利用A-PAGE研究谷子籽粒蛋白质多态性

研究谷子贮藏蛋白多态性对谷子品种选育和鉴定评价具有重要的意义。本文利用A-PAGE方法对来自不同生态区的24份谷子品种籽粒的水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白和醇溶蛋白的多态性进行了研究。结果发现,不同谷子品种之间籽粒水溶蛋白、酸溶蛋白谱带相似,基本没有差异;每个谷子品种的盐溶蛋白谱带有20多条,仅有4个品种出现多态性谱带,多态性也较低。说明谷子品种水溶蛋白、盐溶蛋白和酸溶蛋白A-PAGE谱带不适用于谷子鉴定研究。谷子醇溶蛋白谱带存在一定的异质性,每个品种有7~10条醇溶蛋白谱带,其中5条为公共条带,2~5条为多态性谱带,醇溶蛋白A-PAGE谱带可以作为谷子品种鉴定评价的依据。结果说明,和玉米、小麦等禾谷类作物相比,不同生态区谷子栽培品种蛋白质变异较小,遗传背景变化较小,因此需要不断丰富谷子品种的遗传基础,为谷子品种选育提供更加丰富的材料。

应用A-PAGE电泳方法鉴定豇豆品种

分别用3种提取液提取种子醇溶蛋白,利用改进的ISTA小麦和大麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)方法对豇豆不同品种种子进行了鉴定。结果表明,以20%二氯乙醇+1%2-巯基乙醇+18%的尿素为提取液,且加样量为10μl时,电泳图谱条带清晰,可以对豇豆品种进行有效地鉴定。利用超声波处理样品可以缩短样品提取时间并得到同样的提取效果。

小麦醇溶蛋白A-PAGE电泳鉴定技术的分析

为了进一步对小麦醇溶蛋白A-PAGE电泳的鉴定方法进行标准化,比较了凝胶浓度、缓冲体系及其pH值对电泳分辨率的影响,并初步筛选出了适合作为醇溶蛋白电泳标准样品的国内小麦品种。结果表明,丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺2个单体的交联百分浓度(C)为4.0%,总百分浓度(T)为6%,缓冲体系为甲酸-甘氨酸(pH3.0)混合体系的A-PAGE电泳效果较好;通过国内40个小麦品种与加拿大硬红春麦Marquis的R24、R50、R79标准条带相比较,确定荔丰3号可以作为国内小麦醇溶蛋白电泳的标准样品。

中国部分冬、春小麦品种(系)1BL/1RS易位系的A-PAGE检测

为了在春小麦品质育种中合理利用种质资源,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)对来自中国部分冬、春麦区的106份小麦品种和132份品系进行1BL/1RS易位系检测。结果表明,供试材料中共有63份为1BL/1RS易位系,频率为26.5%。其中106份品种中30份为1BL/1RS易位系,占供试品种的28.3%,且不同麦区之间1BL/1RS易位品种的频率不同。东北春麦区未发现1BL/1RS品种;西北春麦区和新疆冬春麦区易位系频率较高,均为50%;北部春麦区和青藏高原冬春麦区易位系频率较低,分别为16%和25%;冬麦区1BL/1RS易位系频率也较高(44%)。132份品系中,33份品系为1BL/1RS易位系,占供试品系的25%。

麦醇溶蛋白A-PAGE方法的优化和改进

以大麦、小麦品种等为材料 ,在 ISTA的标准电泳程序基础上分别进行浓度为 10 % ,12 % ,14% ,16 % ,18%和 2 0 %的酸性聚丙烯酰胺 ( A- PAGE)均一胶电泳来分离种子的麦醇溶蛋白 ,并与 10 %～ 2 0 %的线性梯度A- PAGE分离效果进行比较 .经优化和改进 ,结果表明 :18%的 A- PAGE方法效果最佳 ,既具有 ISTA推荐的A- PAGE方法制胶简便、电泳快速、重复性好的优点 ,又具有线性梯度 A- PAGE方法分辨率高的特点 ,尤其是在小分子量的快带区 ,电泳成带明显 ,达到梯度胶的分离效果 .在供试的大麦、小麦品种中 ,电泳图谱总条带数比 ISTA推荐的 10 %均一胶所得电泳图谱条带数分别增加 1～ 8条和 2～ 7条 .该方法既适用于大麦、也适用于小麦醇溶蛋白的分离 .并对 18%的 A-

