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Control Efficacy of Botanical Pesticides Against Apolygus lucorum(Meyer-Dür.) and Erythroneura apicalis(Nawa) for Grape
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作者 张珣 周莹莹 +9 位作者 李燕 付学池 刘钰燕 陈展 陈建 赵荣华 刘启山 张怡 高灵旺 王琦 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2015年第5期958-961,共4页
Apolygus lucorum(Meyer-Dür.) and Erythroneura apicalis(Nawa) are important pests that affect the quality and the yield of grapevine and cause huge economic losses. This paper focuses on the selection of effec... Apolygus lucorum(Meyer-Dür.) and Erythroneura apicalis(Nawa) are important pests that affect the quality and the yield of grapevine and cause huge economic losses. This paper focuses on the selection of effective botanical pesticides to control A. lucorum and E. apicalis. This experiment explores the effect of several botanical pesticides for A. lucorum and E. apicalis, including the 0.5% veratrine, the0.6% Oxygen·Lactone agent, the 5% natural pyrethrin, the composite neem pesticide, the rotenone and the composite nicotine. The 0.5% veratrine shows a stable control efficacy, which is higher than 60% in Chengdu, while the composite nicotine shows the highest efficacy against A. lucorum, which is above 70%. In Yinchuan,the 0.5% veratrine shows the highest efficacy, against the first generation adults and the second generation larvae of E. apicalis, while the 5% natural pyrethrin shows 100% control efficacy against E. apicalis in Nanjiang. The 0.5% veratrine and the composite neem could be used as effective pesticides to control A. lucorum and the 5% natural pyrethrin can be used to control E. apicalis. They could be widely used in the production of pollution-free grapes. 展开更多
关键词 GRaPE apolygus lucorum (Meyer-Dur.) Erythroneura apicalis (Nawa Botanical pesticides Control efficacy
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Biosynthesis of artemisinic acid in engineered Saccharomyces cerevisiae and its attractiveness to the mirid bug Apolygus lucorum 被引量:2
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作者 TENG Dong LIU Dan-feng +4 位作者 Khashaveh ADEL SUN Pei-yao GENG Ting ZHANG Da-wei ZHANG Yong-jun 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第10期2984-2994,共11页
Artemisia annua is an important preferred host of the mirid bug Apolygus lucorum in autumn.Volatiles emitted from A.annua attract A.Iucorum.Volatile artemisinic acid of A.annua is a precursor of artemisinin that has b... Artemisia annua is an important preferred host of the mirid bug Apolygus lucorum in autumn.Volatiles emitted from A.annua attract A.Iucorum.Volatile artemisinic acid of A.annua is a precursor of artemisinin that has been widely investigated in the Chinese herbal medicine field.However,little is known at this point about the biological roles of artemisinic acid in regulating the behavioral trends of A.lucorum.In this study,we collected volatiles from A.annua at the seedling stage by using headspace solid phase microextraction(HS-SPME).Gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS) analysis showed that approximately 11.03±6.00 and 238.25±121.67 ng hartemisinic acid were detected in volatile samples and milled samples,respectively.Subsequently,a key gene for artemisinic acid synthesis,the cytochrome