榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/(GSSG+GSH)比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果:不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长,呈时间-剂量依赖性效应,联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降,ROS浓度增加,GSH/(GSSG+GSH)比值降低,上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达,下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论:榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜,活化胞内氧化还原体系,诱导线粒体凋亡路径有关。

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂(cisplatin,DDP)合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123(rhodamine-123,Rh123)蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上Pgp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A5 4 9/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。

三草方提取物对肺腺癌A549细胞的作用

目的:研究三草方(夏枯草、白花蛇舌草、仙鹤草)的不同极性提取部位及其配伍后对人肺腺癌A549细胞株增殖活性的影响。方法:采用醇提取法和水提取法分别制备三草方的95%、60%、30%醇提部位、水提部位;以MTT法测定水煎液和各不同极性部位及其配伍后对A549细胞的增殖活性的影响。结果:在三草方60%醇提部位对A549细胞的IC50最低;60%和95%醇提部位配伍后有明显的协同抑瘤活性。结论:三草方的95%和60%醇提部位间的配伍具有良好的抗肺癌作用。

蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用

目的观察蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用及对血液白细胞数目的影响。方法MTT法检测不同浓度的LX01对肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制率;A549细胞接种BALB/C裸鼠,观察给药后肿瘤的生长情况,高、中、低剂量LX01对荷瘤小鼠的生存时间、瘤重及血液白细胞数目的影响。结果LX01对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,IC50为56.85mg/L,与阴性对照组比差异有显著性(P<0.01);LX01能剂量依赖性的抑制A549接种瘤的生长;LX01中、高剂量可明显延长A549荷瘤小鼠生存时间,高剂量组荷瘤瘤重明显减轻,与阳性对照药环磷酰胺相似,明显高于阴性对照组(P<0.01);与5-FU治疗组相比,LX01各剂量组对A549荷瘤小鼠血白细胞数目无降低作用。结论蚌肉提取物LX01能显著抑制肺癌细胞株A549接种BALB/c裸鼠后的生长,且对免疫系统无明显抑制作用。

用卤虫和A549癌细胞筛选内生真菌抗癌活性的对比分析

抗癌药物是药物筛选的热点之一,简便快捷的初筛模型是药物发现的重要手段.一些研究报告认为卤虫模型可以作为抗癌药物的初筛模型.为了验证这一方法,以MTT法(人癌细胞A549细胞株)和卤虫模型分别对85株鬼臼类植物内生真菌发酵液进行了测定.通过对比分析,发现人癌细胞模型和卤虫模型测定所得到的结果差异很大,两组数据之间没有相关性.用卤虫测定鬼臼类植物内生真菌得到的毒性实验结果是不能代替用人癌细胞测定所得到的结果.

半夏总生物碱对人肺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨半夏总生物碱(total alkaloids from Pinellia Ternata,TATP)对人肺癌细胞株A549增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对A549细胞株的生长抑制作用。应用单细胞凝胶电泳分析检测TATP导致A549细胞的DNA损伤情况。结果人肺癌细胞A549经TATP处理后,其体外增殖能力明显下降且与药物的剂量、加药时间呈正相关,与对照组比较,差异均有统计学意义。单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组相比差异显著(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养的条件下,TATP能明显抑制A549细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。

机械拉伸波形及频率对肺腺癌细胞增殖的影响

通过FX-4000柔性基底加载系统研究了不同波形及频率的周期性机械拉伸对人肺腺癌A 549细胞株增殖的影响,应用Im age-P ro图像处理软件对A 549细胞株在心形波、三角波及方波等拉伸应变下的增殖动力学变化进行了分析。实验表明:在co llagenⅠ基底膜上,应变0-25%,频率为20次/m in、40次/m in及60次/m in,加载时间为2 h时,与对照组比较,方波刺激组细胞生长明显受到抑制,三角波刺激组细胞增殖率无明显差异,心形波刺激组细胞增殖加快。研究表明:A 549细胞株对体外的生理应变作出响应时,方波与60次/m in频率的组合刺激抑制作用最佳,且加载时间越长抑制效果越好。可见,波形与频率的合理组合在抑制人肺腺癌细胞增殖的过程中起着重要作用。