高粱属A-PAGE图谱的建立及在种子鉴定中的应用

以高粱、苏丹草等5种高粱属植物的种子为材料,利用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)检测其醇溶蛋白.同时研究了丙酮处理、样品上样量和凝胶浓度对电泳的影响.结果表明:样品经丙酮处理后,在上样量为32μg、凝胶质量分数为15%时电泳可以得到清晰的A-PAGE图谱,据此可以鉴定5种高粱属植物.

谷子盐溶蛋白A-PAGE电泳方法的探索

以10个谷子品种为材料，利用A-PAGE的方法，探索了谷子盐溶蛋白分离的适宜实验条件。通过改变H2O2用量、胶浓度、交联度、电极液pH值、进样量及有无浓缩胶等因素，获得了不同盐溶蛋白酸性电泳图谱，经综合分析，提出了分离谷子盐溶蛋白的适宜A-PAGE电泳体系。具体指标为：1 ml胶液中用1μl 3%H2O2，胶浓度13%，交联度4.0%，电极液pH值3.7，进样量控制在20-30μl之间。在有浓缩胶的条件下，盐溶蛋白分离效果好，电泳图谱清晰，分辨率高。

适用于小麦品质育种的一种A-PAGE方法

为育种需要大批量地分析5+10亚基龙麦19中对小麦品质有较大影响的醇溶蛋白块品系,利用双板夹芯式垂直槽,凝胶面积为182 mm(宽)×95 mm(高),分离胶浓度为6%,以甲酸为缓冲体系的不连续的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)来鉴定该醇溶蛋白块。结果表明:该系统可以较好地鉴定该醇溶蛋白块,具有简便、经济、高效、重复性好等特点,是适合于小麦育种过程中快速大量鉴定需要的一种A-PAGE电泳方法。

克旱9号和新克旱9号小麦品种间SDS-PAGE和A-PAGE差异的研究

利用SDS-PAGE和A-PAGE分析了小麦品种克旱9号和新克旱9号的电泳图谱,指出了这两个外形极为相似的姊妹系的特征谱带。讨论了中间类型产生的原因。

可口革囊星虫体腔液白细胞抗菌物质的活性及理化特性

采用离心法分离可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)体腔液白细胞,经乙酸透析法抽提,以琼脂径向扩散对抽提物质的抗菌活性进行测定,用扫描电镜观察等方法对可口革囊星虫白细胞抗菌活性物质的抗菌机理进行分析,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)技术对体腔液抗菌物质进行初步分离。结果表明:可口革囊星虫体腔液白细胞中具有广谱抗菌活性物质,对大部分革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌具有广谱高效抑菌活性,并且该物质的抗菌活性对高温具有较强耐受性;酶活性检测发现抗菌活性物质具有一定的蛋白酶但不具有溶血特性;扫描电子显微镜观察发现经过抗菌物质处理过的细菌和酵母的细胞壁粗糙,有些细菌表面出现孔洞;经A-PAGE电泳分离及琼脂径向扩散结果显示,可口革囊星虫体腔液白细胞抽提物中至少存在两种不同的抗菌活性成分,是一种抗菌活性成分较复杂的混合物。研究表明,可口革囊星虫体腔液中存在广谱且耐高温的抗菌活性物质,该物质具有一定的应用前景。