P450 gene cyp71 av1,was expressed in engineered Saccharomyces cerevisiae to catalyze the production of artemisinic acid.After the addition of exogenous artemisinic alcohol or artemisinic aldehyde,artemisinic acid was identified as the product of the expressed gene.In electroantennogram(EAG) recordings,3-day-old adult A.lucorum showed significant electrophysiological responses to artemisinic alcohol,artemisinic aldehyde and artemisinic acid.Furthermore,3-day-old female bugs were significantly attracted by artemisinic acid and artemisinic alcohol at a concentration of 10 mmol L,whereas 3-day-old male bugs were attracted significantly by 10 mmol Lartemisinic acid and artemisinic aldehyde.We propose that artemisinic acid and its precursors could be used as potential attractant components for the design of novel integrated pest management strategies to control A.lucorum. 展开更多
关键词 artemisinic acid CYP71aV1 BIOSYNTHESIS apolygus lucorum electrophysiological responses behavioral trends
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Dynamics and diversity of symbiotic bacteria in Apolygus lucorum at different developmental stages 被引量:1
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作者 XUE Hui ZHU Xiangzhen +7 位作者 WANG Li ZHANG Kaixin LI Dongyang JI Jichao NIU Lin GAO Xueke LUO Junyu CUI Jinjie 《Journal of Cotton Research》 CAS 2023年第1期37-47,共11页
Background Apolygus lucorum is a worldwide omnivorous pest damaging a range of crops and causing great economic losses.Symbiotic bacteria living in insects play a key role in the nutrition,physiology,and behavior of h... Background Apolygus lucorum is a worldwide omnivorous pest damaging a range of crops and causing great economic losses.Symbiotic bacteria living in insects play a key role in the nutrition,physiology,and behavior of hosts.Here,we present an experiment using Illumina HiSeq sequencing targeting the V3–V4 regions of bacteria’s 16S rRNA throughout the entire life cycle of A.lucorum.Results The first and second instar nymphs have the largest alpha diversity compared with other life stages of the insect.Bacterial phyla Proteobacteria(72.29%),Firmicutes(15.24%),Actinobacteria(7.76%)exhibit the largest relative abundance in all developmental stages.Erwinia(23.97%)and Lactococcus(10.62%)are the two genera with the high-est relative abundance.The relative abundance of Erwinia in the nymph stage is significantly greater than the adult stage,and the relative abundance of Lactococcus in 6-day-old and 9-day-old adult females is higher compared with adult males.Conclusions These results reveal that microbial community composition and relative abundance shift dynamically at different life stages,implying that different bacterial phyla and genera may have specific roles in specific life stages such as metabolism,nutrition absorption,detoxification,and reproduction.This study reveals for the first time the community composition and ecological dynamics of symbiotic bacteria throughout the life stages of A.lucorum,and thus may provide insight to new strategies for pest control. 展开更多
关键词 Symbiotic bacteria apolygus lucorum Life cycle Pest control Community composition Relative abundance Community richness
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Suppression Subtractive Hybridization Reveals Different Responses of Two Varieties of Gossypium arboreum L. Under Apolygus lucorum Stress