槲皮素对IL-1β刺激肺上皮细胞表达ICAM-1的影响

目的:研究槲皮素对重组人白介素-1β(IL-1β)刺激肺上皮细胞株A549细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响,并探讨可能的分子机制。方法:IL-1β处理A549细胞,用不同浓度槲皮素干预;RT-PCR法检测ICAM-1 mRNA的表达;Western blotting检测核转录因子NF-κB及其抑制剂IκB的表达。结果:IL-1β能刺激A549细胞表达ICAM-1,这种现象可以被槲皮素抑制,并有一定浓度依赖关系,IL-1β可增加NF-κB的活化,抑制IκB的表达,而槲皮素作用后,NF-κB活化抑制,IκB表达增加。结论:槲皮素通过调节NF-κB的活化而抑制IL-1β诱导A549细胞表达ICAM-1,提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用。

沉默血管生成素-2表达对人肺腺癌细胞生物学特性的影响

背景与目的促血管生成素-2(Ang-2)是一类调节血管生成的重要细胞因子,与肿瘤的发生发展有密切的联系。本研究通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制肺腺癌细胞A549 Ang-2的表达,观察其对癌细胞生物学特性的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对Ang-2的小干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(AAV-Ang-2shRNA),转染A549细胞,同时以正常A549细胞及其转染空病毒(AAV-Null)的A549细胞作为对照,观察RNAi沉默Ang-2表达在体外及体内对A549细胞生长、致瘤、增殖、凋亡及肿瘤微血管密度的影响。结果体外实验结果表明重组腺相关病毒转染A549细胞48 h后Ang-2蛋白表达比对照组明显降低(P<0.001);细胞生长明显减慢(P<0.001)。RNA干扰后A549细胞细胞周期分析结果提示A549细胞对照组、AAV-Null对照组和AAV-Ang-2shRNA实验组的增殖指数(proliferation index,PI)分别为0.51±0.43、0.48±0.29和0.26±0.31。AAV-Ang-2shRNA实验组与对照组比较,PI明显减少(P=0.001)。体内实验结果表明,AAV-Ang-2shRNA实验组在胸腺缺陷小鼠成瘤体积、瘤质量均明显低于两对照组(P<0.01)。各组微血管密度分析结果分别为46.4±13.1、44.2±13.6和34.9±12.8;AAV-Ang-2shRNA实验组肿瘤组织内新生血管数目明显低于对照组(P<0.001)。各组凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为(5.98±3.11)%、(7.51±4.42)%及(17.06±7.43)%。AAV-Ang-2shRNA组比PBS组、AAV-Null组凋亡百分率明显增高(P=0.005,P=0.007)。各组细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性表达率分别为(92.75±9.7)%、(85.8±11.8)%、(69.8±16.5)%;AAV-Ang-2shRNA组PCNA指数低于两对照组(P=0.014,P=0.021)。结论腺相关病毒介导的siRNA表达能明显抑制A549细胞中Ang-2的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

周期性拉伸参数对肺腺癌细胞增殖的影响

通过FX-4000基底加载系统研究了在不同波形、频率、循环数及拉伸幅度下周期性拉伸应变对人肺腺癌 A549细胞株生长增殖的影响,应用Image-pro软件对A549细胞的增殖动力学变化进行了分析．实验表明: (1)在laminin基底膜上,应变0％-15％,加载时间2 h,方波拉伸组细胞增殖率(PR)明显降低,正弦波、心形波及三角波拉伸组细胞PR与对照组比较无明显差异;(2)方波作用下,0．5Hz及1．0Hz频率组细胞增殖明显受到抑制,0．3Hz及0．7Hz频率组细胞PR与对照组比较无明显差异; (3)方波作用下,幅度为15％, 20％及25％的拉伸组与对照组比较细胞PR均无明显差异．研究表明: A549细胞株对体外的生理应变作出响应时,方波作用下1．0 Hz频率组的抑制作用最明显,且加载时间越长抑制作用越强．

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量(补中益气汤1.134 g/mL,2 mL)、中剂量(补中益气汤0.576 g/mL,2 mL)、低剂量(补中益气汤0.284 g/mL,2 mL)含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高(P<0.05);10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低(P<0.05),逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低(P<0.05),与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低(P<0.05)。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。