洛旱和洛麦系列小麦中主要储藏蛋白研究

利用SDS-PAGE技术分别对15个洛旱系列以及11个洛麦系列小麦品种的HMW-GS组成进行鉴定.结果表明,HMW-GS共出现了10种亚基组合,其中洛旱系列小麦育种材料的HMW-GS平均得分为6.9,洛麦系列小麦育种材料的HMW-GS平均得分为7.9,26个小麦品种的平均得分为7.3.利用A-PAGE技术分别对15个洛旱系列以及11个洛麦系列小麦品种的醇溶蛋白和1BL/1RS易位系及其分布进行分析.结果表明,醇溶蛋白的多样性较高,26个小麦品种易位系频率为50%,其中洛旱系列易位系频率为46.7%,洛麦系列易位系频率为54.5%.因此洛阳农科院选育的洛旱和洛麦系列小麦遗传多样性较高,1BL/1RS易位系占比较高,洛麦系列小麦品质较好.

中国北方冬麦区主栽品种醇溶蛋白组成的遗传演变分析

用改良的 p H3.2 A- PAGE技术分析了我国北方冬麦区建国后不同时期的 5 1个主栽品种和 2 1个骨干亲本的醇溶蛋白组成及其遗传演化规律。结果表明 ,供试主栽品种具有丰富的醇溶蛋白变异类型 ,是今后小麦育种的重要物质基础。本实验材料共分离出 72种醇溶蛋白组分 ,供试主栽品种含有其全部组分 ,其单品种谱带数目在 2 1～ 4 1之间 ,品种间各类蛋白组分变异系数在 10 .5 2 %～ 4 1.35 %之间 ,ω、γ、β和 α区分别分离出 30 ,15 ,16,11条醇溶蛋白谱带 ,表明 Gli- 1位点具有更广泛的等位变异 ;不同时期主栽品种的谱带总数呈逐代增加的趋势 ,但表现为 195 0′s～ 1960′s和 1980′s～ 1990′s两个较大的跨度。谱带总体水平的提高 ,弱带和ω区的谱带增加贡献最大 ,谱带染色强度权重值 (WBD)相对变化较小。各年代主体品种逐步以高谱带水平的品种替代低谱带水平的品种 ,从 195 0′s以 型(BN <2 5 )品种占主导地位 ,逐步演化到 1990′s以 型 (BN≥ 35 )品种占主导地位 ;单谱带分析发现 ,对产量性状有利的谱带在品种演变中一般呈增的趋势 ,而对加工品质性状有利的谱带在品种演变中一般呈减的趋势 ,或出现频率很低 ,说明表型选择对醇溶蛋白演变起了相对重要的作用 ,这也解释了我国当前多数推广品种品质欠佳的部?

油用型红花(Carthamus tinctoris L.)种子醇溶蛋白遗传多样性分析

利用A-PAGE（Acid-polyacrylamide gel electrophoresis）技术对来源于不同国家的79份油用型红花材料醇溶蛋白位点进行检测。结果表明，油用型红花醇溶蛋白位点存在丰富的变异类型，共分离出15条迁移率不同的谱带，每份材料具有3—12条不等，平均8．5条。材料间平均遗传相似系数（GS）为0．5303，变幅为0．1333—1．000，且各洲间遗传多样性大于洲内遗传多样性。在GS值为0．512的水平上，供试材料聚为六大类，聚类结果表明，红花醇溶蛋白图谱类型与其地理分布有一定的相关，但不显著。

青藏高原近缘野生大麦醇溶蛋白遗传多样性分析

利用A PAGE(Acid polyacrylamidegelelectrophoresis)法对随机选取来源于中国西藏及青海省36个不同行政县的105份近缘野生大麦材料进行醇溶蛋白检测。结果表明,供试材料分离出36条相对迁移率不同的谱带,每份材料可电泳出5～24条,平均14条,未发现任何1条带为所有材料共有,即醇溶蛋白带纹的多态性达到100%。说明青藏高原近缘野生大麦具有非常丰富的醇溶蛋白等位变异。聚类分析发现,材料的遗传相似系数(GS)变异范围为0 182～0 966,平均值为0 580。在GS值为0 580的水平上供试材料可聚为7个类群,某些具有相同或相似农艺性状和地理来源的材料聚成一类或亚类,即醇溶蛋白图谱类型与材料的农艺性状和生态地理环境具有一定的相关性。