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作者 ZHANG Shuai LI Jing +3 位作者 Lü Li-min WANG Chun-yi LUO Jun-yu CUI Jin-jie 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期1250-1257,共8页
Plants reshape their transcriptomes, proteomes and metabolomes in response to insect damage. In this study, we used suppression subtractive hybridization to investigate the transcriptomes of two cotton varieties (CCR... Plants reshape their transcriptomes, proteomes and metabolomes in response to insect damage. In this study, we used suppression subtractive hybridization to investigate the transcriptomes of two cotton varieties (CCRI41 and CCRI23) under Apolygus lucorum damage. From the CCRI23 libraries we obtained 92 transcripts and from the CCRI41 libraries we obtained 96 transcripts. 26 and 63 of the transcripts from CCRI23 and CCRI41, respectively, had known functions. Using reverse transcription PCR, we detected expression proifle of genes with known functions. Ultimately, we identiifed eight signiifcantly regulated genes, including one downregulated and four upregulated genes from the CCRI41 libraries, and one downregulated and two upregulated genes from the CCRI23 libraries. Only the gene encoding the polyphenol oxidase (PPO) is involved in plant defense against insect herbivores, and the others are related to improving tolerance to insect damage. Quantitative real-time PCR was used to study changes in expression levels during A. lucorum damage in CCRI23 and CCRI41. Signiifcantly regulated genes from CCRI23 showed a response in CCRI23 but not response in CCRI41. Similarly, signiifcantly regulated genes from CCRI41 showed a response in CCRI41 but not response in CCRI23. The results showed that, among transcriptomes of cotton varieties, there are different responses to A. lucorum damage. 展开更多
关键词 suppression subtractive hybridization apolygus lucorum defense against insect herbivores
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Occurrence and Pollution-free Control of Apolygus lucorum in Winter Jujube
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作者 Linmao LI Xingyuan MEN +5 位作者 Baohua YE Yi YU Ansheng ZHANG Lili LI Sicong ZHANG Xianhong ZHOU 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2012年第3期21-23,27,共4页
In recent years, Apolygus htcorum has become the main pest of winter jujube. It sucks juice of young parts of winter jujube and causes falling of buds and flowers, leaf perforations, deformities and fall- off of fruit... In recent years, Apolygus htcorum has become the main pest of winter jujube. It sucks juice of young parts of winter jujube and causes falling of buds and flowers, leaf perforations, deformities and fall- off of fruits, leading to serious economic loss. Considering the occurrence characteristics and control problems, the distribution, occurrence regularity, damage characteristics and outbreak reasons of A. lucorum are overviewed and analyzed in this paper, and the pollution-free control measures are also put forward. 展开更多
关键词 Winter jujube apolygus lucorum OCCURRENCE Pollution-free control
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Effect of Climate Change on Cotton Lugus lucorum Occurrence Degree
