鸭肝炎病毒A66弱毒株的水平传播感染

取10倍免疫剂量的鸭肝炎弱毒活疫苗(A66株),分别经皮下注射和口服途径接种1日龄易感雏鸭20只,5 d后每组取出接种鸭10只分别与20只1 d龄易感雏鸭共同饲养进行第1代同居感染试验,5 d后取第1代同居感染试验鸭10只再与20只1 d龄易感雏鸭共同饲养进行第2代同居感染试验,如此进行5次同居感染试验。定时采集各代次同居感染试验鸭的泄殖腔内容物进行PCR检测,测定鸭肝炎病毒A66弱毒株水平感染能力和排毒情况,并通过对各代次同居感染试验鸭的攻毒试验,测定水平感染的免疫保护作用。结果表明:鸭肝炎弱毒活疫苗(A66株)经皮下注射和口服途径接种雏鸭,均可以通过粪便向体外排泄病毒;同居易感雏鸭可接触感染,感染的雏鸭可获得一定的免疫保护作用;但这种同居感染能力随着同居代次的增加而逐渐减弱,至5代时基本终止。试验结果表明A66毒株可引起雏鸭间的水平传播感染,但这种水平传播能力有限,不会引起毒力返强。

鸭肝炎病毒A_(66)株部分cDNA文库的构建与序列分析

本研究根据已发表的小核糖核酸病毒(picornavirus)核苷酸序列设计4对引物。以RNAiso Reagent试剂抽提含DHV A66鸡胚尿囊液总RNA,用TakaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver3.0试剂盒进行RT-PCR扩增,将所得PCR产物回收并克隆于pMD18-T载体、转化感受态细菌DH5а,利用氨苄青霉素筛选阳性克隆子,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切鉴定重组质粒。取重组阳性质粒进行测序,测序结果与近期GenBank登录的3株Ⅰ型DHV核苷酸序列比对,结果显示与03D株、H株、5886株鸭肝炎病毒的核酸序列同源性分别为96.8%、96.3%、96.2%,表明成功构建了DHV A66株部分cDNA文库。

鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株的研究

鸭肝炎病毒I型A_(66)鸡胚化弱毒株,对雏鸭安全、稳定.鸡胚混合毒滴度为10^(7.36-8.09)CELD50/0.1毫升.以1.8万DLD50/0.1毫升的强毒攻击,其半数免疫量为10^(6.16)MID50/0.1毫升;皮下注射的免疫产生期为接种后48小时.免疫持续期测至45天,全部保护.用本弱毒苗免疫雏鸭,可预防I型鸭病毒性肝炎的发生.以该弱毒苗高度免疫成年鸭或猪血制备的抗血清,对雏鸭能产生坚强的被动免疫力.