奥利万星中间体A82846B产生菌拟孢囊菌CCTCC M2020063全基因组序列分析与mbtH类基因的验证

【目的】分析荒漠拟孢囊菌CCTCC M2020063中A82846B合成的代谢途径和关键基因。【方法】使用Illumina二代测序和PacBio三代测序技术对荒漠拟孢囊菌CCTCC M2020063进行全基因组测序,利用Glimmer预测编码序列,使用HPLC和LCMS鉴定次级代谢产物,使用antiSMASH 5.0软件预测次级代谢产物合成基因簇。利用Geneious软件对A82846B合成相关基因进行分析,对其中的mbtH类基因着重分析。【结果】本实验菌株鉴定为荒漠拟孢囊菌(Kibdelosporangium aridum),基因组中有一条线性染色体,无质粒,序列全长12475688 bp,GC含量为66.27%,有11900个开放阅读框,共有47个基因簇。该菌株具有合成A82846B的能力,且生物合成相关基因位于Cluster32,包含33个基因,mbtH类基因gene07864的过表达促进A82846的合成,提升了26.42%,卤化酶基因为gene07859,与万古霉素、巴利霉素的卤化酶相似度较高。【结论】本研究对荒漠拟孢囊菌CCTCC M2020063进行了基因组序列分析,获得了A82846B生物合成相关的功能基因信息,为A82846B的代谢途径和工程改造提供了强有力的基础。

奥利万星中间体A82846B的菌种选育与培养基优化

以东方诺卡菌Nocardia orientalis HS807-N-1287为出发菌株发酵生产奥利万星中间体A82846B(1),通过常压室温等离子体(ARTP)诱变,在含1自身抗性、酪氨酸抗性平板进行菌种筛选,获得1株高产突变株HS807-A-639。优化发酵培养基的碳源、氮源和微量元素,确定最佳摇瓶发酵培养基配方为(g/L):葡萄糖15.0,麦芽糊精40.0,玉米淀粉20.0,糖蜜12.0,水解酪蛋白6.0,酪氨酸1.0,酵母抽提粉5.0,热榨黄豆饼粉20.0,棉籽饼粉10.0,氯化钠0.6,碳酸钙2.8,四水硫酸锰0.1,六水氯化钴0.05。使用改良后发酵培养基,以该高产突变株在50 L发酵罐中培养192 h,同时补加酪氨酸,1产量达到1 671 mg/L。