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作者 商兆堂 何浪 +2 位作者 刘素成 陆志刚 程琳 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第4期784-788,887,共6页
[Objective] The aim was to analyze effect of climate change on occurrence degree of cotton Lugus lucorum in coastal areas of Jiangsu Province, in order to provide authentic references for better prevention. [Method] S... [Objective] The aim was to analyze effect of climate change on occurrence degree of cotton Lugus lucorum in coastal areas of Jiangsu Province, in order to provide authentic references for better prevention. [Method] Statistical analysis was conducted on Information about occurrence degree of cotton Lugus lucorum in Binhai County in Jiangsu Province from 1985 to 2007 under guidance of Integral regression method. [Result] Because of climate change, cotton Lugus lucorum occurrence de- grees differed in different generations and growth stages in Binhai County. Tempera- ture and humidity constituted the main climate factors. In general, climate change hindered occurrence degree from increasing. We could make use of the period when occurrence degree of cotton Lugus lucorum is prone to significant increase and choose some periods, such as early April, late June and middle August, to improve prevention effect. In addition, attention should be paid to comprehensive measures, such as adjustment of industrial structure, which will reduce pesticide and minimize cotton Lugus lucorum damage and adverse impact from prevention measures. [Conclusion] The results provided authentic references for cotton Lugus lucorum preven- tion in Jiangsu coastal areas. 展开更多
关键词 Climate change cotton Lugus lucorum Occurrence degree Statistical analysis
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金龟子绿僵菌CQMa421对棉蚜、绿盲蝽的田间防效
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作者 卓富彦 周若男 +5 位作者 蒙玲玲 李白成 张莉 郭荣 夏玉先 彭国雄 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期350-354,360,共6页
棉花是我国重要的经济作物,虫害严重制约了棉花生产,造成棉农的经济损失。目前,化学杀虫剂仍是防治棉花虫害的主要手段,长期使用化学杀虫剂导致棉蚜Aphis gossypii、绿盲蝽Apolygus lucorum产生抗药性,降低防治效果。本研究使用80亿孢子... 棉花是我国重要的经济作物,虫害严重制约了棉花生产,造成棉农的经济损失。目前,化学杀虫剂仍是防治棉花虫害的主要手段,长期使用化学杀虫剂导致棉蚜Aphis gossypii、绿盲蝽Apolygus lucorum产生抗药性,降低防治效果。本研究使用80亿孢子/mL金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂防治棉蚜、绿盲蝽,室内生测结果表明,金龟子绿僵菌CQMa421能有效侵染棉蚜和绿盲蝽,随着浓度的升高,对棉蚜和绿盲蝽的毒力增强。田间试验结果表明,该药剂能有效控制棉花主要害虫棉蚜和绿盲蝽。采用1200 mL/hm 2用量,药后14 d对棉蚜的防效达94.42%;采用1350 mL/hm 2用量,药后14 d对绿盲蝽的防效分别达到87.25%(新疆),91.62%(湖北)。 展开更多
关键词 棉花 绿僵菌 棉蚜 绿盲蝽
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绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP31配体筛选及EAG测定
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作者 武娟 张瑶瑶 +5 位作者 李仔博 刘靖涛 安兴奎 刘顺 李瑞军 张永军 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期319-326,共8页
绿盲蝽Apolyguslucorum是重要的农业害虫,了解其化学感受机制对该虫的绿色防控具有重要指导意义。气味结合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs)在昆虫化学感受过程中发挥关键作用。为深入探究绿盲蝽OBP家族成员AlucOBP31的生物学功能,... 绿盲蝽Apolyguslucorum是重要的农业害虫,了解其化学感受机制对该虫的绿色防控具有重要指导意义。气味结合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs)在昆虫化学感受过程中发挥关键作用。为深入探究绿盲蝽OBP家族成员AlucOBP31的生物学功能,本研究采用荧光竞争结合试验和触角电位技术(Electroantennogram,EAG),系统分析了AlucOBP31对候选配体化合物的结合特性及其电生理活性。荧光竞争结合试验结果表明,重组Aluc OBP31蛋白能够与16种配体化合物发生不同程度的结合,其中与植物挥发物β-紫罗兰酮的结合能力最强,而与十二醛和顺-丁酸-3-己烯酯的结合能力相对较弱。值得注意的,AlucOBP31能与绿盲蝽性信息素组分4-氧代-反-2-己烯醛结合,提示其可能参与绿盲蝽的性信息素识别过程。此外,AlucOBP31还对槲皮素、芦丁水合物、棉酚和单宁酸等4种非挥发性苦味物质具有强结合能力,暗示其可能在绿盲蝽的味觉识别中发挥一定作用。EAG试验进一步验证了AlucOBP31配体的电生理活性。绿盲蝽雌、雄成虫的触角对12种AlucOBP31挥发性配体均产生了明显的EAG反应,其中对顺-丁酸-3-己烯酯和4-氧代-反-2-己烯醛的EAG响应值显著高于其它配体,并且雄性触角对这些配体的EAG反应普遍强于雌性,提示AlucOBP31介导的化学感受过程可能存在性别差异。综上所述,本研究系统分析了绿盲蝽AlucOBP31的结合特性及相应配体的电生理活性,发现该蛋白能够结合寄主植物挥发物、绿盲蝽性信息素组分以及多种非挥发性苦味物质,表明AlucOBP31可能在绿盲蝽的嗅觉和味觉识别过程中发挥多重生物学功能。这一发现为进一步探究AlucOBP31与其配体在绿盲蝽寄主选择、交配等重要生命活动中的生物学意义提供了研究基础,加深了我们对绿盲蝽化学感受机制的认知,也为绿盲蝽的绿色防控提供了新的分子靶标。 展开更多