中国北方冬麦区主栽品种醇溶蛋白指纹图谱数据库的建立

结合CAWGES软件 ,用改良的pH3.2A PAGE技术绘制并构建了我国北方冬麦区建国后不同时期的主栽品种及其部分骨干亲本共 6 8个品种的标准麦醇溶蛋白指纹图谱及其数据库。并利用数据库在图谱分析、品种鉴定及血缘关系研究等方面进行了应用探讨 ,为建立小麦核心种质及品种鉴别提供了有效手段。

中药桑寄生凝集素的分离及体外抗肿瘤活性的研究

采用硫酸铵分级沉淀和酸化的Sepharose-4B亲和层析分离得到桑寄生凝集素;通过A-PAGE和SDS-PAGE电泳分析,确定所得凝集素组分和亚基情况;通过MTT法对所得到的凝集素进行体外抗肿瘤活性研究。研究结果表明,桑寄生凝集素包含两种组分,共含有四个亚基,亚基分子量分别为36.8 kDa、33.4 kDa,31.3 kDa和29.3 kDa;凝集素具有抗肿瘤效果,对肝癌BEL-7402细胞和胃癌MGC-823细胞的IC50分别为24.2μg/mL和20.9μg/mL。

小麦谷蛋白亚基的凝胶电泳分离及其品种鉴定

小麦胚乳贮藏蛋白在去除醇溶蛋白后，再提取高分子量（ＨＭＷ）和低分子量（ＬＭＷ）谷蛋白亚基，然后采用酸性（ｐＨ３．１）聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ａ－ＰＡＧＥ）方法进行分离。结果表明，在６００Ｖ电压下（缓冲液温度不超过２８℃），一般可在２～３ｈ内完成电泳，并可获得分辨度较高的分离图谱，在电泳谱上可发现两个明显的ＨＭＷ和ＬＭＷ谷蛋白亚基区域。通过与标准品种和常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法比较，可对不同品种ＨＭＷ谷蛋白亚基组成进行快速鉴定。一些重要小麦品种的分析结果显示，各品种ＬＭＷ谷蛋白亚基组成具有特异性，而且在品种间存在较大的变异度，根据ＨＭＷ和ＬＭＷ谷蛋白亚基Ａ－ＰＡＧＥ图谱很容易区分不同品种或基因型。因此。

利用两种谷蛋白电泳体系分析杂交油菜品种间差异

以8个杂交油菜品种(系)种子为试材,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酸性-聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)体系,分析杂交油菜种子谷蛋白电泳图谱的差异。结果表明,SDS-PAGE谷蛋白电泳图谱多态性较强,图谱清晰度较高,能有效鉴别杂交油菜品种。

小麦1BL/1RS易位新品系的鉴定与评价

应用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A PAGE)技术,对利用1BL/1RS易位材料异源2号作为亲本创制的58个新品系进行了检测与分析。根据小麦—黑麦1BL/1RS标记位点Gld1B3的有无,鉴定出49个品系为易位系,只有9个品系为非易位系。对新品系的株高、有效穗数、小穗数、穗粒数、千粒重及穗粒重等6个性状进行了考察分析,结果表明部分易位系表现出一个或多个优良的性状,可供作为亲本材料在育种中进一步利用。少数易位系综合性状表现优异,可望进一步直接培育成新品种。对易位系性状间相关分析表明,小穗数与有效穗数、穗粒重与穗粒数和千粒重呈极显著正偏相关,千粒重与穗粒数、穗粒重与有效穗数呈显著或极显著负偏相关,其余性状间偏相关均不显著。经差异显著性检验表明,易位系与非易位系之间除小穗数外,其余考察性状表现均无显著差异。