生物法合成AA-2G的菌种产酶条件及转化方法研究

采用生物转化的方法,以L-抗坏血酸和糖基供体为底物,采用保藏菌种反硝化利斯特氏菌SHⅢA为环麦芽糊精聚糖糖基转移酶产酶菌种,并设计实验,以期对生产AA-2G的各影响因素进行考察.研究结果表明:菌种的最佳产酶条件为:麦芽糖为碳源,蛋白胨作为氮源,金属离子为Cu2+,pH值为10,培养温度为35℃,接种量为10%.AA-2G的最佳合成条件为:以质量分数为33%的β-环糊精作为糖基供体,以质量分数为22%的L-抗坏血酸作为底物,温度20℃下反应30 h,AA-2G产量可达8.60 g/L.

α-环糊精葡萄糖基转移酶的高效表达及酶法制备AA-2G条件优化

目的构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-Cyclodextrin Glycosyltransferase,α-CGTase)的重组菌株,并利用该酶液制备AA-2G。方法经PCR扩增浸麻芽孢杆菌154基因组获得α-CGTase基因序列,将该基因序列和p ET26b载体分别经Nco I、Xho I双酶切后用T4 DNA连接酶连接,并转化大肠杆菌BL21。利用发酵培养基分泌表达α-CGTase,利用该酶和淀粉糊精、维生素C反应制备AA-2G,并进行制备条件优化。结果在大肠杆菌中实现了α-CGTase的胞外分泌表达,胞外环化酶活力达到120 U/m L,利用该酶的转糖基反应将淀粉糊精、维生素C转化为AA-2G,经HPLC检测正确。结论利用自制α-CGTase得到了AA-2G,通过制备条件优化AA-2G产量为17.46 g/L,转化率达到58.2%(mg/mg)。

10-HDA联合AA-2G对成纤维细胞光损伤的保护作用

目的:探讨10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)联合L-抗坏血酸2-葡糖苷(AA-2G)对长波紫外线(UVA)诱导的成纤维细胞光损伤的保护作用。方法:将原代培养人皮肤成纤维细胞分为空白对照组、UVA照射组、10-HDA+AA-2G组。通过细胞增殖活性测定、细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色、活性氧(ROS)检测观察10-HDA+AA-2G对UVA诱导的细胞毒性、细胞衰老状态及活性氧簇(ROS)水平的影响。结果:与空白对照组相比,UVA照射组的细胞增殖活性明显下降(P<0.05),SA-β-gal阳性细胞的数量和ROS水平均显著上升(均P<0.01)。与UVA照射组相比,10-HDA+AA-2G组的细胞增殖活性显著上升(P<0.01),SA-β-gal染色阳性细胞和ROS水平明显下降(分别为P<0.05和P<0.01)。结论:10-HDA+AA-2G可以抑制UVA诱导的细胞毒性、细胞衰老和ROS升高,提示其对UVA诱导的成纤维细胞光损伤具有保护作用,可能成为一种防治皮肤光老化的有效组合。

响应面法优化酶法转化合成维生素C糖苷(AA-2G)条件的研究

采用Design-Expert软件的Central Composite Design(CCD)响应面设计对环糊精葡萄糖苷转移酶转化合成糖基抗坏血酸(AA-2G)的五个主要因素(转化时间、转化温度、pH、V_C浓度、β-环糊精浓度)进行了研究。采用降维分析方法对pH与转化时间、转化温度、V_C浓度、β-环糊精浓度以及反应温度与反应时间的交互作用对酶法转化合成AA-2G的影响进行了分析。建立了影响因素与响应值之间的回归方程,根据回归方程优化得到最佳转化条件为:转化时间25 h,温度36.5℃,pH 5.4,Vc 72 g/L,β-环糊精55 g/L。在此条件下,AA-2G的理论产量为10.06 g/L,在验证实验中AA-2G的产量为9.76 g/L,与预测的理论产量接近,比优化前提高了33%。

酶法合成2-氧-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)条件的研究

采用单因素优化法对环糊精葡萄糖苷转移酶(CGTase)合成糖基抗坏血酸(AA-2G)条件进行优化,AA-2G的产量为2.76 g/L,比未优化前0.46g/L提高了500%。再采用响应面法对AA-2G合成条件进行优化。由Plackett-Burman法筛选出三个主要因素为:pH、V_C和麦芽糊精浓度;由最陡爬坡实验得出最佳响应面区域;最后由Box-Behnken实验,得到最优条件为:pH 5.51,V_C36.16g/L,麦芽糊精28.54 g/L,转化时间24 h,温度37℃。在此条件下,AA-2G的理论产量为3.15 g/L,通过验证实验,得出AA-2G的产量为3.13 g/L,与预测的理论值接近,比单因素优化的结果(2.76g/L)提高了14%。

