基因真核表达载体的构建及其组织表达

本实验以长白猪背最长肌为实验材料,进行组织RNA的提取及A-FABP基因的克隆,构建p EGFPN1-A-FABP真核表达载体,并通过脂质体转染成纤维细胞,48 h观察荧光表达。同时应用荧光定量PCR法检测猪7种不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌)中A-FABP基因的差异表达。结果表明:成功构建p EGFP-N1-A-FABP融合表达载体,并在细胞中表达绿色荧光蛋白;A-FABP基因在7种组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,与其他组织相比差异极显著(P<0.01),而脾脏和肾脏中的表达量相对于心脏、肝脏和肺脏差异显著(P<0.05),而A-FABP基因表达量在心脏、肝脏和肺脏中差异不显著(P>0.05)。表明该基因能够在真核载体和细胞中表达,并且在猪不同组织的表达具有差异性。

早胜牛A-FABP基因SNPs与胴体品质和肉质性状的关系

为研究早胜牛(Bos taurus)A-FABP基因多态性与胴体品质和肉质性状的相关性,采用PCR-SSCP方法对5个早胜牛群体(庆阳群体、平凉群体、南德温与庆阳杂种群体、西门塔尔与平凉杂种群体、秦川与平凉杂种群体)A-FABP基因型进行了测定,并分析其多态性与胴体品质和肉质性状的相关性。结果表明,A-FABP基因第2外显子区c.280A>G,并检测到3种基因型AA、AG和GG。对屠宰后胴体和肉质性状相关分析表明,基因型AG屠宰率极显著高于AA(P<0.01),而净肉率GG极显著高于AA(P<0.01);基因型AG剪切力显著低于AA(P<0.05)。由此认为A-FABP基因突变位点可作为早胜牛胴体性状和肉质性状遗传标记。

布莱凯特黑牛A-FABP基因表达规律及其肌内脂肪含量研究

本实验旨在探究布莱特黑牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因表达规律,鉴定其与肌内脂肪含量调控的相关性。通过克隆获得A-FABP基因,采用生物信息学方法分析基因结构;利用荧光定量PCR技术研究A-FABP基因在不同组织及不同时期的表达情况;采用PCR-SSCP方法探究基因型与肌内脂肪含量的相关性。结果表明:克隆获得的A-FABP序列与牛、瘤牛、山羊亲缘关系近,同源性高;A-FABP基因在背最长肌中表达量最高,不同时期A-FABP基因的表达量随月龄增加逐渐降低;关联分析显示其多态位点与肌内脂肪含量显著相关(P<0.05),与大理石花纹评分不显著。综上推测,A-FABP基因参与牛肌内脂质代谢相关过程,对调控脂肪的沉积发挥重要作用,可作为肉质性状的辅助标记基因。

鲤A-FABP基因的克隆及其表达谱研究

为探索A-FABP基因表达与鲤肌内脂肪质量分数的关联,利用RT-PCR方法克隆鲤（Cyprinus carpio）脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（Adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP）基因,同时利用荧光定量PCR技术分别检测该基因在鲤不同组织和不同发育阶段的表达差异,获得其组织和时序表达谱,并将基因表达水平与肌内脂肪质量分数进行关联分析。结果获得鲤A-FABP基因开放阅读框（ORF）序列405bp,编码134个氨基酸,与多鳞白甲鱼、斑马鱼、大西洋鲑和青鳉等的氨基酸同源性关系较近（氨基酸相似性为70%-91%）,与人、猪、田鼠和牦牛等哺乳动物的氨基酸同源性关系较远（氨基酸相似性为51%-58%）;组织表达谱分析结果显示,A-FABP基因可在鲤的心脏、肌肉、脂肪、肝脏、脑、脾脏、肾脏和鳃中表达,并且在脂肪组织的表达量显著高于其他组织（P〈0.05）。发育表达分析结果显示,较小体质量试验鱼（50g）的A-FABP基因表达水平显著高于较大体质量试验鱼（120-130g和500g）（P〈0.05）,并且其表达与背最长肌的肌内脂肪质量分数呈显著负相关。

猪A-FABP基因5'调控区多态性及与肉质性状的相关分析

以松辽黑猪和军牧1号白猪为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测A-FABP基因5'-调控区的多态性,并将不同基因型与肉质性状进行相关分析。结果表明:在5'-调控区的1 246～1 530 bp之间发现多态性位点,有AA、AB和BB 3种基因型;测序结果表明,在1 321 bp处存在C→A的碱基突变;该位点的多态性对松辽黑猪和军牧1号白猪的大理石纹均有显著影响(P<0.05);BB型显著高于AA型或AB型,AA型和AB型之间差异不显著;对IMF含量均有极显著影响(P<0.01);BB型或AB型极显著高于AA型,BB型和AB型之间差异不显著。由此推断,A-FABP基因可能是影响猪肉质性状的一个主效基因或是一个与影响肉质性状的QTL连锁的基因。