关键词 绿盲蝽 气味结合蛋白alucOBP31 配体结合 EaG 化学感受
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绿盲蝽对七种锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应 被引量:15
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作者 张俊宇 林克剑 +3 位作者 黄欣蒸 耿亭 魏洪义 张永军 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期135-141,共7页
研究绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)对锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应,为研发绿盲蝽引诱剂或驱避剂策略提供科学依据。田间采用动态顶空采样方法收集了7种锦葵科植物的挥发物,通过室内气相-质谱联用系统(GC-MS)进行物质... 研究绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)对锦葵科植物挥发物的EAG和趋向行为反应,为研发绿盲蝽引诱剂或驱避剂策略提供科学依据。田间采用动态顶空采样方法收集了7种锦葵科植物的挥发物,通过室内气相-质谱联用系统(GC-MS)进行物质鉴定及定量分析,最终测定了雌、雄绿盲蝽成虫对11种候选特征挥发物的触角电位(EAG)反应和嗅觉趋向选择行为。结果表明,7种锦葵科植物的挥发物种类和含量有较大差异,而且4种棉花品种之间的挥发物差异也很显著。棉花石远321的挥发物总量最大,其中4,8-二甲基-1,3,7-壬三烯(DMNT)含量最高,壬醛和罗勒烯其次。蜀葵的挥发物种类和含量均最少。11种候选特征挥发物均能够引起绿盲蝽雌、雄成虫EAG反应,且雄性成虫的反应值大都高于雌性成虫。其中,绿盲蝽雌、雄成虫触角对反-2-己烯酸丁酯EAG反应值最大,芳樟醇、乙酸叶醇酯、甲基庚烯酮及DMNT也能够激发绿盲蝽较大的EAG反应。在趋向行为检测中发现,DMNT及柠檬烯等对雄性成虫具有吸引作用。对雌性成虫有吸引作用的物质有γ-萜品烯、DMNT、月桂烯、α-石竹烯、罗勒烯及乙酸叶醇酯等,其中γ-萜品烯和乙酸叶醇酯对雌性成虫具有极显著吸引效果。锦葵科候选植物挥发物对绿盲蝽雌、雄虫具有不同EAG和趋向行为反应影响,候选气味化合物可以作为设计绿盲蝽引诱剂组分进行害虫防控田间实践。 展开更多
关键词 绿盲蝽 锦葵科植物 挥发物 EaG反应 趋向行为
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转CrylAC及CrylAC+CpTI基因对棉花上绿盲蝽2种消化酶活性及海藻糖含量的影响 被引量:9
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作者 谭永安 柏立新 +3 位作者 肖留斌 孙洋 赵洪霞 吴国强 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期394-400,共7页
以转基因棉国抗22,sGK321及其亲本棉泗棉3号、石远321为材料,研究了上述4种寄主上绿盲蝽淀粉酶、蛋白酶活性及海藻糖含量。结果表明:与亲本棉相比,2种转基因棉绿盲蝽若、成虫淀粉酶、蛋白酶活性和海藻糖含量均值较高,且若虫淀粉酶活性... 以转基因棉国抗22,sGK321及其亲本棉泗棉3号、石远321为材料,研究了上述4种寄主上绿盲蝽淀粉酶、蛋白酶活性及海藻糖含量。结果表明:与亲本棉相比,2种转基因棉绿盲蝽若、成虫淀粉酶、蛋白酶活性和海藻糖含量均值较高,且若虫淀粉酶活性、成虫海藻糖含量在转基因棉国抗22和其亲本棉泗棉3号之间差异显著;同一品种棉花上成虫的淀粉酶、蛋白酶活性和海藻糖含量均高于若虫,并差异极显著。绿盲蝽若、成虫淀粉酶、蛋白酶活性及海藻糖含量在转基因棉及其亲本棉上的频率分布高峰基本一致;但与亲本棉花相比,2种转基因棉所测指标在低区间段分布较少,在高区间段分布较多。 展开更多
关键词 绿盲蝽 棉花 转基因 消化酶 海藻糖
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绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4的克隆及取食不同寄主植物后的表达谱分析 被引量:9
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作者 孙洋 柏立新 +3 位作者 张永军 肖留斌 谭永安 吴国强 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期641-650,共10页
胰蛋白酶类和胰凝乳蛋白酶类丝氨酸蛋白酶是盲蝽科昆虫消化系统内重要的消化酶。为了更好地了解丝氨酸类蛋白酶在绿盲蝽Apolygus lucorum消化系统中的作用,本研究首次克隆了绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4(GenBank登录号为JQ609682)。序... 胰蛋白酶类和胰凝乳蛋白酶类丝氨酸蛋白酶是盲蝽科昆虫消化系统内重要的消化酶。为了更好地了解丝氨酸类蛋白酶在绿盲蝽Apolygus lucorum消化系统中的作用,本研究首次克隆了绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4(GenBank登录号为JQ609682)。序列分析结果表明,该基因开放阅读框长999bp,编码332个氨基酸,预测分子量为36.84kDa,理论等电点为5.35,N末端疏水区包含有16个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有丝氨酸蛋白酶的典型特征,即氨基酸序列中具有组氨酸(His)、天门冬氨酸(Asp)以及丝氨酸(Ser)残基组成的酶活性催化中心三元件;该基因翻译后还具有明显的胰蛋白酶前体的特征,即此基因具有信号肽、激活肽以及胰蛋白酶N末端保守的起始氨基酸序列(IVGG)。利用荧光定量PCR技术对绿盲蝽雌、雄成虫取食不同寄主植物后AlSP4的表达谱进行分析,结果表明:相对于其他寄主植物,雌成虫取食Bt棉后AlSP4的表达量最高,并显著高于取食常规棉后的表达量(P<0.01)。雄成虫取食茼蒿后AlSP4的表达量最高;雄成虫取食Bt棉后,AlSP4的表达水平仅次于取食茼蒿后的表达量,也显著高于取食常规棉后的表达量(P<0.01)。由此可见,AlSP4是绿盲蝽取食Bt棉后的重要消化酶基因,对绿盲蝽适应Bt棉取食具有重要作用。 展开更多