蔗糖磷酸化酶全细胞催化AA-2G的条件优化

目的:使用表达蔗糖磷酸化酶(EC 2.4.1.7,Sucrose phosphorylase,SPase)的大肠杆菌重组工程菌E.coli BL21/pET-spase,作为全细胞催化剂,合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)。通过反应条件的优化研究,提高AA-2G的收率。方法:分别考察菌体量、缓冲液pH、蔗糖浓度、维生素C浓度、反应时间和温度对AA-2G合成反应的影响,再组合上述最佳条件进行反应。AA-2G的产量使用高效液相色谱法进行定量。结果:最佳反应条件为:菌体量15 mg/mL,缓冲液pH 4.5,蔗糖浓度100 g/L,维生素C浓度175 g/L,反应时间20 h,温度37℃。在此条件下,AA-2G产量达到了35.7 g/L。结论:以蔗糖为底物,使用SPase合成AA-2G的研究报道较少。本研究通过优化此方法的反应条件,让AA-2G的产量得到了大幅提高。同时本研究中成功地采用了大肠杆菌工程菌作为全细胞催化剂,这比传统的使用粗酶液的方法更省时省力,有良好的应用潜力。

2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸研究进展

维生素C(又称抗坏血酸)是一种水溶性维生素,对人体健康有重要作用。抗坏血酸在食品、医疗、化妆品等行业上有广泛的应用价值,但由于自身的不稳定性,易被氧化降解,严重影响其应用。为解决这个问题,对稳定的抗坏血酸衍生物的研究成为国内外专家学者的研究热点。抗坏血酸的一种重要衍生物——2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸(AA-2G),作为抗坏血酸的替代品,稳定性显著提高,具有很好的开发应用价值。国内外针对该物质进行了诸多的研究,本文就AA-2G生物合成和应用的国内外最新研究进展进行总结概括。

生物转化法生产2-O-α-D-吡喃型葡萄糖基L-抗坏血酸的研究进展

介绍了利用生物转化法合成L 抗坏血酸新型衍生物 2 O α D 吡喃型葡萄糖基 L 抗坏血酸 (AA 2G)的生产方法及其分离纯化方法 ,并对AA

新抗氧化剂2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的研究进展

新抗氧化剂2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)是源于枸杞子的生物活性物质,本文从AA-2βG的抗氧化活性、生产方法等方面综述了其研究进展。通过4种抗氧化能力测试法比较L-抗坏血酸(L-AA)及其衍生物AA-2βG、2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2αG)的抗氧化活性,发现AA-2βG比L-AA更稳定,抗氧化能力较L-AA持久温和,对机体刺激性小,可长时间存在于体内直接发挥抗氧化活性,亦能被β-葡萄糖苷酶水解,释放L-AA发挥作用。通过比较AA-2βG的生产方法,发现生物法具有步骤简单,产物更易被消费者接受等优点。

维生素C葡萄糖苷的研究现状及发展前景

维生素C葡萄糖苷是卫生署公布认可的美白添加剂之一,利用糖基转移酶的特异性转糖基作用进行生物转化合成是目前维生素C葡萄糖苷的唯一生产途径。对维生素C葡萄糖苷的生产方法进行了讨论,着重阐述了其制备(生物转化合成法)、纯化及结晶三大生产工艺的国内外研究现状,指出国内实现维生素C葡萄糖苷工业化生产的发展方向。

酶法生产葡萄糖基维生素C的产酶条件及转化条件优化

本课题采用单因素实验确立微生物发酵法产糖基转移酶培养基的基本成分,利用此酶催化维生素C和糖基供体生成葡萄糖基维生素C(AA-2G),并通过正交实验考察不同底物,加酶量、反应温度、pH等因素,确立葡萄糖苷转移酶合成产物的最佳条件为:以CMC-Na作为葡萄糖基的供体,浓度为0.04mol/L维生素C作为受体,酶量是25mL,pH值4.0,温度60℃下反应16h。

高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物

建立了化妆品中维生素 C及其3种衍生物（抗坏血酸葡糖苷（ AA-2G）、抗坏血酸磷酸酯镁（ AA-2P）、抗坏血酸乙基醚（ Only VCE））的高效液相色谱分析方法。化妆水、水乳液等含油脂较少的样品先采用30 mL 0.02 mol／L磷酸二氢钾溶液（ pH 3.0）直接提取，然后定容至50 mL；面膏等含油脂较高及凝胶类、啫喱类的样品先加入1.0 mL二氯甲烷分散均匀后再加25 mL 0.02 mol／L磷酸二氢钾溶液（ pH 3.0）提取。提取液在12000 r／min下离心后用0.22μm滤膜过滤。样品分析采用 YMC-Triart C18色谱柱，以0.02 mol／L磷酸二氢钾溶液（ pH 3.0）和甲醇溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL／min，柱温为25℃，使用二极管阵列检测器（ DAD）检测，检测波长为250 nm，外标法定量。结果显示：4种化合物在其线性范围内线性关系良好，相关系数（ r2）均大于0.9999；方法的定量限（以信噪比为10计）为0.04～0.08 g／kg；添加水平为0.25～5.0 g／kg时的回收率为95.6％～101.0％，相对标准偏差为0.62％～3.0％。该方法前处理简单、回收率高、精密度好，适用于化妆品中维生素 C及其衍生物的测定。