关键词 绿盲蝽 丝氨酸蛋白酶 胰蛋白酶 表达谱分析 寄主植物
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绿盲蝽水溶性海藻糖酶ALTre-1基因原核表达、纯化与酶学特性 被引量:6
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作者 谭永安 肖留斌 +1 位作者 孙洋 柏立新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期3587-3593,共7页
【目的】在前期克隆了绿盲蝽水溶性海藻糖酶(ALTre-1)基因的基础上,以获得具有酶活性的重组蛋白,明确酶促反应的最佳pH值及最适温度,为绿盲蝽海藻糖酶分子调控机制及其抑制剂的应用研究奠定基础。【方法】将含有绿盲蝽ALTre-1基因的T载... 【目的】在前期克隆了绿盲蝽水溶性海藻糖酶(ALTre-1)基因的基础上,以获得具有酶活性的重组蛋白,明确酶促反应的最佳pH值及最适温度,为绿盲蝽海藻糖酶分子调控机制及其抑制剂的应用研究奠定基础。【方法】将含有绿盲蝽ALTre-1基因的T载体经Nde I和Not I双酶切,构建ALTre-1基因原核表达载体(pET28a-ALTre-1),表达载体经诱导表达和蛋白纯化,获得ALTre-1功能区纯化蛋白。在蛋白浓度为0.3 mg·mL-1的条件下,以海藻糖为底物,对纯化得到的重组Tre-1蛋白进行活性检测,确定其酶促反应的最佳pH值和最佳温度。【结果】ALTre-1基因在大肠杆菌中BL21中能够高效表达,纯化获得的重组蛋白在试验条件下有较高的海藻糖酶水解活性((184.83±13.39)nmol·μg-1·min-1)。重组ALTre-1蛋白活性最适pH值为7.0(酶活性为(202.04±13.76)nmol·μg-1·min-1),表明重组ALTre-1蛋白是1个在中性环境中具有最佳活性的海藻糖酶,同时重组ALTre-1蛋白酶活性最适温度为55℃(酶活性为(228.59±4.62)nmol·μg-1·min-1)。【结论】本研究克隆得到了ALTre-1全长基因,获得了具有海藻糖酶活的重组蛋白,该重组蛋白在pH 7.0、温度55℃条件下酶活性最高。 展开更多
关键词 绿盲蝽 水溶性海藻糖酶 原核表达 酶学特性
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绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性 被引量:6
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作者 谭永安 肖留斌 +1 位作者 柏立新 孙洋 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期396-402,共7页
以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.... 以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.1 mg·mL-1的条件下,对纯化得到的重组ALTre-2蛋白进行活性检测,确定了其酶促反应的最佳pH和最适温度。试验结果表明:ALTre-2基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够高效表达一个约60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及蛋白纯化获得了具海藻糖酶活力的重组蛋白;该重组ALTre-2蛋白在pH为7.0时活性最高,同时重组ALTre-2蛋白酶活性最适温度是50℃。研究结果为深入探讨绿盲蝽膜结合型海藻糖酶分子调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 绿盲蝽 膜结合型海藻糖酶 原核表达 酶学特性
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绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP8的结合特性分析 被引量:6
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作者 朱晓强 丁玉骁 +3 位作者 刘航玮 周延乐 张永军 郭予元 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期821-829,共9页
气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)是参与昆虫嗅觉感知过程的一类重要蛋白,其功能之一是结合运输外界气味分子通过淋巴液到达神经元树突。本文克隆了一个绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)气味结合蛋白Aluc OBP8(Gen B... 气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)是参与昆虫嗅觉感知过程的一类重要蛋白,其功能之一是结合运输外界气味分子通过淋巴液到达神经元树突。本文克隆了一个绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)气味结合蛋白Aluc OBP8(Gen Bank登录号JQ675725)并进行了原核重组表达。组织表达谱分析表明,Aluc OBP8基因主要在雌雄成虫触角表达。采用荧光竞争结合试验,研究了重组蛋白Aluc OBP8与7种性信息素类似物和33种植物挥发物的结合能力。结果显示,7种性信息素类似物均不能与Aluc OBP8有效结合,而植物挥发物中只有葎草烯(α-caryophyllene)和十二醛(dodecyl aldehyde)与Aluc OBP8表现出较强的结合,结合常数分别为8.74和9.99μmol/L。绿盲蝽雌雄成虫对这两种化合物的趋向结果表明,十二醛对绿盲蝽雄成虫具有显著的驱避作用。初步推断Aluc OBP8为普通气味结合蛋白并参与寄主普通挥发气味的识别过程。 展开更多
关键词 绿盲蝽 aluc OBP8 植物挥发物 竞争结合试验 趋向选择
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绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的鉴定及表达谱分析 被引量:5
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作者 孙洋 柏立新 +3 位作者 张永军 肖留斌 谭永安 盛洋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期991-998,共8页
从绿盲蝽成虫体内克隆了1个丝氨酸蛋白酶基因,命名为AlSP3(GenBank序列号JQ609681)。经序列分析,该基因开放阅读框长1 041 bp,编码346个氨基酸,预测分子量为3.872×104,理论等电点为9.35,N-末端疏水区包含有19个氨基酸组成的信号肽... 从绿盲蝽成虫体内克隆了1个丝氨酸蛋白酶基因,命名为AlSP3(GenBank序列号JQ609681)。经序列分析,该基因开放阅读框长1 041 bp,编码346个氨基酸,预测分子量为3.872×104,理论等电点为9.35,N-末端疏水区包含有19个氨基酸组成的信号肽。蛋白质特征分析结果表明,该基因翻译后的蛋白质具有丝氨酸蛋白酶的典型特征。利用荧光定量PCR技术对绿盲蝽取食不同寄主植物后AlSP3基因的表达谱进行分析,结果表明:相对于其他寄主植物,雌成虫取食转Bt基因棉花后AlSP3基因的表达量最高,比对照上升了11.62倍,并显著高于取食常规棉(P<0.01);雌成虫取食常规棉后,AlSP3基因的表达量上升了6.42倍,仅次于取食Bt棉和豇豆,并显著高于取食其他寄主植物(P<0.01)。雄成虫取食常规棉后,AlSP3基因的表达水平仅次于取食蚕豆,上升了9.37倍,并显著高于取食Bt棉(P<0.01)。由此可见,AlSP3基因是绿盲蝽成虫取食常规棉后的重要消化酶基因,并对雌成虫适应取食Bt棉具有重要作用。 展开更多
关键词 绿盲蝽 丝氨酸蛋白酶 表达谱分析 寄主 BT棉
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绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP7的表达及气味结合特性 被引量:13
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作者 纪萍 刘靖涛 +3 位作者 谷少华 朱晓强 张永军 郭予元 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期575-583,共9页
气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫嗅觉识别中起着重要的作用,尤其是在运输外界脂溶性气味分子通过嗅觉感器淋巴液到达嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)的过程中发挥关键作用。明确OBPs在昆虫同外界进行信息交流过... 气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫嗅觉识别中起着重要的作用,尤其是在运输外界脂溶性气味分子通过嗅觉感器淋巴液到达嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)的过程中发挥关键作用。明确OBPs在昆虫同外界进行信息交流过程中的作用有利于阐明昆虫嗅觉识别的机制,同时可为利用干扰昆虫嗅觉识别来进行害虫防治奠定理论基础。本研究克隆了一个绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)气味结合蛋白AlucOBP7基因(GenBank登录号:JQ675724),并进行了原核表达,以1-NPN为荧光探针采用荧光竞争结合实验研究了AlucOBP7蛋白和10种棉花挥发物及6种性信息素类似物的结合能力。结果表明:在10种棉花挥发物中,AlucOBP7能够和2-己酮及水杨酸甲酯有效结合,结合常数分别为55.13μmol/L和28.26μmol/L。在6种盲蝽性信息素类似物中,4-氧代-反-2-己烯醛和AlucOBP7具有较强的结合能力,结合常数为23.14μmol/L。丁酸乙酯、丁酸丁酯及己酸己酯也能够和AlucOBP7有效结合,但结合能力中等,结合常数分别为30.58,39.26和35.81μmol/L。初步推测,AlucOBP7可能是绿盲蝽性信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs),并在感受性信息素和植物挥发物的过程中发挥双重功能。 展开更多
关键词 绿盲蝽 气味结合蛋白 性信息素 原核表达 荧光竞争结合 结合常数
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绿盲蝽超气门蛋白ALUSP的克隆、原核表达及纯化 被引量:2
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作者 谭永安 肖留斌 +2 位作者 孙洋 赵静 柏立新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2162-2172,共11页
【目的】克隆绿盲蝽超气门蛋白基因(ALUSP),获得原核表达的重组蛋白,为ALUSP的功能研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽蜕皮及变态发育的机制提供理论依据。【方法】根据已知昆虫的USP基因序列设计简并引物,获得ALUSP的保守序列;再通过... 【目的】克隆绿盲蝽超气门蛋白基因(ALUSP),获得原核表达的重组蛋白,为ALUSP的功能研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽蜕皮及变态发育的机制提供理论依据。【方法】根据已知昆虫的USP基因序列设计简并引物,获得ALUSP的保守序列;再通过设计特异性引物,利用RACE方法,分别克隆ALUSP 5′及3′段序列,然后通过拼接获得ALUSP全长序列;应用生物信息学方法,对ALUSP基因序列特征及其所编码蛋白的特性进行分析,建立系统进化树;将含有ALUSP的T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建ALUSP原核表达载体pEGX6P1-ALUSP,将该表达载体分别在15、25、30和37℃条件下进行诱导表达,再通过GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析后获得ALUSP功能区纯化蛋白。【结果】ALUSP开放阅读框长1 005 bp,编码334个氨基酸,预测分子量56.63 kD,理论等电点8.42;序列特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有超气门蛋白的典型特征,由A/B域(249 bp)、C域(198 bp)、D域(69 bp)和E域(489 bp)组成,其中C域高度保守,包含2个锌脂结构并含有1个P-盒和1个D-盒,且含有由8个氨基酸构成的核定位信号,D域含有1个识别DNA元件的T-盒,E域含有1个由8个α螺旋和1个β折叠形成袋状结构;氨基酸比对结果表明,ALUSP的氨基酸序列与稻绿蝽USP序列一致性最高(57.82%),与其他昆虫的USP序列一致性较低,如膜翅目的 Melipona scutellaris(46.05%)、Scaptotrigona depilis(45.94%);系统进化树分析结果显示,半翅目与膜翅目、直翅目等昆虫的USP较为分化,位于不同分支,ALUSP与稻绿蝽USP进化关系最近,可能来源于共同的祖先。EcoR I和Xho I双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pEGX-6P-1载体上,命名为pEGX6P1-ALUSP;经37℃、1.0 mmol·L-1的IPTG诱导的pEGX6P1-ALUSP重组质粒可特异性表达1个约65 kD的蛋白,并且该重组ALUSP蛋白主要以包涵体形式存在;收集含有目的基因的菌株进行GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析,最后进行复性和纯化后在65 kD附近仅出现1条清晰的特异性条带,表明已得到纯化的靶蛋白。【结论】克隆了ALUSP全长,其具有昆虫超气门蛋白的典型特征,并获得了原核表达的重组蛋白。 展开更多
关键词 绿盲蝽 超气门蛋白 基因克隆 原核表达
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不同温度影响下绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的表达谱分析 被引量:3
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作者 盛洋 孙洋 +2 位作者 柏立新 肖留斌 谭永安 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期541-548,共8页
利用荧光定量PCR技术,系统分析了不同温度处理下绿盲蝽成、若虫丝氨酸蛋白酶基因A1SP3的表达谱。结果表明:在24℃下,若虫各虫龄AISP3表达量差异未达到显著水平fP〉0.05).而雌虫交配前期与雄虫交配后期的A1SP3表达量分别达l龄若虫... 利用荧光定量PCR技术,系统分析了不同温度处理下绿盲蝽成、若虫丝氨酸蛋白酶基因A1SP3的表达谱。结果表明:在24℃下,若虫各虫龄AISP3表达量差异未达到显著水平fP〉0.05).而雌虫交配前期与雄虫交配后期的A1SP3表达量分别达l龄若虫对照的19.71倍与7.16倍,显著高于其他时期。但在21~30℃内,4~5龄若虫AISP3的表达量随温度升高而上升,2~5龄若虫在30℃时AISP3的表达量均达最高;不同温度处理下,刚羽化、交配前的雌、雄成虫的A1SP3的表达量较24℃对照均显著升高(P〈0.01);而交配后的雌、雄成虫的表达量却是18℃下显著高于其他温度处理。此外,极端温度4℃与40℃诱导后,雌、雄成虫AISP3的表达量均显著高于24℃。绿盲蝽AISP3的表达谱综合分析表明,外在环境温度与绿盲蝽虫龄与性别因素均可显著影响绿盲蝽A1SP3的表达量(P〈0.01),并存在一定的互作效应。由此可见,AJSP3对于绿盲蝽雌成虫早期获取寄主营养具有重要作用,并且温度是影响AISP3表达的一个很重要的因素。 展开更多
关键词 绿盲蝽 丝氨酸蛋白酶 表达谱分析 温度
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取食不同寄主植物对绿盲蝽热激蛋白AlHSP90表达的影响 被引量:2
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作者 孙洋 盛洋 +3 位作者 柏立新 赵静 肖留斌 谭永安 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期153-160,共8页
绿盲蝽热激蛋白90基因AlHSP90是绿盲蝽体内重要的抗逆基因,参与绿盲蝽耐受高温、杀虫剂等胁迫反应。为了明晰绿盲蝽取食不同寄主植物后其体内抗逆基因的表达特征,本试验通过荧光定量PCR和Western杂交技术,重点分析AlHSP90基因及其蛋白... 绿盲蝽热激蛋白90基因AlHSP90是绿盲蝽体内重要的抗逆基因,参与绿盲蝽耐受高温、杀虫剂等胁迫反应。为了明晰绿盲蝽取食不同寄主植物后其体内抗逆基因的表达特征,本试验通过荧光定量PCR和Western杂交技术,重点分析AlHSP90基因及其蛋白在绿盲蝽取食不同寄主植物后的表达谱。结果表明:绿盲蝽雌、雄成虫取食Bt棉、常规棉后,AlHSP90表达量显著高于取食其他寄主植物(P<0.01);与对照四季豆相比,取食茼蒿之后AlHSP90表达量无显著变化(P>0.05)。雌成虫取食Bt棉、常规棉后,AlHSP90表达量分别比对照上升了1.77、1.74倍;而雄成虫取食Bt棉、常规棉后,AlHSP90表达量则分别比对照上升了1.98、1.94倍。取食不同寄主植物之后,AlHSP90蛋白的表达谱结果与其基因的表达谱结果高度相似。绿盲蝽雌、雄成虫取食Bt棉、常规棉后,AlHSP90蛋白表达量显著高于取食其他寄主植物(P<0.01);而取食茼蒿之后,AlHSP90蛋白表达量无显著变化(P>0.05)。由此可见,AlHSP90基因是绿盲蝽适应棉花取食过程中重要的抗逆基因,并在绿盲蝽寄主转换过程中起到重要作用。 展开更多
关键词 绿盲蝽 热激蛋白90 表达谱分析 寄主 棉花 heat shock protein 90
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绿盲蝽AlEcR-A的单克隆抗体制备及在外源20E诱导下的应答 被引量:1
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作者 谭永安 肖留斌 +3 位作者 郝德君 赵静 孙洋 柏立新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期86-93,共8页
【目的】获得绿盲蝽(Apolygus lucorum)蜕皮激素受体(A1EcR-A)原核表达的重组蛋白,制备单克隆抗体,分析绿盲蝽AlEcR-A在外源蜕皮激素(20E)诱导下mRNA及蛋白表达量的变化趋势,为进一步研究EcR的功能奠定前期基础,同时也为构建20E信号传... 【目的】获得绿盲蝽(Apolygus lucorum)蜕皮激素受体(A1EcR-A)原核表达的重组蛋白,制备单克隆抗体,分析绿盲蝽AlEcR-A在外源蜕皮激素(20E)诱导下mRNA及蛋白表达量的变化趋势,为进一步研究EcR的功能奠定前期基础,同时也为构建20E信号传导的网络图谱提供理论依据。【方法】在前期获得绿盲蝽AlEcR-A的基础上,将含有其基因的T载体经NdeⅠ和XbaⅠ双酶切,构建AlEcR-A原核表达载体(pCzn1-AlEcR-A),将该表达载体经IPTG诱导表达和蛋白Ni-IDA亲和纯化,以获得AlEcR-A基因功能区的纯化蛋白。进一步用其进行免疫反应,取小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,采用间接ELISA及Western blot筛选验证是否为目的抗体,通过抗体纯化,Western blot检测该抗体能否特异性结合AlEcR-A重组蛋白及绿盲蝽总蛋白,从而制备得到AlEcR-A蛋白单克隆抗体。最后利用RT-PCR及Western blot方法,进行20E微注射绿盲蝽2龄若虫,分析8 d内AlEcR-A的mRNA及蛋白含量的变化,明晰20E诱导下AlEcR-A的应答反应。【结果】经NdeⅠ和XbaⅠ双酶切后原核表达载体pCzn1-AlEcR-A在大肠杆菌Arctic express中能高效表达一个约为55 kD的蛋白,且该重组蛋白经IPTG诱导后主要以包涵体的形式存在;经Ni-IDA亲和层析后,pCzn1-AlEcR-A重组蛋白的包涵体纯度仅在55 kD附近有一条明显的特异性条带,说明靶蛋白已得到纯化。进一步通过小鼠免疫、细胞融合及腹水制备,获得了1株能稳定分泌抗AlEcR-A蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为8H7;Western blot分析表明,该细胞株不仅能与绿盲蝽总蛋白结合,还可特异性与AlEcR-A重组蛋白反应,且条带大小一致,说明制备的AlEcR-A单克隆抗体准确、有效;RT-PCR及Western blot结果表明,与注射蒸馏水相比,20E微注射处理后的绿盲蝽AlEcR-A mRNA表达量及蛋白表达量均显著升高,且随着处理时间的延长,其增值幅度也逐渐增高。【结论】获得了一株高特异性的能稳定分泌AlEcR-A单克隆抗体的细胞株,20E有诱导AlEcR-A mRNA及蛋白表达的作用。 展开更多
关键词 绿盲蝽 蜕皮激素受体 20-羟基蜕皮酮 单克隆抗体 表达量
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